• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제18권8호
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• pp.1475-1481
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• 2008

B3 antibody specifically binds the $Lewis^Y$-related carbohydrate antigen of many carcinomas, and it is used as a model antibody in this study. In a previous study, the Fab fragment of the antibody was fused to a 38 kDa truncated form of Pseudomonas exotoxin A, PE38, to make Fab-PE38, where PE38 is fused to the Fd fragment of the Fab domain. This parent monomer molecule, Fab-PE38, had no cysteine in the hinge region, and it could not make a disulfide bond to form a disulfide bond bridged homodimer. In this study, we constructed three different kinds of divalent Fab-toxin fusion homodimers where the toxin is fused to the light chain of Fab, $(Fab-PE38fl)_2$. In addition to the PE38 toxin fused to the light chain, these three molecules have different hinge sequences hi, h2, and h3 making Fabh1-, Fabh2-, and Fabh3-PE38fl monomers, respectively. These hinges contain only one cysteine on different positions of the hinge sequence. The disulfide bond between the hinge region of two monomers forms homodimers $(Fabh1-PE38fl)_2$, $(Fabh2-PE38fl)_2$, and $(Fabh3-PE38fl)_2$. The refolding yields of these dimers were 5-16-fold higher than a previously constructed dimer where the PE38 was fused to the Fd fragment $(Fabh2-PE38)_2$ [8]. Our data suggest that the steric repulsion between the two PE38s in $(Fabh1-PE38)_2$ during disulfide bridge formation is relieved by fusing it at the end of the light chain. The best cytotoxicity value of these dimers showed about 2.5-fold higher on an MCF7 cell line than that of the monovalent reference molecule in ng/ml scale, which is 15-fold higher in pM scale.

• 한국식품과학회지
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• 제32권3호
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• pp.538-543
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• 2000

가열 처리된 우육, 돈육, 계육, 양육과 염소육과의 종판별을 위한 효소면역측정법(ELISA)을 확립하기 위하여 염소육을 $98^{\circ}C$에서 15분간 열처리해서 추출액을 분리하였다. 열에 안정한 주요 단백질(TS)은 분자량이 36과 38kDa이었고 두 분자량대의 단백질의 pI값은 4.5로 확인되었으며 면역원으로 사용하기 위해 이온교환 (DEAE-Sephadex A-50)과 겔 여과(Sephadex G-75) 크로마토그래피로 정제하였다. 분리, 정제된 TS단백질을 토끼에 면역하여 염소육에 대해 특이성을 갖는 항체를 생산하고 항TS 항체를 이용하여 간접경합 ELISA를 확립하였다. 항TS 항체는 가열 처리된 계육, 우육, 돈육, 양육과는 반응성이 전혀 없었고 동일하게 처리된 염소육과 지표단백질인 TS에만 반응성을 보였다. 따라서, 본 연구에서 확립한 간접경합 효소면역측정법은 가열 처리된 육류 중 염소육 판별에 웅용 가능함을 시사하였다.

• 대한수의학회지
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• 제48권4호
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• pp.431-440
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• 2008

Brucellosis is one of the most important zoonosis in worldwide. As one of the control measures, attempts have been made to develop new diagnostic methods using filed isolates as a national policy in many countries. Currently, bovine brucellosis in Korea have been received attention in both public health and economical aspects due to sudden increase of outbreak. Based on the situation, we compared standard strain (B. abortus 1119-3) with field isolates to reveal the differences among them. Biological and biochemical charateristics, antibiotic resistance profiles, outer membrane proteins (OMPs) and lipopolysaccharide analysis of the strains were included in this study. For the diagnostic purpose, an attempt was made to find out a novel antigen from the Korean isolates by serological analysis. There were differences about 55 kDa, 36-38 kDa and 20 kDa in analysis of OMPs by SDS-PAGE and Western blot with positive sera ($\geq$ 1:400 in SAT titer). Also, a serological diagnostic method, ELISA was conducted using OMPs of the strains as novel antigen. Relationships between O.D. and SAT titer were analyzed using field sera showing different SAT titer. High correlation coefficient was observed between SAT titer and ELISA. Results from this study suggested that a new diagnsotic method should be developed using their own field isolates in each country.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제53권4호
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• pp.389-400
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• 2002

배 경 :결핵의 조기치료와 전염방지를 위해서 신속하고 간편한 결핵진단법의 개발이 요구되고 있는 실정에서 결핵균에 특이한 38-kDa단백을 포함하여 금 콘쥬게이트에 결합된 유전자재조합 항원을 혈청과 반응시켜 항결핵 항체를 발견하도록 고안된 카드형태의 혈청학적 진단기법인 Xeniss Rapid TB kit가 결핵의 진단에 유용하게 이용될 수 있는 지를 알아보고자 하였다.방 법 :188명의 결핵환자(폐결핵 177명, 폐외결핵 11명)와 82명의 접촉자, 그리고 57명의 건강한 성인을 대상으로 하였으며, 연구대상자의 혈청을 이용하여 Xeniss Rapid TB kit의 민감도, 특이도, 양성예측율, 그리고 음성예측율을 조사하였다. 결 과 : 전체적인 민감도는 73.9%, 특이도 81.3%, 양상예측율 84.2%, 그리고 음성예측율은 85.8%였다. 진단시점부터 검사시점간의 시간간격에 따라서는 1개월 이내에서 61.5%로 가장 낮고 점차 증가하여 4-6개월 시점에 94.4%로 가장 높았으며 이후 점차 감소하여 12개월 이상 경과한 시점에서는 67.4%의 양성반응율을 보였다. 페외결핵 환자(90.9%)에서는 폐결핵 환자(72.8%)보다 양성반응율이 높았다. 객담도말양성 (76.2 대 68.4%), 방사선 사진상 중증 (79.3 대 63.3%), 공동성 병소(75.7 대 70.0%), 과거 치료력 (76.3 대 73.3%)이 있는 환자군에서 상대적으로 높은 양성반응율을 보였으며, 당뇨병을 동반한 환자군(69.0 대 74.8%)과 노인환자군(68.l 대 100%)에서는 상대적으로 낮은 양성반응율을 보였다. 건강성인군 7.0%, 환자가족군 17.5%에 비해 병원직원군에서 57.9%의 양성반응율을 보여 활동성 결핵환자와 장기간 지속적으로 접촉한 군에서 높은 양성반응율을 보였다. 결 론 : Xeniss Rapid TB kit는 신속하고 간편하며, 민감도와 특이도가 비교적 높고 특히, 폐외결핵에서는 높은 양성반응율을 보여 폐결핵, 폐외결핵, 그리고 감염자의 진단에 보조적 검사법으로 유용하게 이용될 수 있을 것으로 생각된다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제49권5호
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• pp.558-567
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• 2000

배경 : 현행 도말 및 배양 등의 미생물학적 검사법의 제한점을 보완할 수 있는 신속하고 간편한 결핵진단 방법의 하나로서 가장 많이 연구되어 온 분야가 혈청학적인 방법이다. 이 중 현재까지 결핵의 혈청학적 진단에 유용성이 높은 것을 평가되는 항원의 하나가 38-kDa으로 대표되는 결핵균 분비항원이다. 이 38-kDa을 주항원 성분으로 하여, 간편하게 실험할 수 있도록 kit화된 수입제품이 국내에서 널리 시판되고 있는 실정에서 국내의 회사에서 개발한 ELISA kit(Erum Biotech Co.)를 이용하여 폐결핵의 혈청학적 진단이 얼마나 유용한 지를 평가하고자 하였다. 방법 : 도말 및 배양검사장 균양성으로 진단된 후 항결핵치료를 받고 있는 폐결핵환자 333명(검사당시 균양성 환자 212명, 균음전된 환자 121명), 건강 성인 80명, 그리고 국립마산결핵병원에서 1년 이상 근무하며 환자와 접촉을 자주 하게되는 접촉군 61명 등 총 474명을 대상으로 하여 결핵의 혈청학적 진단용 ELISA kit를 이용하여 시험하였다. 결과 : 1) 균양성 활동성 폐결핵환자 212명에 대한 ELISA kit의 양성반응률은 82.1%, 균음성 활동성 폐결핵환자 121명에 대한 양성반응률은 73.6%로 이 두 군 사이에는 통계학적으로 유의한 차이가 없었다(p>0.05). 2) 접촉 대조군 61명에 대한 양성반응률은 14.8%, 건강 대조군 80명에 대한 양성반응률은 2.5%로 이 두 군 사이에는 통계적으로 유의한 차이가 있었다(plt;0.001). 3) 활동성 폐결핵환자 333명 모두에 대한 양성반응률은 78.90%, 대조군 141명 모두에 대한 양성반응률은 7.8%로 이 두 군 사이에는 통계적으로 유의한 차이가 있었다(p<0.001). 4) ELISA kit의 민감도는 78.9%, 특이도는 97.5%였으며, 유병율이 60.1% 수준일 때의 양성예측율은 96.1%, 음성예측율은 65.0%였다. 결론 : ELISA kit는 민감도나 특이도 면에서 수입시판되고 있는 ICT와 비교할 때 비슷한 결과를 보이며, 전통적으로 결핵을 진단하는 데 사용하던 흉부 X-선 사진, 항산균 염색 및 배양 등과 함께 보조적인 도구로 사용 할 수 있을 것으로 생각된다.

• Journal of Veterinary Science
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• 제22권3호
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• pp.38.1-38.17
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• 2021

Background: The feline viral rhinotracheitis, calicivirus, and panleukopenia (FVRCP) vaccine, prepared from viruses grown in the Crandell-Rees feline kidney cell line, can induce antibodies to cross-react with feline kidney tissues. Objectives: This study surveyed the prevalence of autoantibodies to feline kidney tissues and their association with the frequency of FVRCP vaccination. Methods: Serum samples and kidneys were collected from 156 live and 26 cadaveric cats. Antibodies that bind to kidney tissues and antibodies to the FVRCP antigen were determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and kidney-bound antibody patterns were investigated by examining immunofluorescence. Proteins recognized by antibodies were identified by Western blot analysis. Results: The prevalences of autoantibodies that bind to kidney tissues in cats were 41% and 13% by ELISA and immunofluorescence, respectively. Kidney-bound antibodies were observed at interstitial cells, apical border, and cytoplasm of proximal and distal tubules; the antibodies were bound to proteins with molecular weights of 40, 47, 38, and 20 kDa. There was no direct link between vaccination and anti-kidney antibodies, but positive antibodies to kidney tissues were significantly associated with the anti-FVRCP antibody. The odds ratio or association in finding the autoantibody in cats with the antibody to FVRCP was 2.8 times higher than that in cats without the antibody to FVRCP. Conclusions: These preliminary results demonstrate an association between anti-FVRCP and anti-cat kidney tissues. However, an increase in the risk of inducing kidney-bound antibodies by repeat vaccinations could not be shown directly. It will be interesting to expand the sample size and follow-up on whether these autoantibodies can lead to kidney function impairment.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제34권4호
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• pp.247-254
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• 1996

임상증상 없이 검변을 통하여 검출된 이질아메바 포낭양성자를 어떻게 다루어야 할지 오랫동안 논란이 있었으나 이중에서 병원성이 강한 이질아메바(E. histolytica)만 치료하고 병원성이 없는 동형아메바(E. dispar)는 치료하지 않는 것으로 의견이 모아져 있다. 따라서 이 두 종을 감별하는 것이 실제적으로 중요하게 되었고 이를 위하여 동위효소 분석 유전자 분석. 혈청학적인 검사가 가능하다. 그러나 앞의 두 분석법은 원충을 배양하여야 가능하기 때문에 적용하기 어려운 경우가 많아 혈청학적인 감별이 실제적으로 유용하다. 이 연구는 우리 나라에서 무균배양에 성공한 이질 아메바 YS-27의 항원성을 확인된 아메바 감염자 혈청과 면역이적법으로 검증하고. 이를 이용하여 무증상 포낭배출자에서 두 종의 감염을 감별하고자 하였다. 시스테인계 단백질분해효소 억제제인 E64를 첨가한 이질아메바의 항원은 117. 110. 99. 68. 66. 60. 54. 52 46. 45 kDa 분획이 이질아메바 감염이 확인된 사람의 혈청내 IgG 항체와 반응하였고 동형아메바 대장아메바 Beastnystis 및 대조군의 혈청과는 117 kDa 분획이 미약하게 반응하였다. 포낭양성자의 혈청내 IgA 항체와 많은 분획이 반응하였으나 두 종 양성자간에 차이가 없었고 혈청내 IgM과 IgE 항체와 반응하는 분획이 없었다. 동형아메바의 항원은 두 종 양성자 혈청내 모든 군의 항체와의 반응에서 두종을 감별하지 못하였다. 따라서 이질아메바의 항원과 혈청내 IgG 항체 반응이 두 아메바 감염 을 감별할 수 있었다. 증상이 없는 포낭배출자 24명의 혈청을 면역이적 반응시킨 결과 2명에서 46 과 45 kDa 분획을 제외한 다른 모든 분획과 반응하여 이질아메바 감염자로 확인하였고 22명은 동 형아메바 양성자로 확인하였다. 이 자료를 토대로 하면 우리 냐라에서 검출되는 단순 포낭배출자 의 90% 이상은 이질아메바가 아니라 동형아메바 감염자이고. 이에 따라서 포낭양성자 중 환자가 많지 않은 사실을 설명할 수 있을 것이다. 이질아베바 조항원을 이용한 면역이적법은 증상이 없는 아메바 포낭배출자 중 치료를 꼭 필요로 하는 사람을 찾아내는 방법으로 유용함을 확인하였다.

• 대한바이러스학회지
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• 제28권1호
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• pp.31-38
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• 1998

In Korea, all domestic made test systems for detecting antibodies in HIV-1 contain the antigens from human immunodeficiency type 1 (HIV-1) subtype B. However, because HIV-1 subtype O is significantly different in amino acid sequences from all other subtypes of HIV-1, there has been a need for developing a test for detecting antibodies in subtype O. For this purpose, the entire nucleotide sequence corresponding to the extracellular domain of the transmembrane glycoprotein of HIV-1 subtype O was synthesized with consideration of Escherichia coli condon usage. Various regions of the extracellular domain were cloned into E. coli expression vectors and tested for levels of protein production. The nucleotide sequence, named ECTM, that can encode a 129 amino acid-long peptide, was found to be expressed at a high level in E. coli. The protein of approximately 17 kDa specifically reacted with sera from individuals infected with HIV-1 subtype O. The ECTM protein was purified to near homogeneity by the CM-T gel chromatography, using concentrated, denatured inclusion bodies. In Western blot analysis, the purified viral antigen reacted with sera from individuals infected with subtype O more efficiently than subtype B. The enzyme linked immunoabsorbent assay (ELISA) system was developed using the subtype O viral protein and compared with the commercially available kit lacking the antigens from subtype O. The ELISA kit containing the subtype O antigen ECTM alone efficiently reacted with sera from individuals infected with subtype O. The subtype O antigen-containing kit produced a positive absorbence even when sera were diluted 512-fold, suggesting a high sensitivity. The commercially available kit also reacted with subtype O sera, but produced a negative result at a dilution of 8-fold. Our results suggest that the currently available kit may not be able to efficiently detect subtype O sera and that the viral protein developed in this study may be added to the current system to maximize the detection of sera from individuals infected with subtype O.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제46권4호
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• pp.473-480
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• 1999

배 경: 우리 나라는 결핵의 유병률이 높기 때문에 간편하고 민감도가 높은 결핵 진단 방법이 필요하나, 결핵균의 특정한 균체 항원에 대한 항체 생성의 정도가 지역마다 다르고, 국가별로 BCG 예방 접종에 대한 정책이나 결핵의 유병률이 다르므로 우리 나라의 경우에도 외국에서 개발된 혈청 항체 검사 kit를 결핵 환자의 진단에 이용할 수 있을지 알 수 없다. 그래서 38-kDa 단백을 포함한 5가지 항원을 nitrocellulose 막에 고착시킨 항체 검사 kit인 ICT가 최근 소개되었기에 이를 이용한 항체 검사가 결핵의 진단에 유용하게 이용될 수 있는지를 알아보고자 하였다. 방 법: 결핵 환자군으로 진단 당시 과거력상 결핵 병력이 없는 초발 결핵 환자 37명, 과거의 결핵 병력이 있고 초치료에 실패했거나 완치 후 재발한 환자 31명과, 건강 대조군으로 건강 성인 25명, 병원의 결핵균 노출 지역 근무자 35명, 비결핵 호흡기 질환 환자 17명의 혈청으로 ICT 검사를 실시하여 결핵 진단의 민감도와 특이도를 확인하였다. 결 과: 결핵 초발 환자 (37명), 재발 환자 (31명)는 각각 73, 87%의 민감도를 보였다. 진단 당시의 항산균 염색 음성인 환자 (15명) 중 73%, 염색 양성인 환자 (53명) 중 81%에서 ICT 항체 양성을 보였다. 결핵성 뇌막염, 결핵성 림프절염 등 폐외결핵 환자 2명은 모두 ICT 항체검사에서 양성이었다. 건강 성인 (25명), 결핵균 노출 지역 근무자 (35명), 비결핵 호흡기질환 환자 (17명)는 각각 88%, 94%, 94%의 특이도를 보여 전체적으로 특이도 92%였다. 결 론: ICT 항체 검사는 38-kDa 항원을 포함한 5가지 항원을 막에 부착시켜 항체를 검사함으로써 결핵을 진단하는 kit로, 별도의 장비가 필요없이 간편하고 쉽게 수행할 수 있으며, 결핵의 진단에 73%의 민감도, 92%의 특이도를 보여서 전통적으로 결핵을 진단하는데 사용하던 X-선, 항산균 염색, 배양과 함께 보조적인 도구로 사용하면 폐결핵의 진단에 도움을 줄 수 있을 것으로 생각된다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제47권3호
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• pp.311-320
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• 1999

연구 배경 : 최근 전세계적으로 결핵이 증가하며 새로운 문제로 대두되고 있으며, 특히 결핵의 유병률이 높은 우리나라의 경우에는 민감도가 높으며 간편한 검사방법 이 필요하다. M. tuberculosis 항원을 사용한 rapid membrane based assay 검사 방법으로 최근에 폐결핵 환자의 결핵항원 특이 항체를 검출한다고 알려진 상용화된 2 가지 kit를 이용하여 폐결핵의 혈청학적 진단 가능성을 알아보고자 하였다. 방법 : 1998년 3월부터 9월까지 충남대학교 병원에서 입원 치료를 받은 호흡기 환자 총 45예를 대상으로 하였다. 객담 도말 양성의 활동성 폐결핵 22예와 비활동성 폐결핵 14예 그리고 대조군으로 비결핵성 호흡기 질환 9예를 대상으로 하여 STAT-PAK ULTRA FAST$^{(R)}$ 및 ICT tuberculosis$^{(R)}$ 검사를 실시하여 결핵 혈청 검사의 유용성을 알아보고 자하였다. 결과: STAT-PAK ULTRA FAST$^{(R)}$의 경우에는 폐결핵과 비활동성 폐결핵의 비교에서 민감도는 77.3%, 28.6%, 양성 63.0%, 음성 예측도는 44.4%, 위양성률은 71.4%, 위음성률은 22.7% 이었고, 활동성 폐결핵과 비결핵성 호흡기 질환의 비교에서는 민감도는 77.3%, 특이도는 33.3%, 양성 예측도는 73.9%, 음성 에측도는 37.5%, 위양성률은 66.7%, 위음성률은 22.7% 이었다. ICT tuberculosis$^{(R)}$의 경우에는 활동성 폐결핵과 비활동성 폐결핵의 비교에서는 민감도는 54.5%. 특이도는 57%, 양성 예측도는 66.7%, 음성 예측도는 44.4%, 위양성률은 42.9%, 위음성률은 45.4 %이었고, 활동성 폐결핵과 비결핵성 호흡기 질환에서는 민감도는 54.5%, 특이도는 100%, 양성 예측도는 100%, 음성 예측도는 47.4%. 위양성률은 0%, 위음성률은 45.4%이었다. 폐결핵의 중증정도(extent) 와 양성율은 상기 2가지 kit에서 큰 차이가 없었다. 결론: 따라서 상기 2가지의 kit는 항체 반응이 다양하여 임상적으로 폐결핵의 진단에 이용하는 것에는 문제가 있다고 생각되며, 일단 양성반응을 보인 환자의 경우, 항결핵제 투여에 따른 추적 검사에서 항체가의 변화가 있는지에 대한 연구가 필요하리라 생각된다.