1960년대에 본격적인 연구가 시도된 난세포질내 정자직접주입법(Intracytoplasmic Sperm Injection ; ICSI)은 1976년에는 Uehara 등에 의한 hamster의 연구에서 최초로 전핵의 형성에까지 성공하였다. 이후 계속된 연구를 통하여 여러 동물종에서 이 방법에 의한 난자의 수정 및 배발달에 성공하여, 1988년에 토끼, 1991년에 소, 1995년에는 생쥐에서 산자의 생산에 성공하였다. 한편, 사람에 있어서는 1988년 Lanzendorf 등에 의해 최초로 사람난자가 난세포질내 정자직접주입법에 의해 수정에 성공한 것이 보고되었으며, 1992년에는 Palermo 등에 의해 이 방법에 의해 수정된 수정란 이식을 통한 임신 및 성공적인 분만이 보고되었다. 난세포질내 정자직접주입법에 있어서는 정자의 운동성 및 첨체반응 등의 유무가 수정에 관여하는 중요한 요인이 아닌 것으로 알려지고 있으며, 성숙한 정자가 아닌 정소상체(미부-두부)정자 혹은 정소내의 미성숙정자를 사용하여 난세포질내 정자직접주입법을 시행하여도 수정 및 임신이 가능한 것으로 보고되었다. 또한 정자세포(spematid)나 원형정자세포(round spermatid)를 수정과 배발달이 관찰되었으며 사람에 있어서는 분만까지 성공하였다. 현재까지 이 난세포질내 정자직접주입법은 학술적으로는 난자-정자가 결합하는 기전을 밝히는 연구에 이용되어 왔으며, 임상적으로는 시험관아기시술에 있어서 정자의 기능, 수 등이 문제가 되어 수정이 어려운 남성불임환자에게 적용하여 좋은 성과를 거두어 왔다. 향후 이 기술은 유전자진단이나 남성불임환자의 처치에 폭넓게 사용될 것으로 기대된다.
Effects of caffeine, heparin and caffeine-heparin treatments for in vitro capacitation of Korean Native Cattle sperm on acrosorne reaction and viability were studied using the methods of Wells-Awa and Dual stain. The results were summerized as follows: 1. The acrosome reaction of sperm when treated with caffeine after 0 to 4 hrs of preincubation were 11.0~75.7% for Wells-Awa stain, and 14.3~75.55% for Dual stain. True acrosome reaction of sperm for Dual stain was 3.0~29.2%. The viability of sperm was 62. 2~27.2%. 2. The acrosome reaction of sperm when treated with heparin after 0 to 4 hrs of preincubation were 17.0~81.2% for Wells-Awa, and 14.3~75.5% for Dual Stain. True acrosome reaction of sperm for Dual stain was 1.5~26.6%. The viability of sperm was 58.6~35. 8%. 3. The acrosome reaction of sperm when treated with caffeine-heparin after 0 to 4 hrs of preincubation were 13.0~83.2% for Wells Awa, and 11.0~78.5% for Dual stain. True acrosome reaction of for Dual stain was 5.1~26.3%. The viability of sperm was 60.5~30.1%.
Proceedings of the Korean Society of Embryo Transfer Conference
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2001.05b
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pp.4-16
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2001
Sperm competent for fertilization can become capacitated, bind to the zona pellucida (ZP)of an egg in a specific manner, and complete acrosomal exocytosis. Failure to carry out these functions results in infertility. Although the interactions between the ZP and the plasma membrane overlying the sperm acrosome have been considered important for sperm-egg recognition and signalling recent results have prompted a reassessment of current paradigms concerning these interactions. In this review, we're going to discuss about the roles of the acrosomal matrix, the particulate component of the acrosomal contents, in fertilization. The general hypothesis is that acrosomal exocytosis leads to the exposure of acrosomal matrix proteins that become de facto extracellula matrix(ECM) on the surface of the sperm head, and that the dynamic interactions of this newly-exposed sperm ECM with the egg ECM (the ZP) govern sperm-egg recognition and sperm penetration of the ZP. Informations from these experiments may provide new ways to address the poor ZP binding of sperm from some human infertility patients and may offer new avenues for contraception through the disruption of purposeful sperm-ZP binding.
This study was carried out to investigate the general semen characteristics of the Korean native goat and the effect of temperature, incubation time, dilution rate, freezing rate and glycerol concentration on motility and NAR (normal apical ridge) acrosome of fresh and frozen Korean native goat spermatozoa. 1. Average semen volume per ejaculate, motility, concentration and pH of fresh Korean native goat spermatozoa were 0.19${\pm}$0.09 ml, 94.5${\pm}$0.47%, 26.17${\times}$108${\pm}$1.68/ml and 6.63${\pm}$0.18, respectively. 2. Motility and NAR acrosome of fresh spermatozoa during incubation were higher at 22$^{\circ}C$ than at 5$^{\circ}C$ or 37$^{\circ}C$(P<.01). 3. Motility and NAR acrosome of spermatozoa diluted 1:4 during incubation were higher at 22$^{\circ}C$ than at 5$^{\circ}C$ or 37$^{\circ}C$(P<.01). 4. Motility and NAR acrosome of spermatozoa during incubation were higher for samples diluted 1:1, 1:2, or 1:4 than for samples diluted 1:6(P<.01). 5. Motility and NAR acrosome of post-thaw spermatozoa were higher at freezing rate of 12$^{\circ}C$/min than at freezing rate of 1$^{\circ}C$/min or 24$^{\circ}C$/min when glycerol concentration was 9%(P<.01).
This study aimed to evaluate the effect of seminal vesicle fluid (SVF) on the acrosome reaction (AR) occurred spontaneously or induced by $Ca^{2+}$ ionophore A23187, follicular fluid, and progesterone in mouse epididymal sperm. SVF was divided into high (MW>10 kD) and low (MW<10 kD) fractions by ultrafiltration. The low MW fraction of SVF decreased the rate of spontaneous AR, however the high MW fraction did not. It suggested that the low MW fraction of SVF might have contained decapacitation factor(s) responsible for prolonging of time need for capacitation. When sperm preincubated for 60 min in the presence of SVF, the rate of AR induced by A23187 was decreased, but prolongation of preincubation time for 120 min significantly potentiated the AR by A23187. It suggested that addition of SVF into sperm preincubation medium imposed the epididymal sperm a condition similar to ejaculation. AR induced by human follicular fluid or progesterone was also inhibited by SVF. It suggested that substance in SVF might have affected AR of mouse sperm by inhibiting the interaction between AR inducing ligands and sperm surface receptors involved in acrosomal exocytosis.
To investigate the process of spermoigenesis and glycogen effect during the spermatogenesis of Rana catesbeiana, the morphological characteristics of the testes were examined by light and transmission electron microscopy. Spermiogenesis of R. catesbeiana was divided into three stages on the basis of the features of the nucleus and the cytoplasm organelles. Except for the primary spermatogonia, the phases from the spermatocytogenesis to the spermatids before spermiation phase were surrounded by spermatocyst. Especially , the glycogen particles were not observed until in the stage of spermatocytogenesis, but from the early spermatids to the maturation phase were observed in the nucleus, acrosome and cytoplasm of the spermatids. The present result suggests that the glycogen may play an important role in the sperm maturation, and as a source of the energy in the wave-movement of sperm tail.
The ultrastructures of germinal cells of male marsh clam, Corbicujar lena were studied. The mature sperm was primitive type, consisting of head, middle piece and tail. The mature sperm was whip-shaped and its head was divided into two parts; the acrosomal part shaped long hollow cone about $3{\mu}m$ in length and the sperm nuclear part shaped a long stick about $9\;{\mu}m$ in length. The posterior part of the sperm nuclear projected to centriole, The middle piece of the sperm-nuclear had four mitochondria and two centrioles. The sperm tail part had the 9+2 microtubular arrangement known as a typical pattern, During spermiogenesis, chromatin within sperm nuclear became fiberic materials by condensation.
The aim of this study was to clarify the differentiation of seminiferous epithelial cells and spermiogenesis in the testis of Rana catesbeiana. Spermatogenesis of R. catesbeiana consists of primary spermatogonia, secondary spermatogonia, primary spermatocytes, secondary spermatocytes and spermatids. They were subdivided into eight stages on the basis of the morphological features of the germ cell differentiation. From the spermatocytes except primary spermatogonia to before the spermiation of spermatids were surrounded by spermatocyst. Spermiogenesis of R. catesbeiana can also be divided into three stages on the basis of morphological features of the nucleus and the cytoplasm organelles. Spermatozoon contained a saccular acrosome, a cylindrical and tapered slighty at both ends head, and a tail with only the axoneme.
The ultrastructure of sperms in testes of the pond smelt (Hypomesus nipponensis) was investigated using electron microscopes. The whitish testis was located between swim bladder and intestine. Especially, the left testis was larger than the right testis. The sperm was approximately $26\;{\mu}m$ in length. The sperm had an oval head and the acrosome was not found. The nucleus was about 400 nm in diameter and chromatin was incompletely condensed. The nuclear fossa deeply formed in sperm head and two centrioles were located in the fossa. The mitochondrium was observed only one in midpiece of the sperm and a motile flagellum consisted of an axoneme with a typical 9+2 pattern of microtubule. Also, the tail of the sperm has axonemal fins.
Spermatogenesis and fine structure of the spermatozoon of the marbled sole, Limanda yokohamae were examined by means of the scanning and transmission electron microscopy. The process of spermatogenesis of the marbled tole is similar to that of other teleost with external fertilization. During the spermiogenesis, chromatin that has been became fine]y granular progressively condenses into many large globules and that homogeneously condensed in the spermatozoan head. A spermatozoon consists of head and tail, and the acrosome is absent. The cytoplasmic collar contained eight mitochondria is observed in the posterior part of the head. The well -developed axonemal lateral fins are observed in the tail. In the TEM observation, the cross section of the axial filament shows '9+2' axonemal structure of microtubules, and the numerous vesicles are observed in the cytoplasm.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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