• 환경생물
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• 제21권2호
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• pp.87-100
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• 2003

환경오염이 심각해짐에 따라 국내외적으로 환경에 대한 관심이 고조되고 인체에 해를 끼치는 환경요인으로부터 방어하기 위한 많은 노력들이 기울여지고 있다. 특히 내분비계장애물질이 생식기능과 면역기능을 약화시키고, 행동 이상을 일으키며, 암 발생률을 높인다는 점이 밝혀지기 시작하면서 많은 연구들이 발표되고 여러 가지 방법들이 내분비계장애물질과 더불어 환경분야연구에 응용되어왔지만 단백질을 대상으로 연구하여 유전자기능을 연구하는 프로테오믹스(proteomics) 연구를 접목시키려는 시도가 아직까지는 빈약하다. 프로테오믹스는 기능을 갖는 단백질들의 발현을 종합적이고 정량적으로 측정하는 가장 직접적인 수단이고, 질병, 약물투여, shock 등 생물학적인 동요(perturbation)에 의하여 변하는 단백질들의 발현양상의 변화를 정확하게 관찰할 수 있으며, 생체내 유전자발현의 궁극적인 양상을 규명할 수 있고, 또한 유전자, 단백질 및 질병간의 연결고리를 제공한다. 기존의 biomarker는 다른 질병 표지자와 연관성이 높아 직접적인 유해물질 노출 위험도를 정확히 판정하기 어렵다. 따라서 대량발굴탐색(high-throughput screen-ing)이 가능한 2차원 전기영동 분석과 MALDI-TOF 또는 protein chip array와 SELDI-TOF에 의한 단백질 분자구조 분석기술 및 이들을 지원하는 생물정보학(bio-informatics)의 발전을 이용하여 환경독성 연구에 이용 할 수 있는 표적단백질(biomarker)발굴에 적절한 이용이 가능할 것이다.

• 생약학회지
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• 제33권3호통권130호
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• pp.224-229
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• 2002

Sarcodon aspratus (Thelephoraceae), a native mushroom distributed in Korea and Japan has been widely used as a traditional food and folk medicines. Two proteoglycan polysaccharides, named SAP-A and SAP-B were isolated from the fruitbody of S. aspratus. Their molecular weight were determined as 6184.9 D, and 25749.2 D, respectively, by maldi-tof ms. The composition of sugar and amino acid of these compounds was also determined. The SAP-A showed potent antitumor activity. The $ID_{50}$ value of SAP-A was 8.2 mg/kg/day for ICR mice transplanted with solid sarcoma-180, and the elongation of lifespan effect was 167.4% for ICR mice transplanted with ascitic sarcoma-180. Moreover, the elongation life-span effect of SAP-A increased dose-dependently.

• 한국가금학회:학술대회논문집
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• 한국가금학회 2003년도 제20차 정기총회 및 학술발표회
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• pp.129-130
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• 2003

본 연구는 proteomics의 방법을 이용하여 가금의 육질과 관련된 단백질을 찾고자 수행하였다. 인삼부산물 추출액을 급여한 실용 재래닭에서 육질과 관련된 것으로 추정되는 후보 단백질들이 선발되었으며, 이 결과는 가금의 육질을 향상시키는 단백질 Marker로서 이용될 수 있을 뿐만 아니라 현재까지 밝혀지지 않은 가금의 2D map을 만드는데 역시 중요하게 이용될 수 있다.

• 생명과학회지
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• 제23권8호
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• pp.1050-1056
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• 2013

Streptococcus pneumoniae는 전 세계적으로 급성 호흡기 질환 높은 사망률 나타내며, 정상인의 비인후부에 존재하여 호흡기 감염을 통해 폐렴, 수막염, 중이염, 패혈증, 복막염, 골수염 등을 일으킨다. 그러나 S. pneumoniae가 폐 조직에 침입하는 분자적 메커니즘과 혈류를 통한 침입은 많은 연구에도 불구하고 아직 명확하게 알려지지 않았다. 그러므로 본 실험에서는 S. pneumoniae D39의 감염 및 침입에 대한 분자 메카니즘을 알고자 사람의 폐암상피 세포 유래 A549 세포를 이용하여 감염 후 시간의 경과에 따라 변화되는 A549 세포의 모양을 관찰하였으며, 또한 숙주세포의 단백질 패턴 변화를 조사하였다. 일부 A549 세포는 감염 후 2 시간부터 세포의 모양이 둥근형태로 변화된 것으로 관찰되었으며, 감염 3 시간째에는 세포의 모양이 둥글며 filopodia가 아주 잘 발달하였다. 감염 4 시간에 도달하게 되면 거의 모든 A549 세포가 둥글며 잘 발달된 filopodia를 형성하였다. 감염 후 각 시간 별 A549 세포의 총 단백질들을 추출하여 시간의 경과에 따라 특이적으로 양 적인 변화를 나타내는 단백질을 MALDI-TOF 분석법을 사용하여 동정하였다. Streptococcus pneumoniae D39 감염 후 시간에 따라 변화하는 단백질 중 대다수가 특이하게도 molecular chaperone에 속하는 단백질들이었다. 대표적인 cytosol chaperone인 Hsp90과 Hsp70의 경우 감소하는 패턴을 나타낸 반면에 endoplasmic reticulum (ER)에 존재하는 chaperone인 Grp94와 Grp78 (BiP)은 감염 후 점차 증가하는 패턴을 나타내었다. ER chaperone인 Grp94와 Grp78의 증가는 ER stress signaling pathway와 관련 있는 것으로 알려져 있어, S. pneumoniae D39의 감염에 의한 이들 단백질의 변화 패턴을 ER stress를 유발 시켰을 때와 비교하였다. Tunicamycin 또는 thapsigargin으로 처리하여 ER stress를 유발시킨 A549 세포의 형태는 변화하지 않았으며 흡착세포의 형태를 유지하였다. 그러나 Western blot을 통한 molecular chaperone의 분석 결과는 S. pneumoniae D39 감염의 경우와 일치하였다. 본 연구에서 얻은 결과는 S. pneumoniae D39의 감염은 A549 세포의 형태적 변화를 유발하며 또한 molecular chaperone 증가와 감소를 유발한다는 것을 보여주며, 특이적으로 Grp94와 Grp78이 증가되는 것으로 보아 S. pneumoniae D39 감염은 A549 세포 내 ER stress를 유발한다고 생각된다.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제13권12호
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• pp.6435-6439
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• 2012

Chemoresistance to cancer therapy is a major obstacle to the effective treatment of human cancers with cisplatin (DDP), but the mechanisms of cisplatin-resistance are not clear. In this study, we established a cisplatin-resistant human ovarian cancer cell line (COC1/DDP) and identified differentially expressed proteins related to cisplatin resistance. The proteomic expression profiles in COC1 before and after DDP treatment were examined using 2-dimensional electrophoresis technology. Differentially expressed proteins were identified using matrix-assisted laser desorption/ ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS) and high performance liquid chromatography-electrospray tandem MS (NanoUPLC-ESI-MS/MS). 5 protein spots, for cytokeratin 9, keratin 1, deoxyuridine triphosphatase (dUTPase), aarF domain containing kinase 4 (ADCK 4) and cofilin1, were identified to be significantly changed in COC1/DDP compared with its parental cells. The expression of these five proteins was further validated by quantitative PCR and Western blotting, confirming the results of proteomic analysis. Further research on these proteins may help to identify novel resistant biomarkers or reveal the mechanism of cisplatin-resistance in human ovarian cancers.

• 한국식품과학회지
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• 제39권4호
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• pp.438-446
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• 2007

콩 발효식품인 청국장은 어느 정도는 그 기능성 때문에 많은 사람들이 선호하고 있다. 청국장의 발효 과정은 발효미생물이 분비하는 단백질 분해 효소를 포함하는 여러 효소들에 의해 이루어지기 때문에 발효기간 동안 청국장의 단백질체 분석은 발효의 최적화를 이루기 위해서 그리고 청국장에 생성되는 기능성물질 생성 과정을 이해하는 데 도움이 된다. 청국장의 수용성 단백질을 phenol/chloroform 추출 방법으로 분리하여 2-D gel 분석에 방해되는 물질들을 제거하였다. 각 발효 단계에서 단백질 분석을 하였을 때 20시간 안에 대부분의 단백질들이 작은 분자로 분해되었고 수용성 단백질에는 미생물 유래 단백질들이 점차 증가하였다. 청국장의 단백질 프로파일은 natto의 것과는 매우 다른 양상을 2-D gel 상에서 보였다. 각 gel에서 50개의 단백질을 임의로 선발하여 MALDI-TOF MS 분석을 하고 PMF로 단백질을 동정하였다. 결과는 콩이나 발효 미생물들의 유전체 정보가 부족하여 청국장에서 9종 natto에서 15종의 단백질만을 동정할 수 있었다. MS/MS 분석을 통한 아미노산 서열 분석을 통해 얻은 정보를 가지고 BLASTP 검색엔진으로 database를 검색한 결과 제한된 수의 단백질이 낮은 신뢰도 범위에서 동정되었다. 그렇지만 청국장과 같이 복잡한 단백질체를 분석하기에는 본 연구에서 고안한 전체 단백질 분리 기술과 2-D gel 분석적 접근은 단백질을 전체적으로 분석함에 있어 훌륭한 방법이다. 앞으로 청국장의 단백질 변화에 대한 연구는 의미 있는 변화를 보이는 소수의 단백질을 선발하고 이들에 대해 집중적으로 질량분석 하여 단백질을 동정하는 것이 필요하다.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제16권2호
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• pp.37-48
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• 2008

The diapause and non diapause associated proteins of multivoltine silkworm eggs were analysed by two dimensional (2D) gel electrophoresis. The study was made at 0 hr, 24 hrs and 48 hrs after oviposition. A total of four protein spots in diapause eggs at 24 hrs of oviposition and two protein spots in non diapause eggs at 0 hrs of oviposition were observed. All the six protein spots were considered to have association with diapause and non diapause characters. The molecular weight (MW) and isoelectric point (PI) of these 6 protein spots were calculated. The protein spots 1 and 2 observed in 0 hr of non diapause eggs were found to have the MW of 67 and 75 KDa and PI of 8.6 and 8.4 respectively. Similarly the four protein spots observed in diapause egg at 24 hrs of oviposition exhibited MW viz., 15, 17,20 and 25 KDa and PI of 5.3, 5.8, 6.5 and 6.0 respectively. All these 6 identified protein spots were subjected to in-gel digestion and resulted tryptic peptides were analyzed by Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of flight mass spectrometry (MALDI TOF-MS). Databases searched based on experimentally determined molecular weights of peptides for the determination of the identities of proteins. The identified proteins indicated homology of 34% to 95%. The results indicate that the proteins may playa role in development of diapause and non diapause eggs.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제20권3호
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• pp.480-484
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• 2010

AfsR2 is a global regulatory protein that stimulates antibiotic biosynthesis in both Streptomyces lividans and S. coelicolor. Previously, various afsR2-dependent genes including a putative abaA-like regulatory gene, SCO4677, were identified through comparative DNA microarray analysis. To further identify the putative SCO4677-dependent proteins, the comparative proteomics-driven approach was applied to the SCO4677-overexpressing strains of S. lividans and S. coelicolor along with the wild-type strains. The 2D gel electrophoresis gave approximately 277 protein spots for S. lividans and 207 protein spots for S. coelicolor, showing different protein expression patterns between the SCO4677-overexpressing strains and the wild-type strains. Further MALDI-TOF analysis revealed that only 18 proteins exhibited similar expression patterns in both S. lividans and S. coelicolor, suggesting that the SCO4677 could encode an abaA-like regulator that controls a few cross-species common proteins as well as many species-specific proteins in Streptomyces species.

• 생명과학회지
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• 제17권12호
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• pp.1649-1653
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• 2007

무더운 날씨가 지속됨으로서 고랭지배추의 생장 및 결구가 지연되고 있는 강원도 정선군 질운산(새빗재)의 600 m와 900 m의 배추를 사용하여 무기성분 및 단백질 발현패턴을 분석하였다. 식물체 무기성분에서는 생장에 관련된 질소 및 인산의 부족현상과 결구에 관련된 칼슘이 부족하였다. 단백체 분석은 2차원 전기영동에 의해 전체 126개의 단백질이 분리되었고 그중 48개의 단백질이 고도에 따라 변화하는 양상을 보여주었다. 이 중에서 30개의 단백질 서열이 결정되었는데, 해발 900 m에서 단백질 발현이 증가한 14개 중에서 oxygen- evolving proteins, rubisco activase and ATPase 등이, 해발 600 m에서는 glutathione S-transferase (1, 28 kD cold induced- and 24kD auxin-binding proteins) and salt-stress induced protein 등 16개의 단백질 발현이 증가하였다. 이러한 단백질은 식물체 손상에 대한 보호기작을 가진 스트레스관련 단백질로 가뭄, 온도상승, 밤낮의 온도차 등의 반복으로 복합적이며 동시 다발적으로 나타나는 고온장해 현상으로 사료된다.

• 한국응용곤충학회지
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• 제50권2호
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• pp.131-139
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• 2011

본 연구는 음파 처리에 따른 아메리카잎굴파리(Liriomyza trifolii)의 생리 변화를 발육 시기별로 분석하였다. 유충의 섭식량은 섭식을 통해 형성된 잎 내부 갱도의 길이로 분석했다. 이때 5,000 Hz (95 dB)의 음파 처리는 섭식 행동을 크게 둔화시켰다. 이러한 스트레스 음파는 또한 용발육에 영향을 주어 315 - 5,000 Hz 음파 범위에서 발육 지연 효과를 나타냈고, 1,000 - 5,000 Hz 음파 범위에서 우화를 억제하였다. 스트레스 음파는 암컷의 산란 행동을 억제시켰으나 성충의 주광성 행동에는 영향을 주지 않았다. 스트레스 음파(5,000 Hz, 95 dB)를 받은 용은 이차원 전기영동 분석 결과 단백질 발현 양상에서 무처리구와 뚜렷한 차이를 보였다. 특정 단백질에 대한 MALDI-TOF 분석 결과는 trafficking protein particle complex I, triosephosphate isomerase, hypothetical protein TcasGA2_TC013388, polycystin-2, paraneoplastic neuronal antigen MA1 및 tropomyosin I (isoform M)의 단백질들이 무처리구에서 발견되고, 음파 처리구에서는 소멸되었다. 반면에 DOCK9, cytoskeletal keratin II 및 $F_0F_1$-ATP synthase beta subunit은 스트레스 음파 처리에 따라 새롭게 나타나는 단백질로 판명되었다. 이러한 스트레스 음파는 아메리카잎굴파리의 살충제에 대한 감수성을 크게 증가시켰다. 이상의 결과는 아메리카잎굴파리의 생리 과정을 교란하는 스트레스 음파가 작용한다는 것을 제시하고 있다. 또한 본 연구는 이러한 스트레스 음파를 이용하여 아메리카잎굴파리에 대한 새로운 물리적 해충 방제 기술 개발 가능성을 제시하고 있다.