• 한국발생생물학회:학술대회논문집
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• 한국발생생물학회 2003년도 제3회 국제심포지움 및 학술대회
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• pp.135-135
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• 2003

본 연구는 체세포 핵이식 복제 수정란의 이식에 의한 고능력 한우를 다량 증식하기 위한 방안을 확립하기 위하여 수행되었다. 본 실험에 공여된 체세포는 육질과 육량 등급이 국내에서 100위 이내의 암소 귀세포를 채취하여 동결 및 계대배양하여 사용하였다. 한편, 핵이식 수정란의 준비를 위하여 도축장에서 채취한 난소에서 난자를 회수하여 22시간 성숙배양 후 난구세포를 제거하고 극체가 존재하는 난자만을 선별하여 recipient cytoplasm으로 이용하였다. 난자의 제핵, 체세포 핵이식, 전기융합 및 활성화 처리는 본 실험실의 방법에 준하여 실시하였으며, 핵이식란은 CR1aa 배양액 내에서 5% $CO_2$, 95% Air 및 39$^{\circ}C$의 기상조건하에서 7일간 배양 후 이식에 이용되었다. 한편, 수란축은 2회 이상 정상 발정주기가 확인된 경산우와 미경산우에 25mg의 PG $F_{2}$$\alpha$/를 투여하여 발정을 유기하거나 자연발정우를 선발하여 수란축으로 이용하였다. 그 결과, 배반포기배를 이식한 경우 14두중 5두에서 임신이 확인되었으며 그중 4두에서 유산되었고, 1두는 임신 6개월령으로 정상 발육되고 있는 것이 확인되었지만 상실배기단계에서 이식된 경우는 임신이 되지 않았다. (중략)

• 식물조직배양학회지
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• 제22권4호
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• pp.207-211
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• 1995

고추냉이의 미숙배를 어뢰형 배(stage I )와 자엽배의 (stage II )로 구분하여 캘러스, 배발생 및 식물체 재분화에 미치는 생장조절제의 효과와 치상적기를 조사하였다. 캘러스 및 배발생은 미숙배의 자엽부분에서 관찰되었는데 캘러스의 양상에 따라 기관분화와 배발생이 이루어졌다. 캘러스 형성률은 stage I의 경우 1.0 mg/L IAA에서, stage II의 경우 1.0 mg/L 2,4-D와 0.1 mg/L BA 혼용처리구에서 가장 양호하였다. 체세포배 발생은 stage I의 미숙배는 생장조절제 무처리구에서, stage II의 미숙배는 1.0 mg/L IAA 처리구에서 가장 높았으며 캘러스를 통하거나 자엽에서 직접 발생되었다. Stage II의 미숙배가 stage I에 비해 캘러스 및 체세포배 발생이 왕성하였다. 이들 체세포배는 동일배지에서 계대배양하여 정상적인 식물체로 재생되었다.

• 식물조직배양학회지
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• 제28권2호
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• pp.113-116
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• 2001

성염색체의 조성이 다른 수영 (Rumex acetosa L.) 암·수 개체의 잎 절편 배양을 통하여 얻은 체세포클론을 대상으로 염색체 분석을 수행하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 암 개체의 경우 조사된 25개체 중 21개체 (84%)가 야생형과 같은 염색체 조성 (2n=14)을 보였으며, 야생형에서는 관찰되지 않는 4배체 식물이 4개체 (16%)가 관찰되었다. 그에 비하여 수 개체에서는 20개체 중 4개체 (20%)만이 정상의 염색체 조성을 보여 성에 따른 체세포클론 변이에서의 차이를 보였다. 수 개체에서는 2n=14, 28 등의 이수체가 관찰되었으며, 4배체 (2n=30)로 나타난 체세포클론에서도 성염색체의 뚜렷한 배가현상이 관찰되지 않았다.

• 한국발생생물학회:학술대회논문집
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• 한국발생생물학회 2003년도 제3회 국제심포지움 및 학술대회
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• pp.90-90
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• 2003

체세포 핵이식에 의한 복제기술은 매우 낮은 성공률 나타내고 있어 실용화에 지장을 초래하고 있다. 이것은 후생적인 유전현상인 reprogramming이 불완전하게 이루어지기 때문인 것으로 추측되어지고 있다(Reik et al., Theriogenology 2003, 59: 21-32; Han et al, Theriogenology 2003, 59: 33-44). 체세포 핵이식 후에 태아사망의 원인이 태반의 비정상적인 기능과 관계가 있는 것으로 추정되는데 복제시 태아사망의 원인을 찾기 위해 본 연구를 시행하였다. 한우에서 체세포 복제 후 임신 말기에 태아가 사망한 태반조직 3개와 IVF 수정란 이식 후 동일한 시기에 제왕절개술을 실시한 태반조직 2개를 실험에 이용하였다. 태반 protein을 Two-Dimensional electrophoresis와 Mass spectrometer를 이용하여 분석 비교하였다. IPG-system을 이용하여 pH 4~7, pH 6~9에서 1차 전기영동을 한 후, 8~l6%의 SDS-PAGE gel에 2차 전기영동을 실시하였고 G-250 Coomassie로 염색하였다. gel 이미지는 Malanie III program을 이용하여 분석하였다. 전체 gel에서 약 1800개의 구분 가능한 protein spot이 나타났다. pH 4~7 범위에서 양적으로 차이나는 것 15개 중 복제한우 태반에서 증가되는 protein spot 5개와 감소하는 protein spot 10개를 골라 protein identification을 실시하였다. MALDI-TOF-MS를 이용하여 동정한 결과 phosphatidylinositol transfer protein-$\alpha$와 interleukin-18 등의 protein이 복제태반에서 발현이 증가되었고, 복제한우에서 발현이 감소되는 것으로는 vimentin, Rho-GDI-$\beta$, TRAST $\beta$-chain, ovarian sterol carrier protein 2, triosephosphate isomerase, tropemyosin beta chain, Aldose reductase 등으로 나타났다. 이러한 protein들은 inositol 지질 신호전달과 면역시스템, 세포분열, 산소 운반, steroidogenic 세포에서의 콜레스테롤 이동, 촉매 작용, 대사 작용 등에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 체세포 복제에 의한 태아사망 원인은 태반에서 이러한 protein들의 비정상적인 발현에 기인된 것으로 추정된다.

• 한국환경보건학회지
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• 제21권2호
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• pp.42-53
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• 1995

광주시 지역에서 사육하고 있는 젖소 1,614두중 유방염으로 의심되는 730분방 중에서 170분방을 검사분석하여 유방률, 균의 분리와 간이검사법과의 관계, 계절별 분리균의 분포, 항균 요법제에 대한 감수성 등을 검사하였다. 본 원인균은 730분방 중 134분방(18.4%)에서 분리되었으며 체세포 숫자는 평균 $1.620 imes 10^6pm 1.167 imes 10^6/ml$(C.V. 72.0%)이었다. CMT 반응치는 평균 $2.9pm 1.2$(C.V. 41.4%)이었으며 WT 반응치는 평균 $2.8pm 1.2$(C.V. 42.9%)이었다. RBVT와 CMT의 상관계수는 0.82(P<0.001)이었고 RBVT와 WT의 상관계수는 0.75 (P<0.001)이었으며 CMT와 WT의 상관계수는 0.93 (P<0.001)이었다. 체세포 숫자를 기준으로 하여 CMT 및 WT의 양성율을 비교하여 보면 원인균이 분리된 경우에는 체세포 숫자가 $0.49 imes 10^6$ 이하/ml의 경우에 반응치가 1+일때의 CMT는 72.4%, WT는 42.1%이었고 체세포 숫자가 $0.50 imes 10^6~1.00 imes 10^6/ml$의 경우에 반응치가 2+일 대의 CMT는 45.5%, WT는 48.8%이었으며, 체세포 숫자가 $3.01 imes 10^6$ 이상/ml의 경우에 반응치가 3+일 때의 CMT는 73.7%, WT는 92.3%이었다. 원인균의 월별 분리 빈도를 보면 8월 (17.9%)이 가장 높았고 다음은 9월(16.4%), 7월 (12.7%), 6월 (11.2%), 1월 (9.0%)의 순이었다. 원인균의 분리 빈도를 보면 Staphylococcus sp. (51.4%)가 가장 높았고 다음은 Escherichia coli(23.9%), Pseudomonas sp. (11.2%). Streptococcus sp. (6.7%)의 순이었다. 항균 요법제에 대한 감수성은 trimethoprim/sulfamethoxazole은 Streptococcus sp., Staphylococcus epidermidis, Proteus sp., Salmonella sp. 등에 높았고 gentamycin은 Streptococcus sp., Staphylococcus aureus, Enterobacteriaceae, Klebsiella sp., Proteus sp., Salmonella sp. 등에 높았으며 enrofloxacin은 일반적으로 거의 모든 균에서 감수성이 높았다.

• 한국산림과학회지
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• 제87권1호
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• pp.57-61
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• 1998

10년생 두릅나무의 동아(冬芽)를 절편으로 체세포배(體細胞胚)를 유도하고 식물체(植物體)를 재생(再生)시켜서 단지(團地)에 활착시키는 실험을 수행하였다. 배발생(胚發生) 캘러스는 MS 배지(培地)에 2, 4-D를 첨가하여 유도(誘導)되었다. 다량의 체세포배가 MS 배지에 2, 4-D와 BA를 동시에 첨가한 조건에서 발생(發生)되었다. 배발생 캘러스에서는 기형의 체세포배가 흔히 관찰되었으나 대부분은 전형적(全形的)인 배(胚) 형태(形態)를 보였다. 어뢰형에서 자엽(子葉) 단계(段階)에 이르는 성숙(成熟)한 체세포(體細胞) 배(胚)는 모두 발아(發芽)가 가능하였으나 완전한 식물체로의 재분화(再分化)는 MS 기본 배지에서 평균(平均) 14%이었다. 재분화된 식물체는 온실(溫室)에서 순화(馴化) 후(後) 단지(團地)에서 95% 이상 활착(活着)되었고, 이식(移植) 후(後) 3년까지 정상적인 생장(生長)을 보였다.

• 한국초지조사료학회지
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• 제19권4호
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• pp.297-302
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• 1999

알파파의 재분화된 식물체로부터 다량의 이차체세포배를 유도하였으며, 이들 체세포배로부터 재분화되는 식물체의 획득빈도를 향상시키기 위하여, 캘러스에서 유래된 배의 형태 및 형태별 유식물 분화 양상에 관한 실험을 수행하였다. 2,4-D 농도에 따라 체세포배의 형성에 차이를 나타내었는데, 생장조절제가 첨가되지 않았거나, 2,4-D가 $0.1mg/{\ell}$ 첨가된 배지에서 형성된 배는 약 57% 이상이 2개의 자엽을 갖은 정상배였으며, 2,4-D 농도가 증가할수록 정상체세포배의 출현빈도는 감소하였고, 2,4-D $4mg/{\ell}$에서는 10%만이 정상배로 나타났다. 배의 형태에 따른 발아율 및 유식물 분화양상을 조사한 결과, 2개의 자엽을 갖는 정상배의 경우는 발아율이 85%로 가장 높았으며, 정상식물체로 발육되는 비율도 80%로 나타났다. 그러나 자엽이 1개 또는 3~4개인 배는 정상적으로 발육되는 식물체의 비율이 10% 이하로 매우 낮았으며, 자엽이 5개인 배와 나팔모양의 배는 정상적인 식물체로 발달하지 못하였다.

• Journal of Ginseng Research
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• 제23권2호
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• pp.74-80
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• 1999

인삼 접합자배의 자엽을 식물호르몬이 전혀 첨가되지 않은 MS기본배지에 배양한 결과 자엽의 기부에서 높은 빈도의 체세포배가 유기되었다. 체세포배의 형성 빈도는 접합자배 자엽의 성숙도에 따라서 차이가 있었는데 미숙배에서 성숙배로 진행됨에 따라 감소되는 경향을 보였다. 미숙자엽의 경우에는 표피세포의 윗 아래층들이 모두 성숙자엽의 세포보다 더 적거나 더 촘촘하였으며, 많은 세포들이 체세포배의 형성에 관여하였으나 뿌리의 형성이 어려운 다배상태로 유기되었다. 그러나 발아직적의 성숙자엽은 표피세포의 윗층만이 촘촘한 세포로 이루워 졌으며 뿌리의 형성이 가능한 체세포 단일배로 유기되었다. 이런 결과는 체세포배의 기원과 발육이 배발생시 사용한 자엽의 성숙도에 따라서 배발생에 관여한 세포들이 단일 혹은 다량상태인지에 따라서 결정된다는 것을 의미한다.

• 식물조직배양학회지
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• 제28권1호
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• pp.21-24
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• 2001

식용 및 약용으로 사용되는 갯기름나물의 기내배양을 통한 재분화율을 조사하였다. 캘러스는 잎과 엽병의 절편체에서 발생하였고 0∼5 mg/L의 NAA와 0∼10 mg/L BA가 첨가된 MS 기본배지에 치상하여 암배양 결과 자발적인 배 분화와 기관 분화를 보여주었으며 2.5 mg/L NAA와 10 mg/L BA의 조건에서 재분화율이 가장 높았다. 체세포 배의 발생양상은 구형, 심장형, 어뢰형을 거쳐 자엽 단계로 발달하여 전형적인 접합자 배의 모습으로 발달하였다. 배 발생한 일차 체세포배를 0.2 mg/L의 NAA가 첨가된 배지에서 배양하였을 때, 이차 체세포배가 발생하였으며 주로 일차 체세포배의 배축과 하배축에서 많이 발생하였고 그 다음으로 자엽이나 뿌리 부분에서 발생하였다.

• 한국수정란이식학회:학술대회논문집
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• 한국수정란이식학회 2002년도 국제심포지엄
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• pp.70-70
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• 2002

형질전환 가축을 생산하기 위하여 최근 체세포 복제 기법을 이용하고 있다. 이러한 체세포를 이용한 형질전환 동물의 생산에는 체세포내에 유전자의 도입 효율이 직접적인 영향을 주게 된다. 따라서 본 연구는 세포내 유전자의 transfection 효율을 높이고자 한우의 체세포를 이용하여 여러 가지 조건에서 유전자 도입을 실시하였다. 세포내 유전자 도입 방법은 electroporation (EP) 방법을 이용하였다. 사용한 세포는 소의 귀세포(KbESF), 태아섬유아세포 (KbFF), 그리고 대조구로서 CHO cell을 이용하여 GFP 유전자를 도입하였다. EP는 0.4 cm cuvette을 사용하였고, voltage는 0.25 kV, 그리고 field strength 는 0.625 kV/cm 조건으로 실시하였으며, pulse times은 각각 1, 2, 또는 3회를 사용하였다. KbFF와 KbESF에서는 각각 pulse times을 증가시킬수록 유전자도입 세포수가 증가하였으나 (KbFF: 81, 634, 1,065 cells/$10^{6}$ cells, KbESF: 1,011, 5,567, 15,408 cells/$10^{6}$ cells), CHO cell에서는 pulse times을 증가시킬 수록 오히려 유전자도입 세포수가 감소하였다 (CHO: 1,591, 687, 297 cells/$10^{6}$ cells). 그리고 2주 동안 neo selection을 실시 한 결과 KbFF, KbESF, CHO에서 각각 93, 35, 184 colony가 선발되었으며, 이 중 65.6%, 8.6%, 4.3% 가 GFP 형광 발현 colony로 나타났다. 한편 CHO cell에서 transfection cell수가 감소된 것은 EP의 자극으로 인해 손상된 세포가 많이 발생한 것으로 나타났다. 또한 neo selection에서 선발된 colony중 GFP가 발현되지 않거나 일부만 발현되는 colony들이 많이 발생하였는데, 이것은 세포내 유전자가 transfection되지 않은 세포도 neo selection에서 선발된다는 것을 제시하고 있다. 따라서 체세포를 이용한 형질전환동물 생산을 위해서는 세포내 유전자 도입과 선발 과정에서 나타난 colony에 대하여 보다 엄격한 screen을 하는 것이 필요한 것으로 생각된다.