The purpose of this study was to investigate the changes about the cellular activity on DNA synthesis in the periodontal ligament of dog, in which experimental tooth movement was performed. A control and 5 experimental dogs, one and half year in age, were studied. Light force (50-75g) was applied by placing open-coil spring between left mandibular premolars ; heavy force (250-300g), between right mandibular premolars. Experimental dogs were sacrificed after infusion of bromodeoxyuridine(BrdU), at 12 hours, 1, 3, 7 and 14 days after force application, respectively. And the histologic and the immunohistochemical evaluation were performed on the obtained periodontal tissue around mandibular premolars, using anti-romodeoxyuridine antibody, which can indicate proliferating cells. The results were as follows: 1. The tearing of periodontal ligament and the vascular dilatation at tension side were observed in 12 hours, increasing until 3 days. After then it decreased; Such a finding was more evident in heavy force group than in light force group. 2. The hyalinization of the periodontal ligament and the activity of osteoclast at pressure side were observed in 12 hours, increasing until 3 days. But from 7 days on, it decreased; Such a finding was more evident in heavy force group than in light force group. 3. The BrdU expression in the control group was positive, mainly in the oral epithelium and the fibroblasts in the periodontal ligament, but negative in bone cells in periodontal ligament. 4. The BrdU expression in the experimental group was more positive in tension side than in pressure side; The expression was a little more positive in the periapical area than in the cervical area of tooth. 5. The BrdU expression in light force group was the highest in 1 day, after which it decreased; In heavy force group, it was the highest in 12 hours, after which it decreased. But in 14 days, there was no difference between the experimental group and control group.
The c-fos is known as neuronal marker of second neurons which is activated by noxious peripheral stimulation. To investigate the changes of c-fos el(pression in the trigeminal nucleus complex during tooth movement, immunohistochemical study was performed. Experimental rats(9 weeks old, 210 gm 21 rats) were divided into seven groups(normal, 1 hour group, 3 hour group, 6 hour group, 12 hour group, 1 day group,3 day group). Rats in the normal group were anesthesized without orthodontic force. Rats in the experimental groups were applied orthodontic force (approximately 30 gm) to upper right maxillary molar. Frozen sections of brain stem were immunostained using rabbit antisera. The changes of c-fos expression were observed with respect to rostrocaudal distribution, laminar organization, md duration of orthodontic force application. The study results were as follows $\cdot$The c-fos nuclei in the dorsal part were observed from ipsilateral transition zone of subnucleus interpolaris and subnucleus caudalis to $C_1$ cervical dorsal horn rostrocaudally. The maximal peak point was the rostral part of subnucleus caudalis. The greatest proportion of c-fos cells were located within lamina I and II. $\cdot$The c-fos nuclei in the dorsal Part were observed from the most caudal part of subnucleus interpolaris to the middle part of the subnucleus caudalis. $\cdot$The number of c-fos immunoreactive dot increased at 1 hour group, reached its maximum at the 3 and 6 hour groups, and showed a decreasing trend after 12 hours. These results imply that nociceptive stimulation caused by continuous orthodontic force might be modulated by transition zone of subnucleus interpolaris and subnucleus caudalis, subnucleus caudalis, $C_1$ spinal dorsal hem.
Journal of the korean academy of Pediatric Dentistry
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v.46
no.3
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pp.337-342
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2019
The aim of this study was to analyze cells from human dental pulp tissue of impacted supernumerary teeth as stem cells with flow cytometry. Human dental pulp cells from 15 supernumerary teeth were identified their characteristics as stem cells by expression of mesenchymal stem cell markers through flow cytometry analysis at passage 3 and passage 10. Cluster of differentiation (CD) 73, CD 90, CD 34, CD 45 and STRO-1 cell surface markers were used to figure out characteristics of dental pulp stem cells from supernumerary teeth. At passage 3, the cell population showed positive expression of CD 73, CD90 and STRO-1, lacked expression of CD 34 and CD 45. At passage 10, CD 73, CD 90 and STRO-1 showed positive expression while CD 34 and CD 45 showed negative expression. This study indicated that dental pulp stem cells of supernumerary teeth had the properties of mesenchymal stem cells at both early and late passage. Impacted supernumerary teeth could be considered as a noble source of stem cells because of rapid growth and maintaining characteristics of stem cells until late passage.
Kim Doo Soon;Kang Jin Oh;Hong Seong Eon;Kim Sang Ki;Lee Taeck-Hyun;Kim Chang-Ju
Radiation Oncology Journal
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v.23
no.3
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pp.157-160
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2005
Purpose: To investigate the effect of low dose radiation on neuronal cell proliferation In diabetic rats. Materials and Methods: A group of rats (first group) were divided into three subgroups (nondiabetic control, nondiabetic 0.1 Gy and nondiabetic 10 Gy groups) to determine the effect of radiation on normal hippocampal neuronal ceil proliferation. A further group of rats (second group) were divided into six subgroups (nondiabetic control, diabetic control, diabetic 0.01 Gy, diabetic 0.1 Gy, diabetic 1 Gy and diabetic 10 Gy groups) to determine the effect of radiation on hippocampal neuronal cell proliferation under diabetic conditions. Using immuno-histochemistry for 5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU), the number of neuronal cells in the dentate gyrus of all the groups was counted. Results: The number of BrdU-positive cells in the dentate Gyrus of the nondiabetic control, nondiabetic 0.1 Gy and nondiabetic 10 Gy subgroups of the first group were $45.95{\pm}3.42,\;59.34{\pm}5.20\;and\;19.26{\pm}2.98/mm^2$, respectively. The number of BrdU-positive cells in the dentate gyrus of the diabetic control, diabetic 0.01 Gy, diabetic 0,1 Gy, diabetic 1 Gy and diabetic 10 Gy subgroups of the second group were $55.44{\pm}8.57,\;33.33{\pm}6.46,\;67.75{\pm}10.54,\;66.63{\pm}10.05,\;23.59{\pm}6.37\;and\;14.34{\pm}7.22/mm^2$, respectively. Conclusion: Low dose radiation enhances cell proliferation in the dentate gyrus of STZ-induced diabetic rats.
Journal of the korean academy of Pediatric Dentistry
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v.43
no.4
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pp.419-426
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2016
For this research 20 supernumerary teeth impacted in the maxillary anterior have been extracted and pulp cells have been collected from them. From the collected pulp cells, total of 17 (10 males, 7 females) have been selected as subjects. From this research, the run-time of successive culture of the cell from tooth number pulp tissue was $2.91{\pm}0.29$ days. From the gathering of cells from the initial pulp tissue until gaining 80% confluency took $4.53{\pm}0.94$ which was the longest. The following successive cultures took $2.73{\pm}0.32$ days. Average runtime for female was $2.81{\pm}0.27$ days whereas male had average runtime of $2.98{\pm}0.29$ days. Average run-time for inversion was $2.94{\pm}0.30$ days and for normal location, $2.80{\pm}0.20$ days. Average runtime was $2.92{\pm}0.31$ days and other forms took $2.88{\pm}0.22$ days. In the future, follow up research would be needed to evaluate the efficiency of the cells collected from the initial passage and the latter passage as stem-cells and taking into consideration the less than 3 days'time for the subculture, it could be concluded that the research efficiency and fast cultivation would be sufficiently effective.
Optimal force for orthodontic treatment is the force that produces a rapid rate of tooth movement without discomfort to the Patient or ensuing tissue damage. Recently considerable interest has been generated in the application of magnets as a way to obtain an optimal force. The purpose of the present study was to investigate the effect of static magnetic fields of Sm-Co magnets on molecular and cellular activities. The distance of erythrocyte sedimentation was measured directly, and the activities and the syntheses of $Fe^{2+}$-related enzymes (catalase and NO synthase) and non $Fe^{2+}$-related enzyme (lactic dehydrogenase) were assayed by the spectrophotometer. The growth and the proliferation of osteoblast-like cells $MC_3T_3-E_1$ were determined by the crystal violet staining and the ${^3}H$-thymidine incorporation. The erythrocytes were exposed to the pole face flux density of 1,400 G (gauss), and the enzymes and osteoblast-like cells $MC_{3}T_3-E_1$ were exposed to the flux density of 7,000 G. The results obtained were as follows: 1. The distance of sedimentation of erythrocyte was not affected by the static magnetic fields. 2. The activities of catalase and lactic dehydrogenase were not affected by the static magnetic fields. 3. The intracellular syntheses of NO synthase and lactic dehydrogenase were not affected by the static magnetic fields. 4. The growth and the proliferation of cultured osteoblast-like cells $MC_{3}T_3-E_1$ were not affected by the static magnetic fields. These results suggested that the molecular and cellular activities were not significantly influenced by the static magnetic fields.
Park, Ok-Jin;Kwon, Yeongkag;Yun, Cheol-Heui;Han, Seung Hyun
Microbiology and Biotechnology Letters
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v.44
no.4
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pp.557-562
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2016
Aggregatibacter actinomycetemcomitans and Porphyromonas gingivalis are gram-negative bacteria frequently found in lesions from patients with periodontitis manifesting alveolar bone loss. Lipopolysaccharides are a major virulence factor of gram-negative bacteria. Bone resorption is known to be regulated by bacteria and their virulence factors. In the present study, we investigated the effects of A. actinomycetemcomitans and P. gingivalis on bone resorption. Heat-killed A. actinomycetemcomitans (HKAa) and heatkilled P. gingivalis (HKPg) induced bone loss in the femurs of mice after intraperitoneal administration. HKAa and HKPg augmented the differentiation of committed osteoclast precursors into osteoclasts, while they inhibited the differentiation of bone marrow-derived macrophages into osteoclasts. Concordant with the effects of the heat-killed whole cells, LPS purified from A. actinomycetemcomitans and P. gingivalis also augmented osteoclast differentiation from committed osteoclast precursors but attenuated it from bone marrow-derived macrophages. Taken together, these results suggest that the whole cells and lipopolysaccharides of A. actinomycetemcomitans and P. gingivalis induce the differentiation of committed osteoclast precursors into osteoclasts, potentially contributing to bone resorption in vivo.
Orthodontic force is a mechanical stress controlling both of tooth movement and skeletal growth. The mechanical stress stimulate bone cells that may exert some influence on bone remodeling. The purpose of this study was to evaluate the difference in cellular activity depending on mechanical stresses such as compressive and tensile force by determining the alkaline phosphatase(ALP) activity. A clonal osteogenic cell line MC3T3-E1 was seeded into a 24-well plate($2{\times}10^4/well$). At the confluent phase, a continuous compressive hydrostatic pressure($25g/cm^2$, $300g/cm^2$) and continuous tensile hydrostatic pressure($-25g/cm^2$, $-300g/cm^2$) were applied for 4, 6, 10, 14, 18, 20 days respectively by a diaphgragm pump. At the end of the stimulation period, cell layers were prepared for ALP activity assay. The ALP activity of the compressive group increased more than that of the tensile group at same force magnitude, whereas the cells responded to a similar pattern regardless of the type of mechanical stress The ALP activity of the compressive and tensile group turned into the level of the control group as the length of time increased. These results indicated that a mechanical stress may be more effective on cellular activity during active cellular proliferation and differentiation periods. The time to achieve maximum ALP activity was delayed as the mechanical stress increased in both the compressive and the tensile group. Accordingly, the magnitude of the stress rather than the type of mechanical stress may have more influence on cellular activity.
1. 목적 in vitro 상에서 법랑기질유도체가 치주인대섬유아세포, 불멸화 조골세포와 백악질 유래세포의 증식과 유전자 발현에 미치는 영향을 알아보고자 하였다. 2. 연구방법 및 재료 <세포증식 연구> 교정을 목적으로 발거한 치아에서 분리, 배양한 치주인대섬유아세포와 백악질유래세포, 그리고 $SaOs_2$ 세포를 이용하였다. 법랑기질유도체가 세포 증식에 미치는 영향을 알아보기 위해, 35 mm Petri dish에 dish 당 $5{\times}10^3$ 개의 세포를 접종하였다. 대조군은 1% 항생제와 10% FBS를 포함한 DMEM 배지를 이용했고, 5mM 초산을 첨가한 군과 첨가하지 않은 두 개의 대조군이 이용되었다. 실험군은 100 ${\mu}g/ml$의 법랑기질유도제를 첨가한 군과 100 ${\mu}g/ml$의 법랑기질유도체와 5 mM의 초산을 첨가한 2개의 실험군이 이용되었다. 각 군은 세 개의 배양접시에 행해졌고, 1, 3, 8일에 세포의 수를 각각 측정하였다. 결과는 repeated measures ANOVA로 통계 처리하였다. <유전자 발현 연구> 각 세포의 형질 특성을 알아보기 위해 RT-PCR을 실시하여 조골세포 분화 표식자와 연관된 Human collagen type I(COL I), human osteopontin(OP), human osteocalcin(OC), human alkaline phosphatase(ALP)와 human bone sialoprotein(BSP)의 mRNA 발현을 실험 1, 3, 8일에 걸쳐, 세 군의 차이를 비교 관찰하였다. 3. 결과 <세포증식 연구> 치주인대세포와 백악질유래세포, 그리고 $SaOs_2$ 세포의 증식은 법랑기질유도체에 의해 영향을 받지 않았다. 대조군과 초산이 포함된 대조군 그리고 법랑기질유도체와 초산이 포함된 실험군에서 유의할 만한 세포 수의 차이가 실험 기간 1, 3, 8일에 걸쳐 나타나지 않았다(p<0.05). <유전자 발현 연구> ALP와 COL I은 세 군의 세포에서 모두 발현되었고, 발현 정도는 EMD에 영향을 받지 않았다. OC은 세 군에서 모두 비교적 약하게 발현되었고, 특히 $SaOs_2$ cell과 백악질유래세포에서 약하게 발현되었다. EMD는 OC의 발현정도를 약하게 하였다. OP은 백악질유래세포에서 1, 3, 8일에 걸쳐 EMD 유무에 관련 없이 발현되지 않았다. 그러나 치주인대세포와 $SaOs_2$ cell에서는 강하게 발현되었다. BSP는 치주인대세포와 $SaOs_2$ cell에서 1, 3, 8일에 걸쳐 비교적 고르게 발현되었다. EMD 배지에서 배양된 백악질유래세포는 8일에는 BSP가 발현되지 않았다. 4 결론 이번 실험 결과에 의하면 법랑기질유도체는 치주인대세포, 불멸화 조골세포와 백악질 유래세포의 증식에 있어 유의성 있는 효과를 나타내지 않았다. 그러나, 유전자 발현에 있어서는, 치주인대세포와 백악질유래세포, 그리고 $SaOs_2$ 세포 모두에서 OC mRNA의 발현을 억제하는 효과를 나타내었다. EMD는 세포의 증식에는 영향을 미치지 않지만, 유전자 발현에 있어 일부 영향을 미치는 것으로 보인다. 법랑기질유도체가 세포의 증식과 유전자 발현에 미치는 영향은 배양된 세포의 형질특성, 배양환경, 배양일수 등에 따라 달라질 수 있다. 그러므로 법랑기질유도체가 in vitro 상에서 세포에 미치는 영향은 보다 정량화된 연구가 필요하다.
The purpose of this study was to verify the usefulness of MTT analysis as a tool of measurement of the periodontal ligament cell viability from the extracted rat molar. A total of 80 Sprague-Dawley white female rat of 4 week-old with a body weight of 100 grams were used. The maxillary left and right, first and second molars were extracted under Ketamine anesthesia. Twenty-four teeth of each group (divided as five groups depending upon the time-lapse after extraction such as Immediate, 10, 20, 40 and 60 minutes) were immersed in $200{\mu}l$ of MTT solution (0.5 mg/ml) and processed for optical density measurements. Another 10 teeth of each group were treated as same as above and sectioned at $10{\mu}m$ for microscopic examination. All measurements values were divided by the value of hematoxylin-eosin staining which represented the volume of each corresponding samples. Immediate and 10 minute groups showed highest MTT values followed by 20, 40, and 60 minutes consecutively. Statistical significance (p<0.05) existed between all groups except in immediate versus 10 minute groups and 40 versus 60 minutes. Histological findings also showed similar findings with MTT results in crystal shape and crystal numbers between the experimental groups. These data indicate that in vivo MTT analysis nay be of value for evaluation of the periodontal ligament cell viability without time- consuming cell culturing processes.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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