The majority of soil microorganisms can derive ethylene from L-methionine (L-MET), while some rhizobacteria can hydrolyze 1-aminocyclopropane-1-carboxylate (ACC) due to their ACC-deaminase activity. In this study, three strains having either ACC-deaminase activity (Pseudomonas putida biotype A, $A_7$), or the ability to produce ethylene from L-MET (Acinetobacter calcoaceticus, $M_9$) or both (Pseudomonas fluorescens, $AM_3$) were used for inoculation. The highly ethylene specific bioassay of a classical 'triple' response in pea seedlings was used to investigate the effect of the inoculation with the rhizobacteria in the presence of 10 mM ACC or L-MET. The exogenous application of ACC had a concentration-dependent effect on the etiolated pea seedlings in creating the classical 'triple' response. The inoculation with P. putida diluted the effect of ACC, which was most likely due to its ACC-deaminase activity. Similarly, the application of $Co^{2+}$ reduced the ACC-imposed effect on etiolated pea seedlings. In contrast, the inoculation of A. calcoaceticus or P. fluorescens in the presence of L-MET caused a stronger classical 'triple' response in etiolated pea seedlings; most likely by producing ethylene from L-MET. This is the first study, to our knowledge, reporting on the comparative effect of rhizobacteria capable of utilizing ACC vs L-MET on etiolated pea seedlings.
1-Aminocyclopropane-1-carboxylate (ACC) deaminase, which is encoded by some bacteria, can reduce the amount of ethylene, a root elongation inhibitor, and stimulate the growth of plants under various environmental stresses. The presence of ACC deaminase activity and the regulation of ACC in several rhizospheric bacteria have been reported. The nitrogen-fixing Pseudomonas stutzeri A1501 is capable of endophytic association with rice plants and promotes the growth of rice. However, the functional identification of ACC deaminase has not been performed. In this study, the proposed effect of ACC deaminase in P. stutzeri A1501 was investigated. Genome mining showed that P. stutzeri A1501 carries a single gene encoding ACC deaminase, designated acdS. The acdS mutant was devoid of ACC deaminase activity and was less resistant to NaCl and NiCl2 compared with the wild-type. Furthermore, inactivation of acdS greatly impaired its nitrogenase activity under salt stress conditions. It was also observed that mutation of the acdS gene led to loss of the ability to promote the growth of rice under salt or heavy metal stress. Taken together, this study illustrates the essential role of ACC deaminase, not only in enhancing the salt or heavy metal tolerance of bacteria but also in improving the growth of plants, and provides a theoretical basis for studying the interaction between plant growth-promoting rhizobacteria and plants.
This study was conducted to develop an Agrobacterium-mediated genetic transformation protocol for the carnation cv. "Jinju" to counteract its ethylene sensitivity. The new protocol involves the use of an improved shoot regeneration medium, optimized minimal concentrations of the selective agent, a pre-culture period, and co-cultivation periods. Silver nanoparticles (NAg) added at a concentration of 2.0 μM to the Murashige and Skoog (MS) basal shoot regeneration medium supplemented with 0.1 mg/L indole-3-butyric-acid (IBA) and 0.2 mg/L thidiazuron (TDZ) improved the shoot regeneration efficiency, number of shoots per explant, and plant growth compared to the control without the addition of NAg. The phosphinothricin (PPT) concentration of 1.0 mg/L was determined to be the minimal and optimal concentration for the selection of putative transgenic plants. When the explants were infected with Agrobacterium cells harboring the acdS gene, the explants that were pre-cultured for three days induced more putative transgenic plants than those that were co-cultivated for four days. Therefore, we expect that the results of this study will benefit researchers who are developing genetic transformations of carnations.
Phosphate solubilizing bacteria (PSB) were isolated from the rhizosphere of Chinese cabbage and screened on the basis of their solubilization of inorganic tricalcium phosphate in liquid cultures. Ten strains that had higher solubilization potential were selected, and they also produced indole-3-acetic acid, 1-aminocyclopropane-1-carboxylate (ACC) deaminase, and siderophores. The strains were identified to be members of Pseudomonas, by 16S rDNA sequence analysis. Seed bacterization with PSB strains increased the root elongation and biomass of Chinese cabbage in seedling culture, although they had no effect on phosphorus uptake of plants. The plant growth promotion by PSB in this study could be due to the production of phytohormones or mechanisms other than phosphate solubilization, since they had no effect on P nutrition.
Bacterial 1-aminocyclopropane-1-carboxlyate (ACC) deaminase (AcdS) is an enzyme that cleaves ACC, a precursor of the plant hormone ethylene, into ${\alpha}$-ketobutyrate and ammonia. The acdS gene was cloned from Pseudomonas fluorescens, which was capable of improving the seedling of Chinese cabbage under salinity condition. The recombinant AcdS (rAcdS) exhibited optimal activity at pH 8.5 and $30^{\circ}C$. Strong activity was sustained at up to 100 mM NaCl. The polyclonal anti-P. fluorescens AcdS antibody was produced in a rabbit that had been immunized with the purified rAcdS. This antibody successfully recognized the homologous antigens derived from the total proteins of isolated plant growth-promoting microorganisms. A statistically significant correlation was observed between the intensity of hybridization signal and AcdS activity measured by a biochemical method, suggesting its application as a useful indicator for active deaminases.
무균 및 온실조건에서 indole-3-acetic acid (IAA)의 처리와 1-aminocyclopropane-1-carboxylate deaminase (ACCD) 및 IAA 활성을 갖는 Methylobacterium 균주 접종 시 토마토와 고추의 생장을 비교 평가하였다. 무균조건에서 1.0 ${\mu}g\;mL^{-1}$의 IAA는 고추와 토마토의 뿌리생장을 촉진시키는데 비해 10.0 ${\mu}g\;mL^{-1}$ 이상의 높은 농도에서는 뿌리생장이 억제되었다. 그러나 높은 ACCD 활성을 갖고, IAA 활성은 낮거나 가지고 있지 않은 Methylobacterium 균주들을 접종하였을 때에는 고추와 토마토 모두 IAA 처리구 보다 뿌리생장이 증진되는 것을 확인하였다. 마찬가지로 온실조건에서 Methylobacterium 균주들을 접종했을 때, 마디길이와 잎의 크기 그리고 단위 면적당 잎의 무게 (SLW)에서 유의성 있는 증진효과를 보였다. 전반적인 식물 생장에서 저농도의 IAA 처리 효과는 Methylobacterium의 효과와 비슷한 경향을 나타냈다. 유묘의 지상부 길이는 ACCD 활성과 IAA 생산능을 갖는 Methylobacterium 균주 처리구에서 유의성 있는 증가를 확인할 수 있었으며, 전체 건물중 또한 Methylobacterium 처리 시 유의성 있는 증진 효과를 확인 할 수 있었다. 하지만 고농도의 IAA는 고추와 토마토의 생물량을 억제시켰다. 이러한 결과는 접종 균주의 IAA와 ACCD가 고추와 토마토 유묘의 생장 증진에 영향을 끼친다는 것을 증명한다.
다양한 난개발과 해안도로, 방파제 등의 인공 구조물 설치로 인한 해안 침식과 해안선 파괴 등으로 해안사구가 크게 훼손되고 있다. 이에 본 연구에서는 해안사구에서 서식하고 있는 토착식물의 근권으로부터 식물 성장 촉진 능력이 있으면서 동시에 염분에 강한 내성을 가지는 근권세균의 library를 구축하였고, 이들 균주를 대상으로 식물 성장 촉진 능력을 평가하였다. 또한, 내염성 식물을 대상으로 사구 토양에서의 성장률에 근권세균이 미치는 영향을 평가한 후, 훼손된 사구의 복원에 가장 유용한 미생물을 선별하고 분리된 근권세균이 식물 성장에 미치는 영향을 평가하였다. 실험은 선정된 균주와 갯기름나물과 줄무늬갈대를 해안사구에 식재한 후 성장에 미치는 영향을 평가하였다. 그 결과, MH1RS1는 (IAA) production, siderophores, 1-aminocyclopropane-1-carboxylate deaminase (ACC deaminase) 그리고 염분내성을 가지고 있다. 갯기름나물의 경우는 줄기의 길이와 뿌리의 무게는 크게 향상되었다. 특히, 줄기의 생체와 뿌리 무게는 control과 비교했을 때 25% 성장이 향상되었다. 줄무늬 갈대는 Bacillus aerius MH1RS1 에 의해 초장은 18%와 뿌리의 생체 중은 20%로 크게 향상 되었다.
본 연구에서 생물 및 비생물학적 스트레스에 내성을 유도하는 식물 생육 촉진 세균인 Variovarx sp. PMC12 균주의 유전체 염기서열을 분석하였다. PMC12 균주의 유전체는 5,873,297 bp와 1,141,940 bp 크기의 원형 염색체 2개로 구성되었다. 총 6,436개 단백질 유전자, rRNA 9개, tRNA 64개, ncRNA 3개와 유사유전자 80개가 확인되었다. 유전체상에서 발견된 1-aminocyclopropane-1-carboxylate (ACC) deaminase, 항산화 활성, 인산 가용화, 프롤린 생합성, 시드로포어 생합성과 관련된 유전자들은 PMC12 균주가 염, 온도, 병원균에 대한 스트레스에 대한 식물의 내성 유도와 관련되어 있을 것으로 판단된다.
염 스트레스를 비롯한 다양한 비생물학적 스트레스는 식물의 생장저해와 작물 생산량을 감소시키는 요인으로 작용한다. 계화도 간척지 토양에서 식물생장 촉진 세균을 분리하여 Pseudomonas sp. G19로 명명하였다. G19 균주는 36시간 배양 후 $7.5{\mu}g/ml$의 indole acetic acid를 생산하고 불용성인산을 25% 가용화시켰으며, 식물의 에틸렌 감소와 관련된 1-aminocyclopropane-1-carboxylate deaminase를 발현하였다. 또한 150 mM NaCl에 침지된 염 조건의 토양에서 재배된 유묘기 배추를 이용한 실증실험에서 G19 균주는 배추의 생체중량을 증가시킴으로써 염 스트레스의 경감 및 생장 촉진에 관여함을 알 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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