• Korean Journal of Animal Reproduction
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• v.24 no.1
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• pp.69-76
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• 2000

This study was carried out to improve of effective culture system on development of IVM/IVF/IVC bovine embryos. The cumulus-oocyte-complexes (COCs) collected from Korean cattle ovaries harvested at a local abattoir were matured in 50 ${mu}ell$ of TCM199 supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) and hormones (35 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$ FSH, 10 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$ LH, 1$\mu\textrm{g}$/$m\ell$ estradiol 17 $\beta$ under paraffin oil at 39$^{\circ}C$ in a humidified atmosphere of 5% $CO_2$in air. At 24 hrs after culture, matured oocytes were fertilized in vitro for 22~24 hrs with motile semen in which obtained by centrifugation of a frozen thawed semen on Percoll-density gradients (45% vs. 90%) at 500 g for 20 min. The presumptive zygotes were divided into three experimental groups. Single egg (Group 1), 25 (Group 2) or 50 eggs (Group 3) were cultured on cumulus cell in 50 ${mu}ell$ TCM199 supplement with 10% FBS for 6~9 days after fertilization. In vitro developmental rates into the blastocysts in the groups 2 and 3 were significantly (P＜0.05) higher than those of group 1 (37,27 vs. 6%, respectively). Cell number of blastocysts obtained in groups 2 and 3 at day 8 were significantly (P${mu}ell$) resulted in higher developmental competence and cell number of bovine blastocysts produced in vitro than those the culture of single embryos with cumulus cells.

• The Korean Nurse
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• v.32 no.3
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• pp.36-39
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• 1993

• Journal of Embryo Transfer
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• v.21 no.2
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• pp.121-128
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• 2006

In this study, we examined the effects of molecular weight, concentrations and treat the duration of polyvinylpyrrolidone (PVP) in vitro maturation (IVM) medium (Experiment 1), and the effect of PVP in IVM, in vitro fertilization (IVF) and in vitro culture (IVC) medium on the development and cell number of porcine embryos (Experiment 2). The base mediums were NCSU 23 solution for IVM, mTBM solution for IVF and PZM3 solution for IVC. In experiment 1, the development rates to 2 cell and blastocyst stage were not differ from the different molecular weight (MW), concentration and duration of PVP in IVM medium. However, the hatching rate of blastocyst was significantly higher in the group of MW 40,000, 0.5% and $0{\sim}44hr$ than in the other groups (p<0.05). In experiment 2, the results of IVM, IVF and IVC medium with (W) or without (W/O) 0.5% MW 40,000 PVP are follows. The development rate to 2 cell stage was highest in the group of W-W/O-W (p<0.05). The development rate to blastocyst and hatching rate was higher in the group of W-W/O-W and W-W/O-W/O than that of other treatments (p<0.05).

• Korean Journal of Animal Reproduction
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• v.23 no.3
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• pp.263-270
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• 1999

This study was conducted to investigate effects of L-ascorbic acid and selenium on maturation, fertilization, and development ablity of porcine follicular oocytes in vitro. When the follicular oocytes were cultured in the media containing 0, 62.5, 100 and 300 $\mu$M of L-ascorbic acid for 40~44h, the percentages of germinal vesicle breakdown were 86.8, 92.9, 91.7 and 92.6% respectively, and the nuclear maturation rates (M II) were 44.7, 57.1, 52.8 and 53.7%. The nuclear maturation rates of treated groups were significantly higher than those of non-treated group (p＜0.05). When the follicular oocytes were cultured at 0, 0.4, 0.8, and $1.5\mu$M of selenium for 40~44h, the nuclear maturation rates of treated groups were significantly higher than those of non-treated group (p＜0.05). The addition of L-ascorbic acid or selenium to the maturation medium, the incidence of male pronuclear formation was significantly increased (p＜0.05) and polyspermy rate was significantly decreased (p＜0.05). The addition of L-ascorbic acid or selenium to the maturation medium increased the clevage rate, morula and blastocyst rate (p＜0.05). These results suggested that the addition of L-ascorbic acid and selenium to maturation medium increase the nuclear maturation rates, male pronuclear formation and normal embryonic development: in porcine oocytes matured and fertilized in vitro.

• Development and Reproduction
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• v.10 no.4
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• pp.239-245
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• 2006

Experiments were conducted to determine the effects of beta-mercaptoethanol(${\beta}-ME$) supplements to the maturation medium on in vitro fertilization(IVF) and intracellular glutathione(GSH) concentration. Bovine cumulus-intact oocytes were matured in TCM-199 medium containing FBS, hormonal supplements, and ${\beta}-ME$(0, 25 and $50\;{\mu}M$) for 12h and 24 h. After culture, cumulus-free matured oocytes were co-incubated with frozen-thawed spermatozoa for 24h. Maturation rate increased(p<0.05) in ${\beta}-ME$ treatment group, but no significant differences among treatment groups. Also, increases(p<0.05) in intracellular GSH concentration before and after fertilization were observed in $50\;{\mu}M\;{\beta}-ME$ supplements to the maturation medium. Male pronuclear formations after IVF was increased(p<0.05) in ${\beta}-ME$ treatment group, but no significant difference among treatment groups. In conclusion, supplementing ${\beta}-ME$ into the maturation medium increased maturation rates, fertilization rates, and intracellular GSH concentrations.

• Proceedings of the KSAR Conference
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• 2002.06a
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• pp.44-44
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• 2002

본 연구는 돼지의 미성숙 난포란을 체외에서 성숙, 수정시킨 후, 생산된 체외 수정란을 NCSU 23 체외배양액에 항산화제(NAC, ebselen 및 glutathione) 와 성장 인자 (EGF, PDGF)의 첨가가 돼지 체외 수정란의 체외 발육에 미치는 영향을 검토하였다. NAC을 0, 0.5, 1.0 및 2.0 mL 첨가하여 체외배양한 결과, 상실배기 이상 발육된 체외발육성적이 1.0mL과 2.0 mM 첨가구가 여타구보다 유의하게 높은 체외발육성적을 나타냈다.(p〈0.05). (중략)

• Clinical and Experimental Pediatrics
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• v.46 no.3
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• pp.224-229
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• 2003

Purpose : To examine various neonatal outcomes and perinatal factors resulting from assisted reproduction compared to that of spontaneous conception. Methods : This is a retrospective study. The control cases were all twins of spontaneous conception born between periods from January 1995 to June 2000. The study cases were identified from twins conceived by assisted reproduction in the same time peried. A total of 460 sets of twins consisted of 250 twins of spontaneous conception and 156 twins of assisted reproduction were studied. The primary outcomes were neonatal morbidity and mortality and the secondary outcomes were perinatal factors including number, length and cost of hospitalization for the delivery. Results : No differences were seen in various neonatal factors including gestational age, birth weight and incidences of respiratory distress syndrome, patent ductus arteriosus, necrotizing enterocolitis, hyperbilirubinemia, sepsis, intraventricular hemorrhage and the length of hospitalizations. Lower one minute and five minute Apgar scores and frequently encountered electrolyte abnormalities were observed in neonates of assisted reproduction. In general, the second twin of assisted reproduction had increased incidences of respiratory distress syndrome, sepsis and necrotizing enterocolitis than the first twin. Increased frequencies of preterm labor, hospitalization and elective cesarean section were seen among mothers who underwent artifical conception. However, overall hospital costs in terms of mothers hospitalization for the delivery and neonates hospitalization did not show differences. Conclusion : Assisted reproduction twins had similar neonatal morbidities, mortalities and perinatal morbidities compared to those born by spontaneous conception.

• Proceedings of the KSAR Conference
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• 2003.06a
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• pp.64-64
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• 2003

본 연구는 돼지의 미성숙란을 체외에서 성숙, 수정시킨 후 생산된 체외수정란을 NCSU23 체외배양액에 sodium pyruvate, hemicalcium lactate 및 glucose를 첨가해 돼지 체외수정란의 체외발육에 미치는 영향을 검토하였다. NCSU23 체외배양액에 Glucose 0 mM, 2.78 mM, 5.56 mM 및 11.12 mM을 처리하여 체외배양한 결과 분할율은 glucose처리구가 무처리구에 비해 통계적으로 유의하게 높은 성적을 나타냈으며(P<0.05), 상실배까지 체외발육률 또한 glucose처리구가 무처리구에 비해 통계적으로 유의하게 높은 성적을 나타냈다 (P<0.05). 한편 배반포까지의 체외발육율은 5.56 mM 처리구가 다른 처리구에 비해 높은 경향을 나타냈지만 통계적 유의성은 인정되지 않았다. Glucose와 0.4mM sodium pyruvate, 2mM hemicalcium lactate 공동배양 처리구와 glucose를 첨가하지 않은 처리구의 분할율은 처리구간 커다란 차이를 나타내지 않았으며, 상실배기 이상 발육된 체외 발육율도 처리구간 커다란 차이를 나타내지 않았다. 또한, 각 처리구간 분할율은 hemicalcium lactate와 glucose공동배양 처리구가 가장 좋은 성적을 나타냈지만 통계적 유의성은 인정되지 않았으며, 상실배기 이상 발육된 체외 발육율은 hemicalcium lactate만 첨가한 처리구가 가장 좋은 성적을 나타냈지만 통계적 유의성은 인정되지 않았다. Sodium pyruvate를 체외수정 후 8시간, 48시간, 96시간, 120시간에 제거하였을 때 분할율은 sodium pyruvate를 제거하는 시기가 늦어질수록 분할율이 향상되는 경향을 나타냈지만 통계적 유의성은 인정되지 않았다. 또한, 상실배기 이상 발육된 체외 발육율은 제거하는 시기가 늦어질수록 체외 발육율이 향상되는 경향을 나타냈지만 통계적 유의성은 인정되지 않았다. 본 연구의 결과 돼지 체외수정란의 체외배양시 glucose의 첨가는 체외발육을 증진시키는 결과가 있었으며, glucose와 sodium pyruvate, hemicalcium lactate 공동배양은 체외배양에 별다른 영향을 미치지 못하는 것으로 나타났다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• v.24 no.2
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• pp.241-251
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• 1997

체외성숙과 수정된 돼지 난자의 체외발달능이 체외배발생 배양액인 NCSU 배양액에 0.4% BSA, 10% 혈청 혹은 아미노산 (2% BME 아미노산 용액과 1% MEM 아미노산 용액)을 첨가함으로서 조사되었다. 본 실험에 공시된 난자는 체외수정 추 30시간 (2-세포기)혹은 48 시간 ($2{\sim}4$-세포기)에 회수하였다. 실험I에서 0.4% BSA가 첨가된 NCSU 배양액에서 2-세포기 난자들의 배양경과시간에 따른 발달능을 조사한 결과, 배양 후 72 시간 (체외수정 후 102 시간)에 상실배기와 배반포기 배가 나타났으며, 배양 후 120 시간째 (체외수정 후 150 시간)에도 팽창된 배반포기 배까지만 발달하였다. 실험II는 체외수정 후 48 시간의 분할된 ($2{\sim}8$-세포기) 난자들의 핵과 외관적 분할구와의 수적 차이를 조사한 결과, $2{\sim}4$-세포기보다는 5-세포기 이상에서 핵과 분할구의 조화에 차이가 많았다. 실험III에서는 $2{\sim}4$-세포기 난자들을 배양후 5일째의 배반포들의 투명대의 두께, 난자 크기 그리고 inner cell mass (ICM)과 trophectoderm (TE)의 세포 배열을 조사한 결과, 난자의 크기가 커짐에 따라서 투명대가 얇아지고 전체 세포수가 증가하였지만, ICM의 비율은 차이가 없었다. 실험IV에서는 BSA, 혈청 혹은 아미노산이 첨가 혹은 무첨가된 배양액내에서 $2{\sim}4$-세포기 난자들의 배반포 후 부화능력을 조사한 결과, 모든 군에 있는 난자들은 팽창된 배반포기 배까지 발달할 수 있었던 반면, 난자의 부화는 아미노산 혹은 혈청이 포함된 배양액에서만 일어났다. 더우기 상실배기와 배반포기 시기에 혈청의 첨가는 부화 배반포기 배의 발달을 현저히 증가시켰다. 또한 아미노산과 혈청의 영향을 받은 팽창 배반포기 배는 얇은 투명대, 팽창된 난자의 크기 그리고 ICM과 전체 세포수의 증가를 보였다. 이상의 결과로 미루어 볼때, 배양액내에 대한 아미노산과 혈청의 첨가는 돼지 배반포기 배의 부화를 유도할 수 있다고 보며, 더우기 이들 요소들은 투명대의 두께, 난자의 크기 그리고 ICM과 전체 세포수에 영향을 미친다.

• Proceedings of the Korean Society of Developmental Biology Conference
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• 2003.10a
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• pp.139-139
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• 2003

최근, 한우의 수정란 체외이식두수가 급격히 늘어나고 있으나, 모축의 등록번호를 대부분 확인 할 수 없으며, 확인이 가능할지라도 개체별 수정란의 생산이 거의 이루어지지 않고 있다. 본 실험에서는 모축의 등록번호가 확인된 개체의 난소로부터 채취한 난포란만을 체외성숙, 수정, 배양하여 배 발생율을 조사하고, 동결성적을 조사하였다. 도축된 한우의 난소를 개체별로 채취하여 2$0^{\circ}C$생리식염수에 넣어 3시간 이내에 실험실로 운반하고, 난포란을 채취하였다 개체별로 채취한 난포란은 9~47개/난소였고, 평균 14.3개/난소였다. 개체별 난포란은 IVMD 101 (일본, 펩티트연구소)에서 22물24시간 동안 체외 성숙시킨 후, IVF 100(일본, 펩티트연구소)으로 2회 세정한 후, 각각의 배양액 50${\mu}\ell$ 소적에 5개씩 5~6시간 수정시켰다. 수정란을 저 산소 배지 IVD 101 (일본, 펩티트연구소)로 7~9일간 배양하여 배 발생율을 조사하고 동결하였다. 평균 수정율은 81%, 배반포의 발생율은 35% 였으며, 동결 가능한 수정란은 평균 4개/두 정도 얻을 수 있었다. 이상의 결과로 한우의 개체가 확인된 난소로부터 수정란생산이 가능하고, 육질등급이 우수한 한우의 수정란생산이 가능해졌으며, 앞으로 고 능력 젖소의 난소에서도 고능력 수정란의 생산이 가능할 것으로 사료된다.