SBO와 GMO의 몰비율 1:2의 기질에 Lipozyme RMIM을 총 기질 질량의 10%를 사용하여, impeller를 장착한 회분식반응기를 통해 DAG 함유 유지의 대량합성을 실시하였다. 반응시작 후 1 hr부터 6 hr까지 total DAG의 함량은 25.4-27.7 g/100 g oil로 나타났으며, 6 hr 반응하였을 때 TAG의 함량은 32.2 g/100 g oil으로 감소하였다. 반응 완료 후 분자증류를 통해 MAG와 FFA를 제거하였으며 NP-HPLC를 통해 분자증류 전과 후의 TAG와 DAG 함량변화를 알아보았다. 분자증류 전의 TAG와 DAG의 함량은 각각 7, 59 area%였으며, 분자증류 후에는 각각 29, 71 area%로 나타나 TAG와 DAG의 함량이 분자증류를 하기 전보다 증가함을 알 수 있었다. 분자증류를 거친 DAG 함유 유지의 주요한 지방산은 C18:1과 C18:2로 그 함량은 각각 44.36%와 37.36%로 나타났으며, trans 지방산의 함량은 1.72%로 나타났다. 그리고 분자증류를 거친 DAG 함유 유지의 산가와 요오드가는 각각 0.13과 112.6이었다. SFC분석 결과, 분자증류를 거친 DAG 함유 유지는 SBO보다 높은 온도인 25$^{\circ}C$에서 대부분 융해되는 것을 알 수 있었으며, 융점 피크는 -25.0, 0.1, 11.2$^{\circ}C$ 에서 나타났고, 결정화 피크는 -16.2$^{\circ}C$ 에서 보였다.
회분식 반응기(stirred-tank batch reactor)를 사용한 DAG, MAG 함유 기능성유지를 비용매계(solvent-free system) 조건에서 효소적 반응을 이용하여 합성하였다. 48시간 동안 합성된 지질을 HPLC를 사용한 TAG, 1,3-DAG, 1,2-DAG 및 MAG 함량 분석결과 각각 45.05, 16.27, 23.05 및 14.98%로 분석되었으며 체중개선 기능성 유지의 지방산 조성 분석결과 palmitic, palmitoleic, stearic, oleic, linoleic 및 linolenic acid가 13.21, 0.15, 2.02, 34.36, 49.12 및 1.14 mol%로 분석되었다. 합성된 지질의 ${\alpha},\;{\gamma}$ 및 ${\delta}-tocopherol$ 함량을 분석한 결과는 각각 0.014, 0.029 및 0.010%로 분석되었으며 총 tocopherol 함량은 0.053%로 나타났다. 또한 재구성된 지질을 사용하여 산가, 비누화가, 요오드가를 측정하였으며 융점 및 결정화점을 살펴보고 이를 통하여 옥수수유로 유래된 DAG, MAG를 함유한 체중개선 기능성 유지의 이화학적, 물리적 특징을 규명하였다. 체중개선 기능성 유지의 산화 안정성 실험을 시행한 결과 체중개선 기능성 유지가 원료유인 옥수수유보다 높은 과산화물가와 p-anisidine가를 보였으며 각기 달리 혼합한 rosemary추출물(100, 200 및 300ppm)이 체중개선 기능성 유지와 옥수수유의 산화를 감소 시켰다.
Diacylglycerol-oil (DAG oil) and four kinds of fatty acids [C16:0, C18:0, perillar oil-hydrolyzate(C18:3, 59.7%) and docosahexaenoic acid(DHA, C22:6, 63.7%)] were enzymatically esterified with 1:0.5, 1:1 and 1:1.5 molar ratio (DAG oil: fatty acids) to produce structured DAG. The reaction mixture were catalyzed by addition of sn-1,3 specific Lipozyme RMIM with 10 wt% of total substrates, and reacted for 1, 3, 6 and 24 hr at $62^{\circ}C$ with 220 rpm on the shaking water bath. The produced DAG were analyzed by TLC. In the result, the proportion of each fatty acid [(C16:0, C18:0, perilla oil-hydrolysate(C18:3, 59.7%) and DHA(C22:6, 63.7%)] on DAG products were increased as molar ratios of substrate increased. Among them, DHA showed the least reaction rate in which 24.2 % of DHA was found in the structured DAG molecules after 24 hr reaction with 1:1.5 molar substrate amount ratio.
The effect of diacylglycerol on glucose release was studied by using 1,2-dioctanoyl-sn-glycerol ($diC_8$), a cell permeable diacylglycerol, in perfused rat liver. The glucose release was increased by $diC_8(50\;{\mu}M$), and the effect was depended on calcium ions. The increment of glucose release by $diC_8(50\;{\mu}M$) was inhibited by indomethacin ($50\;{\mu}M$); the amount of glucose release was almost the same with that of control group. Arachidonic acid($200\;{\mu}M$) also increased glucose release and the release was inhibited by indomethacin. There was no synergistic effect on glucose release by the combination of $diC_8(50\;{\mu}M$) and phenylephrine($10\;{\mu}M$).
Bis-${\gamma}$-lactones (1,2) having a perhydrofuro[3,4-c]furan-1,4-dione skeleton were designed as conformationally constrained diacylglycerol analogues. They were synthesized from D-apiose in 11 steps, and evaluated as $PKC-{\alpha}$ ligands by measuring their ability to displace bound $^3H$]PDBU from the enzyme. The compounds showed moderate binding affinities with $K_i$ values of 13.89 (${\pm}5.67$) ${\mu}M$ and 11.47 (${\pm}0.89$) ${\mu}M$, respectively. Their similar binding affinities indicate that these two bicyclic compounds were not effectively discriminated by $PKC-{\alpha}$ in terms of the direction of the side chain as other ligands built on similar bis-${\gamma}$-lactones.
The objective of this study was to observe the effect of dietary calcium(Ca) level on colonic mucosal levels of cell proliferation, 1, 2-diacylglycerol(DAG), TXB2, PGE2 and phospholipid fatty acid composition which have been known as biomarkers for colon cancer. One hundred male Sprague Dawley rats, at 7 weeks of age, were divided into two fat type groups. Each group of which was further divided into two Ca level groups. Each rt was intramuscularly injected with 1, 2,-dimenthylhydrazine(DMH) for 6 weeks (total dose of 180mg/kg body weight) and simultaneously fed one of four experimental diets containing 15% dietary fat(corn oil or perilla oil )and 0.3% or 1.0% Ca by weight for 20 weeks. Compared to corn oil, perilla oil significantly reduced cell proliferation by decreasing labeling index, proliferating zone, crypt length in colonic mucosa and colonic mucosa and colonic mucosal levels of DAG, TXB2 . PGE2 and phospolipid (PL) arachidonic acid distribution. The effect of Ca on biomarketrs was different depending on the type of dietary fat comsumed . Ca effect of Ca on biomarkers was different depending on the type of dietary fat comsumed. Ca effect was not significantly shown in the PO group, but it was significant in the CO group in which high Ca(1.0%) decreased the levels of levels of PL-C20 : 4(%), DAG and PGE2 . However , high Ca supplementation had shown only the trends of improving cell proliferation. Overall , high dietary Ca significantly reduced cell proliferation by inhibiting the synthesis of eicosanoid and DAG with reduced distribution of PL-C20 : 4 , which may have resulted in lower activation of PKC through reduced signal transduction. Since a high level of dietary Ca was more effective in reducing the risk factor against colon cancer in corn oil fed rats, it could be suggested that a higher amount of dietary Ca be consumed , especially when more vegetable oil rich in linoleic acid is included in the diet.
The inhibitory activity of tanshinones from Salvia miltiorrhiza was tested on rat liver diacylglycerol acyltransferase (DGAT). Cryptotanshinone (1) and 15,16-dihydrotanshinone I (3) exhibited potent DGAT inhibitory activities dose-dependently with $IC_{50}$ values of $10.5 {\;}{\mu\textrm{g}}/ml{\;}and{\;}11.1{\;}{\mu\textrm{g}}/ml$. However, tanshinone IIA (2) and tanshinone I (4) showed very weak inhibition ($IC_{50}{\;}value:{\;}>{\;}250{\;}{\mu\textrm{g}}/ml$). A dihydrofuran moiety was seemed to be responsible for the stronger inhibitory activity
The present study was undertaken to demonstrate whether or not bradykinin activates a phospholipase D in rabbit kidney proximal tubule cells. By measuring the formation of [$^3$H]phosphatidic acid and [$^3$H]phosphatidylethanol we could elucidate the direct stimulation of phospholipase D by bradykinin. Bradykinin leads to a rapid increase in [$^3$H]phosphatidic acid and [$^3$H]diacylglycerol, and [$^3$H]phosphatidic acid formation preceded the formation of [$^3$H]diacylglycerol. This result suggests that some phosphatidic acid seems to be formed directly from phosphatidylcholine by the action of phospholipase D, not from diacylglycerol by the action of diacylglycerol kinase. In addition, the other mechanisms by which phospholipase D is activated was examined. We have found that phospholipase D was activated and regulated by extracellular calcium ion and pertussis toxin-insensitive G protein, respectively. It has also been shown that bradykinin may activate phospholipase D through protein kinase C-dependent pathway. In conclusion, we are now, for the first time, strongly suggesting that bradykinin-induced activation of phospholipase D in the rabbit kidney proximal tubule cells is mediated by a pertussis toxin-insensitive G protein and is dependent of protein kinase C.
Diacylglycerol Kinase (DGK)는 E. coli 및 진핵세포에서의 신호전달에 관여하며, 또한 미생물에서 생리적 자극에 따라 다른 발현 양상을 보이는 것으로 밝혀져 있다. Bacillus subtilis에서 이 유전자에 대한 환경에서의 자극 신호들, 즉 pH 변화, 삼투압의 변화 및 온도의 변화에 따른 발현양상을 연구하였다. 이미 동정된 dgk locus의 KpnI-HindIII의 0.45 kb의 DNA fragment를 probe로 하여 Dot blot, Northern blot analysis를 통해 발현량을 조사해 본 결과 dgk 유전자는 pH변화, 삼투압의 변화 및 온도의 변화에 대응하여 발현되는 유전자임을 알 수 있었다. 특히 낮은 pH, 고 삼투압, 및 저온에서 dgk 유전자의 발현량이 많아짐을 확인 할 수 있었다. Northern hybridization에서 약 2.5kb의 mRNA가 관찰되었다. dgk gene의 ORF size는 약 0.4 kb로 관찰된 transcript size와는 일치하지 않았다. 따라서 Streptococcus mutans의 dgk gene과 마찬가지로 B. subtilis의 dgk 유전자도 polycistronic mRNA로 발현되는 것을 추정할 수 있었으며, 염색체상의 dgk gene에서 상류의 ORF2까지의 크기가 약 2.5 kb로 관찰된 mRNA size와 동일하였다. dgk gene 상류의 ORF2영역의 0.6 kb의 DNA fragment를 probe로 하여 northern blot hybridization을 수행한 결과, 2.5 kb의 mRNA가 관찰되었으며 발현되는 형태도 dgk probe를 이용한 결과와 동일하였다. 따라서 dgk gene은 상류부위의 ORF2 gene과 operon을 형성하여 polycistronic mRNA로 전사되는 것으로 판단된다.
Glycerol과 oleic ethyl ester와의 반응, 그리고 glycerol과 oleic acid와의 반응에서는 DAG가 생성되지 않았었지만 GMO와 SBO를 기질로 사용한 반응에서는 DAG가 생성됨을 확인하였다. 기질의 몰 비율에 따른 DAG 생성율을 비교하기 위하여 효소량을 기질 질량의 20%로 동일하게 설정하고 SBO와 GMO의 몰비율을 각각 2:1, 1:1과 1:2로 하여 반응한 결과, 1 hr 후 DAG의 함량이 최대로 도달 하였고 그 후에는 큰 차이를 보이지 않았다. 1hr에서 가장 큰 DAG 함량을 보인 몰비율은 1:1과 1:2(SBO:GMO)일 때로 각각 20.0, 20.4 g/100 g oil로 나타났고, 이 두 몰비율 중 TAG 함량이 낮았던 1:2 몰비율을 이용하여 DAG를 합성 하였다. 한편, 효소의 사용량에 따른 DAG 생성율을 비교하기 위하여 SBO와 GMO의 몰비율을 1:2로 동일하게 설정하고 효소량을 기질 질량의 2, 5, 10, 20%로 하여 반응한 결과, 1 hr의 DAG 함량은 각각 10.8, 14.0, 16.9, 20.4 g/100 g oil로 나타났다. 1 hr 이후의 DAG 생성량을 보면 효소량을 20% 사용한 경우, 72 hr까지 18.9-22.0 g/100 g oil로 비슷한 함량을 나타내었으나 효소량을 기질 질량의 2, 5, 10%를 사용하였을 경우, 1 hr 이후에도 DAG 함량이 증가하는 경향을 보였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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