• 제목/요약/키워드: 2D/MALDI-TOF

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SAFETY EVALUATION OF ADENOVIRUS-MEDIATED P16 GENE TRANSFER BY USING MICROARRAY AND 2D/MALDI-TOF

  • Park, Misun;Hoil Kang;Jaehee Pyo;Sinae Lim;Seungwan Jee;Miok Eom;Taikyung Ryeom;Kim, Okhee
    • 한국독성학회:학술대회논문집
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    • 한국독성학회 2002년도 Molecular and Cellular Response to Toxic Substances
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    • pp.196-196
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    • 2002
  • p16INK4a tumor suppressor gene transfer in the non-small cell lung cancer cells by transduction of recombinant adenovirus (Ad5CMV-p16) resulted in significant inhibition of cancer cell growth (Anticancer Res., 1998, 18:3257-3261). As a safety concern, we have investigated gene and protein expression after transduction of adenoviral vector (Ad5CMV-p16) in human non-small cell lung cancer (A549) cells by using microarray and 2D gel electrophoresis/ MALDI-TOF.(omitted)

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이차원 전기영동과 펩타이드 지문 검색법을 이용한 초파리의 프로테옴 분석 (Proteome Analysis of Drosophila melanogaster Used 2-DE and MALDI- TOF-MS)

  • 박정원;차재영;송재영;김희규;김범규;전병삼
    • 생명과학회지
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    • 제15권3호
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    • pp.427-433
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    • 2005
  • 초파리는 유전학, 발달 생물학, 행동 유전학, 노화 연구에 이르기까지 수많은 연구에 이용 되어져 왔다. 최근 초파리 전체 유전자의 염기서열이 보고되었으며, 유전자의 기능 분석과 발현 단백질에 대한 연구가 진행되고 있다. 본 연구에서는 야생형 초파리에서 추출한 단백질을 이차원 전기영동을 통해 400여개 이상의 단백질 스폿으로 분리하였으며, 각 스폿을 적출하여 트립신으로 처리하여 얻어진 펩타이드 단편을 MALDI-TOF-MS를 이용한 펩타이드 지문 검색으로 질량을 측정하였다. 측정된 질량을 초파리 데이터 베이스를 이용하여 분리한 단백질을 동정함으로써 59개의 유전자에서 발현되는 65개의 단백질 스폿을 동정하였다. 이러한 결과는 향후의 발생단계, 외부 자극, 노화 등에 관련되는 특이적 단백질 연구의 기초 자료로 활용될 수 있을 것이다.

Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight (MALDI-TOF)- Based Cloning of Enolase, ENO1, from Cryphonectria parasitica

  • Kim, Myoung-Ju;Chung, Hea-Jong;Park, Seung-Moon;Park, Sung-Goo;Chung, Dae-Kyun;Yang, Moon-Sik;Kim, Dae-Hyuk
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제14권3호
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    • pp.620-627
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    • 2004
  • On the foundation of a database of genome sequences and protein analyses, the ability to clone a gene based on a peptide analysis is becoming more feasible and effective for identifying a specific gene and its protein product of interest. As such, the current study conducted a protein analysis using 2-D PAGE followed by MALDI- TOF and ESI-MS to identify a highly expressed gene product of C. parasitica. A distinctive and highly expressed protein spot with a molecular size of 47.2 kDa was randomly selected and MALDI-TOF MS analysis was conducted. A homology search indicated that the protein appeared to be a fungal enolase (enol). Meanwhile, multiple alignments of fungal enolases revealed a conserved amino acid sequence, from which degenerated primers were designed. A screening of the genomic $\lambda$ library of C. parasitica, using the PCR amplicon as a probe, was conducted to obtain the full-length gene, while RT-PCR was performed for the cDNA. The E. coli-expressed eno 1 exhibited enolase enzymatic activity, indicating that the cloned gene encoded the C. parasitica enolase. Moreover, ESI-MS of two of the separated peptides resolved from the protein spot on 2-D PAGE revealed sequences identical to the deduced sequences, suggesting that the cloned gene indeed encoded the resolved protein spot. Northern blot analysis indicated a consistent accumulation of an eno1 transcript during the cultivation.

Proteomics 기법을 이용한 복제태반 분석

  • 김홍래;이혜란;강재구;윤종택;성한우;정진관;조민래;박창식;진동일
    • 한국동물번식학회:학술대회논문집
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    • 한국동물번식학회 2004년도 춘계학술발표대회
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    • pp.238-238
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    • 2004
  • 세포 내에서 발현되고 있는 protein들의 양상을 분석하기 위한 기법으로 최근 proteomics에 기초하여 2차 전기영동과 MALDI-TOF MS에 의한 protein 분석방법이 개발되었는데, 특정 조직에 또는 특정 발생시기에 특이적으로 발현되는 protein의 발현양과 발현양상을 비교ㆍ분석하는데 매우 효과적으로 이용될 수 있다. 최근 체세포 핵이 식기술을 이용하여 동물의 복제가 성공하고 있지만, 임신 중이나 분만시 유사산이 많이 나타나 전반적인 효율이 크게 낮아 실용화에 지장을 초래하고 있다. (중략)

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Gradient 2-D PAGE를 이용한 양수 프로테옴 분석 (Proteome Analysis of Amniotic Fluid by gradient 2-D PAGI)

  • 이은희;김재찬;변상요
    • KSBB Journal
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    • 제18권1호
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    • pp.35-38
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    • 2003
  • 양수 내에 존재하는 총 단백질을 이차원 전기영동을 이용하여 분리 분석하였고, gradient gel을 이용하여 양수 내에 소량으로 존재하는 미세 단백질까지 분리하였다. 양수 내에는 고농도로 존재하는 단백질이 있는데 이것이 serum albumin precursor임을 확인하였고, 8-18% gradient gel의 이용으로 분해능(resolution)이 향상되어 미세 단백질을 분리 분석할 수 있었다. 이차원 전기영동 후 MALDI-TOF를 이용하여 단백질을 identification하여 기존의 양수 protein database에 존재하는 단백질을 확인하였고, 존재하지 않는 새로운 단백질을 분리 분석하였다.

2-DE and MALDI-TOF MS-based identification of bovine whey proteins in milk collected soon after parturition

  • Lee, Jae Eun;Lin, Tao;Kang, Jung Won;Shin, Hyun Young;Lee, Joo Bin;Jin, Dong Il
    • 농업과학연구
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    • 제45권4호
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    • pp.635-643
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    • 2018
  • Bovine milk is widely consumed by humans and is a primary ingredient of dairy foods. Proteomic approaches have the potential to elucidate complex milk proteins and have been used to study milk of various species. Here, we performed a proteomic analysis using 2-dimensional electrophoresis (2-DE) and matrix assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometer (MALDI-TOF MS) to identify whey proteins in bovine milk obtained soon after parturition (bovine early milk). The major casein proteins were removed, and the whey proteins were analyzed with 2-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2-D PAGE). The whey proteins (2 mg) were separated by pI and molecular weight across pH ranges of 3.0 - 10.0 and 4.0 - 7.0. The 2-DE gels held about 300 to 700 detectable protein spots. We randomly picked 12 and nine spots that were consistently expressed in the pH 3.0 - 10.0 and pH 4.0 - 7.0 ranges, respectively. Following MALDI-TOF MS analysis, the 21 randomly selected proteins included proteins known to be present in bovine milk, such as albumin, lactoferrin, serum albumin precursor, T cell receptor, polymeric immunoglobulin receptor, pancreatic trypsin inhibitor, aldehyde oxidase and microglobulin. These proteins have major functions in immune responses, metabolism and protein binding. In summary, we herein identified both known and novel whey proteins present in bovine early milk, and our sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis revealed their expression pattern.

추백리가 감염된 닭의 간에서 발현이 증가하는 APOA1 단백질의 확인 (Identification of Upregulated APOA1 Protein of Chicken Liver in Pullorum Disease)

  • 정기철;이유주;유성란;이준헌;장병귀;구용범;소현경;최강덕
    • 한국가금학회지
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    • 제32권1호
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    • pp.23-27
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    • 2005
  • 가금 추백리와 밀접한 관계가 있는 단백질을 동정하기 위하여 인위적으로 추백리를 유도한 개체와 정상인 개체의 간에서 단백질을 추출하였으며, 2차원 전기영동(2DE)과 mass spectrometry(MS)를 이용하여 차등 발현되는 단백질을 조사하였다. 총 300여개의 단백질 spot들이 관찰되었으며, 이중 발현양에 현저한 차이를 보이는 spot을 MALDI-TOF MS와 protein database search를 통해 분석한 결과, 가금 APOAI (Apolipoprotein A1)으로 확인되었다. 추백리가 감염된 닭의 간에서 APOA1 단백질의 증가는 손상된 혈관의 재생과 밀접한 관계가 있으며 추백리의 감염 여부를 나타내 주는 Bio-marker로서 활용될 수 있을 것으로 사료된다.

Agrobacterium sp. ATCC31750에 대한 beta-l,3-glucan 합성 대사경로의 주요 단백질 검출 (Identification of Key beta-1,3-glucan Synthesis Enzymes in Agrobacterium sp. ATCC31750)

  • 김려화;이중헌
    • KSBB Journal
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    • 제19권5호
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    • pp.406-409
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    • 2004
  • Matrix Assisted Laser Desorption ionization Time of Flight (MALDI-TOF) was used for enzymes identification related to B -1,3-glucan synthesis. Agrobacterium sp. ATCC31750 was cultivated with two stage Continuous Stirrer Tank Reactor (CSTR) and the cells were harvested and their protein profiles were analysed by two dimensional electrophoresis. The specific enzyme spot was treated with trypsin and ana lysed by MALDI-TOF to get peptide molecular weight. The peptide molecular weights were matched with Agrobacterium tumefacience's Data Base from the matrix science site, then could identify the avaliable key enzymes. In this study, we identified key metabolite of synthesis of beta-1,3-glucan, such as glucose-6-phosphate isomerase, phosphoglucomutase, B-1,3-glucan synthase and glucokinase, and we also identified uracil phosphoribocyl transferase and Ribosome recycling factor also.