• 한국식품과학회지
• /
• 제35권3호
• /
• pp.366-372
• /
• 2003

유전자재조합 콩의 Agrobacterium sp. CP4 유래 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase(CP4 EPSPS)를 편리하고 경제적으로 검출하고자 효소면역측정법(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)을 개발하였다. CP4 EPSPS에 대해 특이적인 다클론 및 단클론항체를 생산하였다. 다클론 항체의 경우 sandwich ELISA(검출한계, 0.03${\mu}g/mL$)는 competitive indirect ELISA(1${\mu}/mLg$)보다 CP4 EPSPS의 검출감도가 낮았다. 생산된 단클론항체 3종의 CP4 EPSPS에 대한 인식부위는 Mab1과 Mab2는 서로 같은 부위를 Mab3는 다른 부위를 인식하는 것으로 나타났다. 한편, 다클론항체 및 단클론항체를 조합하여 실시한 sandwich ELISA의 검출감도를 서로 비교하였다. 그 결과, 항원 포획단계에서 단클론항체 Mab2를 코팅하고 다클론항체-horseradish peroxidase(HRP) conjugate를 사용하였을 때 가장 양호한 검출감도(검출한계, 0.02${\mu}g/mL$)를 나타내었다. 본 연구에서 개발한 sandwich ELISA는 제초제 저항성 유전자재조합 콩의 분석에 적용가능할 것으로 생각된다.

• 한국식품과학회지
• /
• 제46권3호
• /
• pp.269-275
• /
• 2014

메밀로부터 분리한 메밀단백질(BWP)을 토끼에게 면역하여 생산한 특이항체를 이용하여 가공식품 중 메밀의 검출을 위한 간접경합 효소면역측정법(ciELISA)을 확립하였다. 이때, BWP의 검출범위는 $0.05-100{\mu}g/mL$이었다. 특이항체 교차반응 결과, BWP, 메밀가루, 통메밀에 대한 반응성은 각각 100, 17.9, 11.8%를 나타내었으며 그 외 곡물 14종에 대한 반응성은 거의 나타나지 않아 메밀에 대한 특이성이 매우 높았다. 메밀가루는 $60-90^{\circ}C$에서 반응성이 평균 83.0%를 나타내었으며 $100^{\circ}C$에서는 44.5%로 반응성이 감소하였다. 메밀가루에 대한 spike test에서 메밀 생면, 삶은 면, 묵, 메밀곡물가루에서 평균 분석회수율이 각각 99.1, 98.6, 81.1, 104%로 매우 높게 나타났다. ciELISA에 의하여 22점의 시판시료 중 메밀의 함유량을 조사한 결과, 메밀 함유 표시된 12점에서 평균 분석회수율은 31.6%로 나타났으나 시료 중 메밀의 정성적 검출은 100%로 매우 우수하였다. 본 연구에서 개발한 ciELISA는 가공식품에 함유된 메밀을 검출하는데 매우 효과적으로 활용할 수 있을 것이다.

• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제25권2호
• /
• pp.149-153
• /
• 1987

요꼬가와홉충을 고양이 등에 실험적으로 감염시키면 그 기생부위인 소장의 점막에는 융모의 위축, 융합 등의 병적 변화가 일정기 간 나타나며 점막기 질(stroma)에는 심한 염증세포의 침윤이 일어난다. 이상의 병리학적 소견을 기초로 생각할 때 요꼬가와흡충 감염 경과중 특이 항체반응이 나타날 것으로 가정할 수 있다. 이 연구에서는 요꼬가와흡충의 피낭유충을 10,000개 및 80,000개씩 감염시킨 고양이 25마리에서의 혈청내 특이 IgG 항체가를 면역효소측정법 으로 조사하였다. 자연감염된 은어에서 분리한 피낭유충과 실험감염 개의 소장에서 4주일후 분리한 성충의 생리식염수 추출액을 항원으로 사용하였다. 그리고 감염된 충체의 수를 부검때에 세어 실제 감염략으로 하였다. 특이 IgG 항체가는 대조군 혈청에 비하여 감염 7일째부터 상승하기 시작하였으며 감염후 2∼4주일에 최고치에 도달하였다가 그 이후 일정한 수준을 유지하였다. 특이 IgG항체는 피낭유충 항원보다는 성충 항원에 대하여 더 높게 반응하였다. 그리고 감염충체수가 적은 고양이의 혈청내 IgG 항체가는 같은 감염기간의 대 량감염 고양이에 비하여 음았다.

• Pediatric Infection and Vaccine
• /
• 제25권1호
• /
• pp.54-59
• /
• 2018

기생충 감염은 소아 인구에게서 드물기 때문에 진단이 어려울 수 있다. 환아는 6개월 동안 간헐적인 상복부 통증과 양손과 양측 팔 모두에 발생한 홍반성 발진을 동반한 늑막 삼출을 주소로 내원하였다. 환아는 검사상 혈청 호산구증가와 현저한 삼출성, 호산구성 흉막삼출액이 확인되었다. 동시에 폐렴 미코플라스마에 대한 높은 항체가 때문에 항생제 치료를 받았으나 흉막삼출은 호전되지 않았다. 환아의 분변에서 시행한 기생충 알의 검사상 음성이었으나 혈청 및 흉막삼출액의 기생충 특이 항원에 대한 면역효소측정법에서 폐흡충 특이 IgG에 대해 양성을 보였다. Praziquantel의 치료 후 호흡기 증상, 흉수 및 피부 증상이 호전되었다. 이에 만성 복통과 홍반성 발진을 주소로 내원한 소아 환자에서 폐흡충에 의한 흉막삼출액을 진단 및 치료하였기에 보고하는 바이다.

• Journal of Periodontal and Implant Science
• /
• 제33권1호
• /
• pp.79-89
• /
• 2003

치주질환은 세균감염에 의해 치조골이 파괴되는 염증성질환으로서 치아상실의 주된 원인이다. Treponema denticola는 성인성 치주염의 병소에서 자주 발견되는 세균으로서 부착능 및 단백분해효소생성능과 같은 독성 인자가 밝혀져 치주조직 파괴에 있어서 중요성이 강조되어 왔다. 골개조는 조골세포의 골형성및 파골세포에 의한 골흡수의 균형에 의하여 유지되며 치주염시 야기되는 치조골파괴는 조골세포 및 파골세포 기능의 불균형에 의하여 야기되는 것으로 설명되고 있다. 골세포에 대한 영향으로서 T. denticola는 파골세포의 형성을 촉진시키는 것으로 보고되었으나 조골세포에 대한 영향은 아직 밝혀져 있지 않다. 따라서 본 연구에서는 T. denticola가 골형성에 미치는 영향을 알아보고자 마우스의 두개골세포로부터 조골세포를 분리한 후 T. denticola분쇄액으로 처리하여 본 세균이 조골세포의 alkaline phosphatase(ALPase) 활성, 석회화결절 형성 및 Prostaglandin $E_2\;(PGE_2)$ 생성에 미치는 영향을 평가하였다. ALPase활성은 p-nitrophenylphosphate분해능, 석회화결절형성은 Von Kossa 염색법, 그리고 PGE2의 농도는 효소면역측정법으로 측정하였다. T. denticola분쇄액 (2.5 ug/ml)은 마우스 두개골세포의 ALPase활성을 억제하였으며 석회화결절의 형성을 감소시켰다. 또한 동일한 농도의 균분쇄액은 마우스 두개골세포의 $PGE_2$ 생산을 증가시켰다. 균분쇄액과 prostaglandin의 합성억제제인 indomethacin으로 세포를 동시에 처리한 경우 T .denticola분쇄액에 의한 $PGE_2$의 생산은 감소되었으나, ALPase의 활성억제에는 변화가 없었다. 균분쇄액을 열처리하여 마우스 두개골세포에 처리하였을 때에도 ALPase의 활성이 억제되는 것에는 변함이 없었다. 이러한 결과는 T. denticola의 구성성분 중 열에 안정한 물질이 prostaglandin과 무관한 경로를 통해 조골세포의 분화를 억제함을 시사하며 이와 같은 T. denticola에 의한 골형성억제가 치주염시 야기되는 치조골 파괴에 관여할 수 있을 것으로 생각된다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
• /
• 제39권6호
• /
• pp.502-510
• /
• 1992

연구배경 : Neuron specific enolase (NSE)는 뇌조직의 신경원에서 처음 발견된 당분해 효소이며, APUD 세포 및 신경내분비계에도 존재하는 것으로 알려졌다. 소폐포폐암은 신경내분비세포 및 APUD 세포와 많은 공통점을 가지고 있다. 따라서 NSE 항체를 사용하는 면역조직화학 염색과 혈청내 NSE 농도측정은 신경내분비 분화를 하는 폐종양의 표지자로서 사용될 수 있으며 소세포폐암의 진단에 유용할 수 있다. 방법 : 소세포폐암으로 진단받은 22명과 대조군으로는 비소세포폐암환자 21명을 대상으로 하였으며 생검조직에서 NSE 항체를 이용한 면역조직화학염색을 시행하고 환자의 혈청에서 방사면역측정법으로 NSE 농도를 측정하였다. 결과: 1) NSE 항체를 이용한 면역조직화학염색 NSE 항체를 이용한 면역조직화학영색에서 소세포폐암군 환자는 18명중 9명에서 양성 반응을 보였으며, 비소세포폐암 환자중 면역조직화학염색을 시행한 16명중 5명에서 양성 반응을 보였다. 2) 방사면역 측정법에 의한 혈청 NSE농도 측정 비소세포폐암군의 혈청 NSE평균치는 $11.79{\pm}4.47\;ng/ml$이었으며 소세포폐암군의 혈청 NSE치는 개인차가 심하기는 하였으나(6.01~361.4 ng/ml) 그 평균치는 $59.30{\pm}77.88\;ng/ml$으로 두 군 사이에는 유의한 차이가 있었다. 소세포폐암환자중 limited disease군의 혈청 NSE 평균치는 $20.19{\pm}12.91\;ng/ml$이었으며, extended disease군의 혈청 NSE치는 역시 개인차가 심하기는 하였으나(17.15~361.44 ng/ml) 그 평균치는 $91.9{\pm}94.2\;ng/ml$로 두 군 사이에 유의한 차이를 보였다. 정상인에서의 혈청 NES 농도는 측정하지 않았으나 대조군인 비소세포폐암군환자 평균+2x표준편차인 20 ng/ml을 기준으로 할 때 소세포폐암환자 22명중 16명(73%)에서 증가된 소견을 보였고 이중 limited disease는 50%(5/10), extended disease는 92% (11/12)에서 증가되었으며, 비소세포암 환자중에서는 1명(1/21)만이 증가된 소견을 보였다. NSE 혈청농도와 면역조직화학염색 정도를 비교시 소세포폐암군과 비소세포폐암군 모두에서 유의한 상관관계를 보이지 않았다. 결론 : 혈청 NSE농도측정은 소세포폐암환자에서 암표지자로서 유용한 방법이 될 수 있을 것으로 사료되며 항 NSE 항체를 이용한 생검조직의 면역조직화학염색은 분화가 나빠 고식적인 현미경적 소견만으로는 소세포암과 비소세포암과의 강벌이 어려운 경우 정확한 조직유형 결정과 신경내분비 기원을 뵈이는 폐암의 진단에 도움을 줄 수 있을 것으로 사료된다.

• Clinical and Experimental Pediatrics
• /
• 제51권6호
• /
• pp.622-628
• /
• 2008

목 적 : 본 연구는 우리나라 소아에서 면역원성에 근거한 추가접종의 필요성 여부를 확인하고자 하였다. 방 법 : 2006년 9월부터 2006년 12월까지 강남 차병원에 내원하여 검사를 위해 혈액 채취의 기회가 있었던 12-23개월 사이의 소아 39명을 대상으로 하였다. 7가 폐렴사슬알균 단백결합 백신의 접종력에 따라 기초접종 군과 추가접종 군으로 나누었다. 백신에 포함된 혈청형(4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 23F)에 대하여 각각의 폐렴사슬알균 피막다당질 항체를 3세대 효소면역측정법으로 측정하였다. 결 과 : 각 혈청형에 대한 폐렴사슬알균 피막다당질 항체의 기하평균은 기초접종만 완료한 군보다 추가접종을 완료한 군에서 높았다(P<0.05). 폐렴사슬알균 피막다당질 항체가가 $0.35{\mu}g/mL$ 이상인 비율은 기초접종과 추가접종 군 모두에서 90.5-100%였다. 폐렴사슬알균 피막다당질 항체가가 $1.0{\mu}g/mL$ 이상인 비율은 추가접종 군에서 94.4-100%로 혈청형 6B와 14를 제외하고는 기초접종 군 보다 높았다(P<0.05). 폐렴사슬알균 피막다당질 항체가가 $5.0{\mu}g/mL$ 이상인 비율은 추가접종 군에서 50.0-94.4%로 모든 혈청형에서 기초접종 군 보다 높았다(P<0.05). 결 론 : 우리나라 소아에서 추가접종 후의 면역원성은 매우 좋았고 기초접종 이후에도 비교적 좋음을 알 수 있었다. 우리나라에 폐렴사슬알균 단백결합 백신의 도입과 접종 횟수를 결정하기 위해서는 전향적인 면역원성 연구가 지속되어야 할 것이라 생각된다.

• 농약과학회지
• /
• 제5권2호
• /
• pp.1-12
• /
• 2001

다클론항체를 이용하여 환경 시료중 유기인계 살충제 acephate를 분석할 수 있는 경합적 간접효소면역측정법(competitive indirect ELISA)을 개발하기 위하여 분석물과 화학구조가 유사하며 hexanoic acid를 지닌 3종의 hapten을 합성하였다. 이들 hapten을 active ester 방법으로 담체단백질인 keyhole limpet hemocyanin과 접합시켜 면역원으로 사용하있고, bovine serum albumin과 접합시켜 homologous 혹은 heterologous ELISA를 위한 코팅항원으로 사용하였다. 생산된 항체들과 코팅항원을 최종선발하여 acephate 잔류분석을 위한 ELISA를 위하여 최적화하였다. 단백질의 농도가 $1{\mu}g/mL$인 코팅항원 (hapten-3-BSA)과 다클론항체 #8377를 16000배로 희석한 heterologous ELISA에서 최적화된 acephate의 $IC_{50}$ 값은 110 ng/mL이었고, 분석범위와 최소검출한계는 각각 $10{\sim}1000$과 4 ng/mL 이었다. Acephate의 주분해산물이고 살충제로 사용되는 methamidophos을 위시한 몇몇 유기인계 살충제의 항체에 대한 교차반응은 모두 0.02%이하였다. 이와 같은 결과는 본 ELISA가 농산물 및 환경시료중의 acephate 잔류분석을 위하여 편리한 방법이 될 수 있음을 시사한다.

• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제24권1호
• /
• pp.49-54
• /
• 1986

폐흡충 충란항원의 항원성을 평가하기 위하여 감염 후 10개월된 충체에서 유리된 충란의 수용성 항원을 제작하였다. 실험감염 개 페흠충증에서 특이 IgG, IgM 항체의 생성을 효소면역측정법으로 충체항원과 비교 관찰하였다. 또한 disc-PAGE로 충란항원의 구성 단백질을 관찰하였다. 1. 폐흡충 충란항원에 대한 특이 IgG 항체는 충체가 충란을 형성하는 감염 8주에 상승하기 시작하여 12주에 최대치에 이르고 이후 일정한 항체가를 유지한 반면, 특이 IgM 항체의 생성은 대단히 미약하였다. 2. 폐흡충 충체항원에 대한 특이 IgG 항체는 감염 2주에 상승하여 관찰기간인 13주까지 계속 상승하였다. 항체가도 충란항원보다 높았다. 충체항원에 대한 특이 IgM 항체는 감염 2주부터 나타나 8주까지는 일정량을 유지하나 이후 감소하기 시작하여 12주에는 감염전 상황으로 되돌아왔다. 3. 폐흡충 충란항원은 전기영동상에서 단백질 band 2개로 관찰되었으며 성충의 충체항원에서 관찰되는 10개의 단백질 band중 Band 1과 Band 2에 해당되는 단백질 band임을 확인할 수 있었다. 따라서 2개의 단백질로 구성된 폐흡충의 수용성 충란항원은 특이 IgG 및 특히 IgM 항체 생산을 유도하나 성충충체항원에 비하여 그 항원성이 대단히 미약하다고 판단하였다.

• 대한미생물학회지
• /
• 제20권1호
• /
• pp.91-102
• /
• 1985

The advantages of enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) are its senstivity and simplicity in detecting IgG, IgM and IgA antibody. To apply ELISA to diagnosis of typhoid fever, antigen such as lipopolysaccharide of Salmonella typhi or killed whole cell must be coated on solid phase. It is easy to coat lipopolysaccharide on ELISA plate but troublesome to purify it. As it is easy to obtain the killed whole cells, the development of the appropriate method by which those antigens of S. typhi are optimally coated on solid phase is needed. To establish the appropriate method, carbonate buffer, methanol or poly-L-lysine was applied as binding substance on polystyrene or polyvinylchloride plate as solid phase when the killed whole cell antigens of S. typhi varided as follows: $10^6$, $10^7$, $10^8$ and $10^9\;cell/ml$. The criteria of the optimal method were determined as follows: 1. The optical density of positive sera is above 1.0(0.6 in IgM) at 1:10 serum dilution and is 0.3(0.2 in IgM) higher than that of negative sera: 2. The O.D. of sera is flat or lowering according to serum dilution: 3. It must be that the O.D. of negative sera is lower than 0.2 at the point of serum dilution where the O.D. of positive sera is higher than 1.0(0.5 in IgM). The results obtained were summarized as follows: 1. The methods which fitted the above criteria were to use poly-L-lysine as binding substance, polyvinylchloride plate as solid phase and $10^7\;cell/ml$ as antigen concentration of S. typhi(poly-L-lysine/polyvinylchloride/$10^7$) and poly-L-lysine/polyvinylchloride/$10^8$ in detecting IgG antibody, methanol/polystyrene/$10^9$, poly-L-lysine/polyvinylchloride/$10^8$ and poly-L-lysine/polyvinylchloride/$10^9$ in IgM and carbonate buffer/polystyrene/$10^8$, carbonate buffer/polystyrene/$10^9$, methanol/polystyrene/$10^8$, methanol/polyvinylchloride/$10^8$, methanol/polyvinylchloride/$10^9$, poly-L-lysine/polyvinylchloride/$10^8$ and poly-L-lysine/polyvinylchloride/$10^9$ in IgA. 2. The coaling method using poly-L-lysine, polyvinylchloride plate and $10^8\;cell/ml$ was best to assay IgG, IgM and IgA antibody all in one. By this method, to assay the each immunoglobulin calss with an appropriate fixed serum dilution, 1:320 dilution was best.