KIM, HYUNG-JOON;JOON-SUNG PARK;HEUNG-SHICK LEE;YOUNHEE KIM
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제12권2호
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pp.336-339
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2002
A total of 100 Corynebacterial clones exerting a regulatory effect on the aceB promoter of Corynebacterium glutamicum were isolated by utilizing a reporter carrying the enteric lacZ gene fused to the promoter. The isolated clones were classified into 3 groups of A, B, and C, according to their color of colonies. Escherichia coli cells carrying clones in groups A and B showed a $90\%\;and\;50\%$ reduction in ${\beta}$-galactosidase activity, respectively. The introduction of group A clones into C. glutamicum also resulted in an almost complete reduction in the expression of the aceA and aceB genes, suggesting that the clones express repressor-like proteins for the genes. Although white colonies were formed on plates containing X-gal, E. coli cells carrying one of the clones in group C exhibited intact ${\beta}$-galactosidase activity. The result suggests that the clone may encode proteins that prevent the cells from accumulating the chromogenic compound, X-gal.
Liposomes of $pSV-{\beta}-Galactosidase$ vector plasmid DNA with various lipid composition were prepared by the thin-film method. Size distribution, shape and the efficiency of plasmid DNA encapsulation were investigated. Effect of sonication time on the plasmid DNA entrapment in liposomes and stability at $4^{\circ}C$ were also examined. Sizes of neutral liposomes were about 100-200 nm and above $1\;{mu}m$, and those of cationic liposomes were about 400-600 nm and above $1\;{mu}m$. Shapes of liposomes entrapped plasmid DNA were spherical. Proper sonication time for better entrapment was below 15 minutes and stability at $4^{\circ}C$ was decreased rapidly after 1 day. Plasmid DNA entrapments of complex liposomes of various lipids were higher than those of liposomes made from one sort of lipid. Plasmid DNA entrapments of cationic liposomes were higher than those of neutral liposomes.
Interspecific fusants were made from the cells of two strains of Lactobacillus genus, a streptomycin resistant Lactobacillus sp. JC-7 and a kanamycin resistant L. acidophilus 88. The morphological and physiological properties of the fusants were examined by determining bacteriocin productivity, acid-producing activity, ability of carbohydrates utilization and three important enzyme activities. The fusants produced a bacteriocin against indicator strains and fusant No. 1, 4 exhibited a larger inhibition zone compared to that of L. acidophilus 88. $\beta$-Galactosidase, phospho-$\beta$-galactosidase, lipase activities and resistance to NaCl of Lactobacillus sp. JC-7 were better than those of L. acidophilus 88. Fusant No. 3 and 7 exhibited excellent lipase activities. Protease activity and acid productivity of L. acidophilus 88 were better than those of Lactobacillus sp. JC-7. Proteasse activities of all fusants were higher than those of parental strains, and expecially fusant No. 5 and 7 exhibited excellent proteolysis ability.
The enzymatic properties of $\beta$-galactosidases from Aspergillus oryzae, bovine liver and Saccharomyces pragilis have been studied using enzyme-linked lectin assay based on the RC $A_{120}$ and BS-II lectins which specifically bind to terminal galactose and GlcNAc residue, respectively. Asialofetuin, a monomeric glycoprotein with approximately 48 kDa in molecular weight, was used as a substrate. This glycoprotein contains three N-linked triantennary complex type carbohydrate chains with each of which terminating in Ga1$\beta$P1 longrightarrow4G1cNAc (74%). Their optimal pHs were 3.5 and 6.5 (A. oryzae), and 3.5~5.5 (bovine liver and S. fragilis) at 37$^{\circ}C$ during 24 hrs, and the effective concentrations were 0.9, 2.9, and 1.7 mg/ml, respectively The enzyme from A oryzae requires 100 mM N $a^{+}$ or $K^{+}$, while the enzyme from bovine liver requires $Ba^{2+}$ for activity. However all of the three $\beta$-galactosidases were inactivated by SDS and C $u^{2+}$. These results indicate that the hydrolysis of glycoprotein such as asialofetuin depends on the reaction conditions of $\beta$-galactosidases and some metal ions. ions.
한국의 전통시장에서 구입한 김치에서 분리된 Leuconostoc lactis CCK940은 sucrose와 maltose를 이용하여 중합도가 4이상인 올리고당을 생산하였다. L. lactis CCK940의 유전체는 1,741,511 bp의 2개 contig로 구성된 염색체로 조합되었으며 G + C의 비율은 43.33%로 나타났다. 염색체 DNA에서 1,698개의 코딩 유전자, 12개의 rRNA, 68개의 tRNA 유전자가 확인되었다. L. lactis CCK940은 올리고당을 생산할 수 있는 sucrose phosphorylase, maltose phosphorylase, ${\beta}$-galactosidase 등의 glucosyltransferase 생합성 유전자들을 지니고 있었다.
젓갈류로 부터 Lactobacillus cases 2주와 L. pentosus 1주를 분리, 동정한 후 이들 유산균의 요구르트 제조 Starter로서의 이용 가능성을 고찰하고자, 이들 균주를 Starter로 이용하여 요구르트를 제조한 결과 요구르트 고유의 pH값은 $4.03{\sim}4.26$, 산도는 $1.049{\sim}1.217%$, 점도는 $1,772{\sim}2,232\;cps$, 그리고 생균수는 $1.4{\times}10^9{\sim}1.6{\times}10^9\;cfu/ml$였다. 요구르트의 완충능은 (요구르트 100 ml 기준) 1.0N HCl의 경우 12.50 ml 부터 14.06 ml 소모 되었고 1.0N NaOH는 9.46 ml 부터 13.06 ml 소모 되었다. 한편, 요구르트 제조시 균주 첨가 후 24시간 부터 72시간 동안 경시적으로 ${\beta}-galactosidase$ 활성도를 조사한 결과 48시간에 최고의 효소활성을 보였으며 이후에는 감소하였다. 또한 산성조건에서 2시간 동안 경시적으로 ${\beta}-galactosidase$ 활성도와 유산균 생존율을 측정한 결과 pH 3.5에서 2시간 후에는 $20{\sim}60%$ 정도 효소활성이 감소하였으며 pH 2.5와 pH 1.5에서 효소활성은 거의 없었다. 한편, 유산균의 생존율은 pH 3.5에서 2시간 후 거의 변화가 없었으나 pH 2.5와 pH 1.5에서는 각각 $1.9{\times}10^6{\sim}1.8{\times}10^8,\;1.0{\times}10^3{\sim}2.4{\times}10^5\;cfu/ml$ 수준이었다.
xylA 프로모터는 대장균의 xylose 대사에 관여하는 xylose 오페론 상의 중요한 프로모터이다. 이 프로모터는 xylose에 의해 강하게 조절을 받는다고 알려져 있다. 이러한 특징은 새로운 발현 백터를 구축하는데 충분한 조건을 갖추고 있다고 생각된다. 본 연구에서는 이러한 xylose에 의해 유도 되는 발현벡터를 구축하기 위하여 600 bp의 xylA 프로모터를 증폭하여 pUC18의 AatII와 HindIII 사이에 삽입하여 pXA600을 구축하였다. 또한 조절단백질인 XylR의 영향을 조사하기 위하여 xylR 유전자를 삽입하여 pXAR600을 구축하였다. 발현의 강도를 측정하기 위하여 3,048 bp의 lacZ유전자를 xylA 프로모터의 하류에 연결하여 pXA600-lacZ와 pXAR600-lacZ를 구축하고 대장균 JM109에 형질전환시켰다. 구축된 pXA600-lacZ와 pXAR600-lacZ는 LB 배지에서 배양하였을 때 xylose 유도하에서 각각 1,641 unit와 2,304 unit의 $\beta$-galactosidase 활성을 보였으며, DM 배지상에서 배양했을 때 xylose 유도 시 각각 6,282 unit와 9,320 unit의 $\beta$-galactosidase 활성을 보였다. 또한 왜래 유전자의 발현 가능성을 확인하기 위하여 S. thermocyaneoviolaceus의 내열성 xylanase를 코딩하는 xynA 유전자를 실제로 구축된 pXA600과 pXAR600에서 발현을 확인하여 pXA600 및 pXAR600이 새로운 xylose 유도성 발현벡터로서의 사용 가능성을 확인하였다.
Fabry 병은 성염색체 연관 유전성 리소좀 대사 질환으로 ${\alpha}$-galactosidase A 를 코딩하는 GLA 유전자의 변이로 인한 ${\alpha}$-galactosidase A 효소의 결핍에 의해 발생한다. 이 질환은 globotriaosylceramide (GL-3) 및 관련된 글리코스핑고리피드(glycophospholipids)가 신장 사구체, 심근, 후근 신경절 및 자율 신경계, 혈관 내피 세포 및 평활근 등에 축적되어 사지 말단 동통, 신부전, 심부전 등의 다양한 임상양상을 보이게 된다. 대증적 요법으로만 치료하던 Fabry 병은 효소대체요법의 발전으로 신부전을 포함하여, 심각한 합병증의 예방 및 호전과 함께 질환의 예후를 향상시키고 있다. 또한 사지 말단 동통은 Fabry 병 환자들의 삶의 질을 특히 떨어뜨리며, 적절한 효소대체요법에 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 저자들은 40대 후반에 Fabry 병을 진단받고 효소대체요법을 시작하여 사지 말단 동통이 호전된 중국인 남자 환자에 대해 보고하는 바이다.
Effects of alpha-galactosidase (GAL) on broiler corn-soybean meal diet was investigated. In experiment 1, sixty cockerels were allocated to five groups, including three enzyme treatments (GAL added at 0, 500, and 1,000 mg/kg diet), a nitrogen-free diet group and a fast group. The true nitrogen-corrected ME (TME$_n$) and true amino acid availability were determined. In experiment 2, 324 day-old chicks were used in a 2${\times}$3 factorial design consisting of two energy contents (high and low) and three GAL levels (0, 250, and 500 mg/kg). Three feeding phases, comprising 0-21 d, 22-35 d and 36-48 d, were involved. GAL addition improved TME$_n$ and the availability of methionine and cystine (p<0.05). The apparent ME (AME) or nitrogen-corrected AME (AME$_n$) and digestibility of dry matter, organic matter, calcium, and phosphorus were improved significantly on d 21, so was crude protein and an interaction of energy and GAL on AME$_n$ (p<0.05) was found on d 35. However, daily intake and daily gain were significantly improved with GAL addition (p<0.05) during 21 d. The small intestine relative weight decreased at 250 mg/kg GAL (p<0.05) on d 35, whereas presented an interaction between GAL and energy on d 21 (p<0.05). Likewise, this treatment increased breast muscle ratio (p<0.05). On d 21, triglycerides level of broilers showed interaction between energy and enzyme levels (p<0.05). Uric acid level in 500 mg/kg GAL declined linearly (p<0.05). On d 35, quadratic effects (p<0.05) were observed in total protein, albumin, globulin and cholesterol content for enzyme supplementation. And the interactive effects of energy and GAL on serum values showed more obviously. The study implies that GAL improved energy and nutrient availability of corn-soybean meal diet in broiler. The GAL supplementation to corn-soybean meal based diet can improve performance of broilers in early stages of growth.
This study was carried out to investigate the effects of Ca-gluconate (Ca-glu) on fruit firmness and softening enzyme activities of hydroponically grown tomato (Solanium esculentum Mill.). The obtained results revealed that the rate of weight loss was markedly increased from at storage to 5 days after storage (DAS) in control, and was constantly increased until 7 DAS as 4.1% in Ca-glu treatment. Fruit firmness was more rapidly decreased in Ca-glu induced fruit compared to control. Results showed that fruit firmness in control and Ca-glu treated fruit were 0.67 and $0.95kg{\cdot}{\varphi}12mm^{-1}$, respectively. In our investigation, no difference was revealed in Hunter's 'a' value between control and Ca-glu treated fruit. Total carotenoids content of control fruit were rapidly increased while the Ca-glu treated fruit were gently increased. Lycopene content was higher ($63.3{\mu}g{\cdot}g^{-1}\;FW$) in control than Ca-glu treatment ($56.8{\mu}g{\cdot}g^{-1}\;FW$). The activity of Polygalacturonase (PG) was rapidly increased with increasing storage period as from 0.4 to 1.2 units whereas the PG activity of Ca-glu treatment was gently increased from 1 to 7 DAS, and rapidly increased from 7 to 11 DAS. However, the pectinesterase (PE) activity was rapidly increased in control fruit, when the storage period was increased, but interestingly, the Ca-glu treated fruit was slowly increased from 1 to 7 DAS, and rapidly increased 7to 11 DAS. ${\beta}$-galactosidase activity of Ca-glu induced fruit was rapidly increased from 1 to 7 DAS as from 1.6 to 3.0 units, and gently increased from 7 to 11 DAS. ${\beta}$-galactosidase activity of control were higher than Ca-glu treatment.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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