Out of many component proteins in crude saline extract of Spirometra mansoni plerocercoid (sparganum) , 36 kDa and 29 kDa proteins were found to be the most antigenic and were already purified by immunoaffinity chromatography using monoclonal antibody as a ligand. In this study, a single step purification of these potent antigenic proteins of sparganum extract was investigated. When the crude saline extract was charged to gelatin-Sepharose 4B affinity column, 36 kDa and 29 kDa protein fractions were bound. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) and SDS-PAGE/immunoblot confirmed that the bound protein to gelatin was serologically pure. When evaluated by ELISA with patients sera, the purified protein of 36 and 29 kDa also showed improved antigenicity.
인체감염이 다발하는 폐흡충증의 혈청학적 진단에서 항원으로 사용하는 성충추출액은 여러단계의 질환 이행과정을 진단하는 항원으로서 문제가 있다. 이를 해결하려면 먼저 추출액내의 성분단백질의 성상을 파악할 필요가 있다. 이 연구에서는 폐흡충 성충 추출액으로 면역시킨 BALB/c mice의 비장세포와 SP2/0 형질세포종 세포를 세포융합하여 제작한 단세포군항체를 이용하여 친화성크로마토그래피로 폐흡충 성충의 구성단백질의 일부를 순수분리하고 성상을 관찰하였다. 그 결과는 다음과 같다. 1. 세포융합으로 PFCK-21, PFCK-44, PFCK-136, PFCK-189 등 4종류의 단세포군 항체를 얻었다. 그중 PFCK-21과 PFCK44는 17k Da, PFCK-136은 23, 46, 92 kDa 단백질에 반응하였고 PFCK-189는 여러종류의 단백질에 반응하였다. 2. PFCK-44 단세포군항체를 고리로 친화성 크로마토그래피를 실시하여 분리한 성분 단백질은 disc-PAGE상 4번째에 위치하고 분자량이 17 kDa로 알려진 단밸질이었다. 이 단밸질은 17 kDa의 monomer로 판단하였다. 면역조직화학염색을 실시한 결과 이 단밸질은 장관 상피세포에 반응하고 있었다. 3. PFCK-136 단세포군항체로 순수분리한 단밸질은 disc-PAGE상 1번 단밸질(440 kDa)이었으며 환원성 SDS-PAGE에서는 23 kDa 단밸질이었다. 면역조직화학염색으로 이 단세포군항체는 충란내 세포에 강하게 반응하고 있었다.
Kim, Hyeong-Won;Sin, Mi-Yeong;An, Eun-Gyeong;Kim, In-Ho
한국생물공학회:학술대회논문집
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2003.04a
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pp.480-483
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2003
Fusion ferritin$(F_H+F_L)$, an iron-binding protein, was purified from recombinant E. coli by two-step sonications with urea. Unfolded ferritin was refolded by gel filtration chromatography with various concentration of urea. 50 mM Tris-HCl(pH 8.0) buffers with 1 M to 4 M urea were used in GFC. Objective was to characterize the structure change with urea concentration. Molecular weight was determined using GF-HPLC and RP-HPLC was used to quantify the unfolded and refolded proteins.
본 실험은 H-Y 항원 유전자 크로닝을 위한 기초연구로서 H-Y 항원의 특성을 규명하기 위하여 친화성 크로마토그래피에 의하여 H-Y 항원을 분리·정제하였다. 정소 추출액을 항체가 결합된 column에 결합시킨 뒤 10% acetic acid로 용출시켰다. 용출된 분획을 모아 농축한 후 HPLC와 SDS-PAGE를 실시하여 H-Y 항원의 분자량은 약 6,7000달톤 임을 알 수 있었으며 isoelectric focusing에 의하여 등전점(pI)은 5.0인 것으로 측정되었다. H-Y 항원에 대한 단일클론항체와 표지항원으로는 H-Y 항원-ABEI(aminobutylethyl isoluminol)를 사용하여 H-Y 항원 정량을 위한 화학발광면역분석법을 개발하였다. 항원항체 반응후 빛의 측정은 NaOH 존재하에서 microperoxidase/H2O2를 이용한 산화반응으로 실시하여 10초간 측정한 빛의 양을 적분하였다. H-Y 항원의 농도와 빛의 양과는 역비례하였으며 감도는 11.8ng/tube 정도이었다.
The iterative regression optimization strategy using two parameters is described and applied to the separation of amino acids and peptides by means of micellar liquid chromatography. The parameters examined are concentration of surfactant and 2-propanol. This approach results in a efficient optimization using a small number of initial experiments.
Proceedings of the Korea Air Pollution Research Association Conference
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2003.11a
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pp.366-367
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2003
암모니아 가스는 무색의 기체이지만 자극성이 크면서 부식성이 있고 수용액이 알칼리성인 대표적인 악취물질이다. 보통의 경우는 굴뚝 등에서 배출가스의 형태로 대량 방출되기도 하지만 자연상태에서도 여러 가지 생물학적 또는 화학적 반응 등을 통하여 생성되므로, 일상적인 생활 공간에서도 쉽게 검출될 수 있는 물질이다. 대기 중 암모니아의 농도는 기체상 시료를 직접 분석하는 가스 크로마토그래피와 시료를 액체상으로 변환시킨 후 암모늄 양이온의 농도를 분광광도법이나 중화적정법으로 측정한다. (중략)
Indirect photometric detection of aliphatic compounds such as alcohols, ketones and esters was investigated in high-performance liquid chromatography, These samples possessing nonchromophore or weak chromophore could be indirectly detected by a UV detector with addition of UV absorbing, p-chlorophenol or p-nitrophenol in mobile phase as detection reagent, and submicrogram detection limits were achieved. Some mixtures of samples were also able to be separated and quantitated with good resolution and comparatively high sensitivity under optimum conditions.
Proceedings of the Korean Society of Applied Pharmacology
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1993.04a
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pp.60-60
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1993
새로운 항생물질을 개발하기 위하여 토양으로부터 분리한 균주를 액체배지에서 배양하여 그 배양액을 여러 검정균에 대하여 종이디스크법으로 항균효력을 측정하였다. 그 결과 G(+), G(-)균에 강한 항균효력을 보인 토양균 SNUS 9101-55와 C. aibicans와 같은 진균류에 항균력을 보인 토양균 SN-US 9101-68을 선택하여 각각의 배양액에서 항생물질을 분리하고, 분리한 항생물질의 구조를 규명하고자 하였다. 토양균 SNUS 9101-55의 배양액으로부터 항생물질을 분리하기 위하여 양이온 교환수지 관 크로마토그래피와 셀룰로오스 관 크로마토그래피를 수행하여 시료 AMJ-I-212-B를 얻었다. 시료 AMJ-I-212-B의 IR, $^1$H-NMR, FAB-MS 스펙트럼을 얻어 분리한 항생물질의 구조를 분석하고 Sakaguchi test와 같은 정색반응을 통하여 그 발색단을 동정하여 이 항생물질의 구조가 스트렙토마이신과 동일하다는 것을 확인하였다.
An iron-storage protein, ferritin is a spherical shell consisting of 24 H-and L-chain subunits. Soluble form of fused($F_{H}+F_{L}$ chain) ferritin was separated from disrupted recombinant E. coii cells, followed by silica powder adsorption. Ferritin was recovered from silica-poweder by distilled water, which was applied to gel filtration chromatography(GFC). Collected ferritin fractions from the GFC were assayed via iron-uptake and its molecular weight determined using GF-HPLC. Fused ferritin showed a higher activity than the M- or L- chain ferritin by two times.
Nicotine was reacted with an equimolar amount of ozone in methylene chloride and distilled water. The reaction mixture was separated by column chromatography or thin layer chromatography and then purified by vacuum distillation. The six compounds obtained from this reaction were characterized by NMR, IR and Mass spectrometry. These were identified as unchanged nicotine, nornicotine, anabasine, ${\beta}$-nicotyrine, cotinine and nicotine-N-oxide. From these results, reaction mechanism for the ozonolysis ofon nicotine was proposed; the pyrrolidine ring is attacked by ozone at the 1'-position followed by further transformation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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