Human cytomegalovirus (HCMV) has the ability to activate the expression of many viral and cellular genes. Among various viral proteins, the immediate early proteins (IE1-72kDa, IE2-86kDa) have been known to be potent transactivators. The product of c-jun proto-oncogene is important in cell activation and differentiation. Here, we tried to find out if the IE could activate the c-jun promoter and also tried to identify the responsible sequence elements in the c-jun activation by IE1-72kDa. We found HCMV IE expression transactivated the c-jun promoter in human embryonal lung fibroblasts (HEL). The activation fold by IE1-72kDa, IE2-86kDa and IE2-55kDa was 23, 35, and 5, respectively. When the expression of each IE was combined, it showed synergism. Expression of (IE1-72kDa + IE2-86kDa) and (IE1-72kDa + IE2-86kDa + IE2-55kDa) resulted in 131 and 162 fold increase, respectively. The c-jun promoter region between -117 and -59 contains binding sites for the transcription factors Spl, CAAT, AP-l like (ATF/CREB), and MEF2. Transient expression assays were performed using various reporter plasmids containing the c-jun promoter-regulatory region linked to the luciferase gene and a plasmid expressing HCMV IE1 gene. Deletional and point mutational analysis showed that the sequence between -225 to -160 and the CTF binding site were involved in the up-regulation of c-jun promoter.
스파르가눔증을 혈청학적으로 진단할 경우, 환자 혈청과 민감하고 특이하게 반응하는 단백질이 36. 29 kDa임은 SBS-PAGE/immunoblot을 이용하여 이미 밝혀졌다. 이 연구는 이 단백질이 스파르가눔 충체의 어느 부위에서 생성되는 것인지를 알아보기 위하여 실시하였다. 스파르가쑴 충체의 조직표본을 만들고 36 kDa와 29 kDa 단백질에 반응하는 단세포군항체를 1차항체로 사용하였다. 그리고 avidin-biotinylated conjugate와 AEC (3-amino, 9-ethylcarbasole)를 이용하여 면역조직화학염색법을 실시하였다. 아울러 스파르가눔증 환자 혈청, 스파르가눔 생리식염수추출액으로 면역시킨 마우스 항혈청을 사용하여 반응양상을 비교하였다. 대조 염색으로는 PBS, 정상 마우스 혈청 및 전상인(정상인) 혈청을 각각 사용하였다. 1. PBS, 전상 마우스와 정상인 혈청으로 처리한 군은 어느 조직에서도 반응이 없었다. 2. 마우스 면역혈청을 사용하였을 때에는 표피상층, 표피, 표퍼세포, 유조직 (유조직), 배설강에 반응이 있었고 근육, 칼숨소체의 일부에도 반응을 보였다. 3. 환자혈청은 표피상층이 표피세포보다 강한 양성반응을 보였고 유조직에서도 반응이 있었다. 배설강, 칼슘 소제의 일부에 반응을 나타냈으나 표피와 표피세포에서는 반응이 약한 환자혈청도 있었다. 4. 단세포군항체로 처치한 경우, 표피상층과 표피세포에 강하게 반응하였고 유조직의 일부에서 약한 반응을 보였다. 그러나 표피, 칼슘소체, 배설강 등에는 전혀 반응이 없었다. 이상의 결과는 스파프가눔에 존재하는 36, 29 kDa단백질이 표피세포에서 생성되어 표피상층으로 이동함을 시사하고 있었다.
본 실험은 국내 논에서 우점하고 있는 주요 제초제 저항성 잡초들과 저항성잡초 가능성이 매우 높은 잡초들의 초종별 방제가능 제초제들을 설정하기 위하여 실시하였다. ACCase 및 ALS 저해제들에 대한 저항성 강피 방제에는 이앙전 처리제인 oxadiazon, pyrazolate, pretilachlor, benzobicyclone+thiobencarb들은 강피 0.5엽기에서 효과적이었으며, benzobicyclon+fentrazamide+bensulfuron, benzobicyclon+mefenacet+bensulfuron와 benzobicyclone+cafenstrole+pyrazosulfuron-ethyl은 강피 2엽기까지 효과적으로 방제되었다. 국내 논에서 발생하고 있는 주요 SU계 제초제 8 초종들에 대한 대체약제들의 반응은 benzobicyclon과 mesotrione은 방동사니과 및 광엽잡초, bromobutide는 매자기를 제외한 방동사니과, carfentrazone과 pyrazolate는 광엽잡초들에 각각 효과적이었다. SU계 제초들에 대하여 저항성 가능성이 높은 다년생 벗풀에는 carfentrazone과 pyraclonil, 그리고 일년생 여뀌바늘에는 carfentrazone, pyraclonil과 mesotrione이 효과적이었다.
본 연구는 벼 최소경운 건답직파재배기술을 이용하여 논잡초성벼 방제를 시도하기 위하여 2011년에 수행되었다. 벼 최소경운 건답직파재배는 1자형 로타리날을 이용하여 무경운 상태의 논에서 조파 27 cm간격으로 폭 4 cm의 파종골을 내어 파종하는 벼 건답직파재배 기술이다. 이 재배기술은 파종 작업시 경운을 최소화하기 때문에 잡초성벼 방제가 가능하다. 2012년의 경우 4월 28일 잡초성벼가 발생을 시작하였고 5월 9일경 잡초성벼 발생 비율이 61.9% 이었다. 이때 파종을 하고 파종후 10일 제초제를 처리하면 89~96%, 파종후 15일에 처리하면 97~99%의 잡초성벼를 방제할 수 있었다. 하지만 해에 따라 잡초성벼 발생은 4월중 기온과 강수량에 영향을 받아 달라질 수 있다. 따라서 잡초성벼를 효과적으로 방제하면서 안정적인 쌀 수량을 확보하기 위해서는 4월 15~20일경 관개하여 잡초성벼 발생을 유도하여 적정파종시기가 당겨지는 방법이 좋을 것으로 판단되었다.
HBsAg. was identified in the urine of the patients positive for serum HBsAg. by Tripatzis in 1970. In 1977, Hourani et al reported the incidence of HBsAg. in urine was about 52% in the patients positive for serum HBsAg. with hemodialysis treatment due to chronic renal failure. A series of studies on the HBsAg. in urine has revealed the urine of the patients positive for serum HBsAg. to be important source of infection. But there's much room to debate on the relationship of HBsAg. in urine with infectivity and the exact mechanism of urinary emergence of HBsAg. The authors detected HBsAg. in serum and urine by employing sandwitch solid-phase rad ioimmunoassay, and performed urinalysis, liver function test and renal function evaluation. Percutanous liver and/or kidney biopsis were done. Among 38 renal disease patients, 9 cases (23.4%) were shown to be positive for serum HBsAg. and 5 cases (55.5%) among above 9 patients positive for urine HBsAg.. 56 cases (67.4%) of 83 liver disease patients revealed positive for serum HBsAg. but only 11 cases (13.2%) among the 56 cases positive fo urine HBsAg. All 10 renal and liver disease patients revealed positive serum HBsAg., and among the 9 cases (90%) positive for urine HBsAg.. In the 25 patients positive for urine HBsAg. all of 5 renal patients and 9 renal and liver patients had hematuria or/and proteinuria above 2 positive for albumin. But in the 11 liver patients 6 cases (55.1%) were normal findings. And there's no significant difference in cpm of urine HBsAg. between the patient positive for serum HBsAg. and negative, and in cpm of serum HBsAg. between liver and renal disease patients. But there's statistical significance in cm of urine HBsAg. between renal and liver diseases.
서울대학교 의과대학에서 개발한 항 CEA항체에 대한 방사성옥소 및 $^{99m}Tc$의 표지법을 개발하고 이런 표지항체의 면역학적 특성을 분석하였다. 1) 8가지의 항 CEA의 단세포군 항체중 CEA-79항체와 CEA-92항체가 가장 좋은 면역학적 특성을 보였다. 표지항체의 면역반응성은 60% 정도이었고, 항원/항체 친화상수는 $1\sim2\times10^9l/m$ 이었다. 2) CEA-79항체는 chloramine-T법으로, CEA-92항체는 iodogen 법으로 방사성옥소를 표지 하는 것이 가장 좋은 표지효율 및 면역 반응성을 보였다. 3) CEA-79항체는 0.5 mCi/mg에서부터 100mCi/mg까지 비방사능을 변화시켰을 때 표지효율이나 면역 반응성에 유의한 차이는 발견할 수 없었다. 4) Glucarate를 이용한 pretargeting transchelation법으로 CEA-79항체를 $^{99m}Tc$로 표지하는 조건을 확립하였다. 표지효율은 $60\sim70%$ 이었다. 본 실험을 통하여 얻은 적절한 조건의 $^{131}I$과 $^{99m}Tc$표지방법의 확립은 앞으로 방사면역신티그라피와 방사면역치료법에 유용하게 사용될 수 있을 것으로 기대된다.
그레이브스 갑상선기능항진증은 자가면역질환의 하나로 방사성 옥소가 간편하고 경제적이며 효과적인 치료법임이 알려져 있는데 방사성 옥소 투여 후 갑상선 조직의 자극 및 파괴에 따라 각종 항원의 노출의 증가와 이에 대한 자가항체의 변동이 예상된다. 저자들은 추정 갑상선 무게를 고려한 6-10 mCi의 방사성 옥소를 투여 받은 그레이브스 갑상선기능항진증 환자 90명을 2년간 추적하여 치료 전 후의 혈청 갑상선자극 면역글로불린(TBIIl)활성도와 thyroglobulin 및 antithyroglobulin antibody의 변화를 관찰하였다. 1) 대상환자 90명의 연령분포는 14-58세(중앙치 30)였으며 여자가 72명(80%)이었다. 2) 평가대상 환자 중 치료 전 TBIIl 활성도가 정상범위였던 경우는 15명(30%)이었고 증가된 경우는 35명(70%)이었다. 치료 전보다 치료 3개월 후에 TBII 활성도가 더 증가된 경우는 31명(62% )이었다. 3) TBII 활성도가 치료 전에 증가하였거나, 치료 전에 정상범위였다가 치료 3개월 후에 증가한 환자의 TBII 활성도의 동태는 치료 3개월 후에 가장 높았고 그 후 점차 감소하였다. 이들의 TBIIl 활성도가 15%이내로 정상화된 정도는 치료 후 6개월에 40%, 12개월에 82%였다. 4) 치료 전 antithyroglobulin antibody가 양성인 경우 80%에서 3개월 후에도 혈청 thyroglobulin의 동태는 치료 3개월 후에 높았다가 증가가 없었으며 치료 전 antithyroglobulin antibody가 음성인 경우 60%에서 치료 3개월 후에 혈청 thyroglobulin의 증가가 있었다. 5) antithyroglobulin antibody가 음성인 경우의 혈청 thyroglobulin의 동태는 치료 3개월 후에 높았다가 점차 감소하는 경향을 보였으며 antithyroglobulin antibody가 양성인 경우의 혈청 thyroglobulin의 동태는 치료 후 시간이 지남에 따라 점차 감소하였다. 6) 치료 전 antithyroglobulin antibody가 음성인 경우 치료 후 시간 경과에 따라 동시에 측정한 혈청 TBII 활성도와 thyroglobulin 사이에는 통계적으로 유의한 상관관계가 있었다(p<0.01). 한편 치료 전 antithyroglobulin antibody가 양성인 경우 치료 후 시간 경과에 따라 동시에 측정한 혈청 TBII 활성도와 thyroglobulin 사이에는 통계적으로 유의한 상관관계가 없었다(p= 0.16). 이상의 결과로 방사성 옥소를 투여 받은 그레이브스 갑상선기능항진증 환자에서 혈청 TBII 활성도는 항갑상선제를 투여 받은 경우와는 달리 초기에 증가하였다가 시간이 지남에 따라 점차 감소함을 알 수 있었으며 그 감소 정도는 항갑상선제만을 쓴 경우보다 더 빠를 것으로 생각된다. 따라서 혈청 TBII 활성도와 thyroglobulin은 방사성 옥소 치료효과의 관찰에 중요한 역할을 할 것으로 생각되며 특히 antithyroglobulin antibody가 음성인 경우 혈청 thyroglobulin은 혈청 TBII 활성도를 반영할 것으로 사료된다.
This study was designed to evaluate a direct method of $^{99m}Tc$ labeling using $\beta-mercaptoethanol$ as a reducing agent, and to investigate whether $^{99m}Tc$ labeled specific monoclonal antibody against carcinoembryonic antigen (CEA-92) can be used for the scintigraphic localization of human colon cancer xenograft. Purified CEA-92 IgG was fragmented into F $(ab')_2$ and then labeled with $^{99m}Tc$ by transchelation method using glucarate as a chelator. Labeling efficiency, immunological reactivity and in vitro stability of $^{99m}Tc$ CEA-92 F $(ab')_2$ were measured and then injected intravenously into nude mice bearing human colon cancer (SNU-C4). Scintigrams were obtained at 24 hour after injection. Then nude mice were sacrificed and the radioactivity was measured Labeling efficiency of injected $^{99m}Tc$ CEA-92 F $(ab')_2$, immunoreative fraction and in vitro stability at 24 hour of injected $^{99m}Tc$ CEA-92 F $(ab')_2$ was 45.2%, 32.8% and 57.4%, respectively. At 24 hour after injection, % ID/g in kidney (46.77) showed high uptake, but %ID/g in tumor (1.65) was significantly higher than spleen (0.69), muscle (0.16), intestine (0.45), stomach (0.75), heart (0.48) and blood (0.45). There was no significant difference between tumor and liver (1.81). Tumor contrast as quantitated by tumor to blood ratio of $^{99m}Tc$ CEA-92 F $(ab')_2$ was increased significantly (p<0.005) until 24 hours (3.70), and there was no statistical differece from tumor to blood ratio of I-131 CEA-92 F $(ab')_2$. The scintigram demonstrated localization of radioactivity over transplanted tumor, but significant background radioactivity was also noted over kidney and abdomen. It is concluded that CEA-92 F $(ab')_2$ can be labeled with $^{99m}Tc$ by a direct transchelation method using $\beta-mercaptoethanol$ as a reducing agent and $^{99m}Tc$ labeled CEA-92 F $(ab')_2$ can be used for the scintigraphic localization of human colon cancer xenograft in nude mice model.
우리나라에 존재하며 외국에서 분리된 것과 다른 특성을 보이는 IHNV를 대상으로 하여 이 바이러스의 면역유도단백질을 확인하고자 하였다. 먼저 우리나라에서 분리된 4종류의 IHNV를 미국에서 분리된 3종류의 IHNV(OSV, SRCV 및 RB-76)와 SDS-PAGE상에서 구조단백질의 크기와 혈청학적 특성 등을 비교하였다. 그 결과 우리나라에서 분리된 4종류의 IHNV중 2종류(PRT, MRT)의 IHNV는 미국에서 분리된 IHNV와 차이가 있었으며 (Park et al., 1993), IHNV-PRT를 대상으로 면역유도단백질을 확인하기 위해 IHNV-PRT에 대한 monoclonal antibodies(MAbs)를 만들었다. 이들 중 4종류의 hybridoma를 선택하여 hybridoma cell들이 분비하는 MAbs가 어떤 class인지를 ELISA 실험을 통하여 확인한 결과 4종류 모두 IgG class에 속하는 것으로 확인되었다. 이와같이 만들어진 4종류의 MAbs가 IHNV-PRT 구조단백질들 중 어떤 것에 대한 것인지를 western blotting 실험을 통해 확인한 결과, 2종류의 MAbs는 G단백질과 특이성이 있는 것들이었고, 나머지 2종류는 G보다 조금 큰 size의 단백질에 대한 것들이었다. 다음은 IHNV-PRT에 감염된 무지개송어의 혈청을 뽑아 여기에 존재하는 IHNV-PRT에 대한 항체를 western blotting 방법으로 분석을 한 결과 G, $M_1$, $M_2$ 및 G 보다 조금 큰 size의 단백질에 대한 항체가 존재하는 것으로 나타났다. 이상의 결과로부터 IHNV-PRT의 구조단백질들 중 G, $M_1$, $M_2$ 및 G 보다 조금 큰 size의 단백질들이 면역 유도 특성이 있음을 확인할 수 있었다.
흰털오가피의 면역활성 증진 효과를 알아보기 위하여 선발된 수컷 마우스를 대상으로 하여 발효유에 흰털오가피 (뿌리 : 잎 : 줄기)와 더덕 열수추출건조물을 (5 : 2 : 1.5) : 1.5 비율로 혼합하여 투여한 그룹 1 mg/mL(A), 3 mg/mL(B), 9 mg/mL(C) 3그룹으로 나누어 임상적용 경로인 경구투여를 선택하여 발효유를 각각 3 mL/kg씩 위내로 직접 투여하였다. 대조군은 발효유만 먹인 그룹(D)과 식염수만 먹인 그룹(E)을 두었다. 흰털오가피의 함량이 ICR계 수컷 마우스의 면역기능에 미치는 영향에 대해 알아본 결과 모든 그룹에서 마우스의 증체량과 체중 증가는 유의성 있는 차이를 보이지 않았고, 7주와 10주령에 안락사 시킨 마우스의 각 장기 무게에서도 간, 신장, 심장, 폐, 고환의 무게에서는 유의성 있는 차이를 보이지 않았다. 비장계수는 7주령 C군과 10주령 B군에서 유의성(p<0.05)있는 증가가 있었으며, 식이 지속기간이 길어질수록 증가된 반면, 흉선계수는 모든 군에서 유의성 있는 증가가 관찰되지 않았다. 항체생산 세포수는 흰털오가피 투여군이 대조군에 비해 증가하였으며, 7주령에 비해 10주령이 감소하는 경향을 보였다. 항원에 대한 항체 생성량을 알아보기 위하여 혈구응집반응을 실시한 결과 흰털오가피 투여군이 대조군에 비하여 증가하는 경향을 보였고 10주령 C군에서 유의성 있는 차이를 보였다. 면역글로블린 농도는 흰털오가피 투여군에서 증가하였고, 7 및 10주령 C군에서 유의성이 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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