가금티프스는 닭, 오리, 칠면조, 꿩 등 가금류에 Salmonella gallinarum이 원인균이 되어 발병하는 질병이다. 본 연구는 가금티프스를 방제하기 위한 생균제 개발을 위한 기초조사의 목적으로 가금티프스 원인균인 5. gallinarum 의 생육을 저해시킬 수 있는 길항균을 야생꿩에서 분리, 선발했다. 최종적으로 3종의 우수 길항균주를 선발하였으며 선발, 분리된 길항균을 동정한 결과 Ll9, L33균주는 similarity가 100%인 Sphinromonas sanguis로 동정 되었고 L50균주는 similarity가 96.2%로써 Sphinromonas sanguis의 근연종으로 동정되었다. 선발된 길항균주가 생산한 길항물질의 특성을 확인해본 결과, S. gallinarum을 저해하는 물질이 고분자성 물질이고 내열성임을 추정 할 수가 있었다. S. sanguis Ll9의 경우 배양 20시간 이후부터 길항물질이 생산되었으며 탄소원, 질소원을 각각 maltose, $(NH_4)_2SO_4$를 첨가하였을 때 가장 높은 길항력을 나타내었다. S. sanguis L33의 경우 배양 22시간 이후 부터 길항물질이 생산되었으며 탄소원, 질소원을 각각 galactose, urea를 첨가하였을 때 가장 높은 길항력을 나타내었다. S. sanguis L50은 배양 10시간 이후부터 길항물질을 생산하였으며 탄소원, 질소원을 각각 saccharose, $(NH_4)_2S_2O_8$음로 하였을 때 가장 높은 길항력을 나타내었다.
황화수소 및 메틸머캡탄($CH_3SH$) 또는 DMS($CH_3SCH_3$)와 같은 황화합물들의 악취를 효율적으로 처리하기 위하여 축분으로 오염된 토양으로부터 sodium thiosulfate 또는 유리황과 같은 기질을 이용하여 미생물의 분리 및 동정을 하고 분리된 미생물들의 여러 가지 pH, 배양온도, 산소조건, 기질(황화합물) 농도, 질소원 및 탄소원의 농도 및 배양기 교반속도 등의 배양조건 하에서의 배양특성을 관찰하고 적정배양조건을 구축하였다. KD-1212와 DAH-1056 균주의 최적 pH는 각각 7.0 및 4.0이었으며 최적배양온도는 $30{\sim}35^{\circ}C$ 범위였다. 또한 독립영양미생물인 ED-1138 균주를 다른 오염된 토양에서 분리하였다. 균주를 고정한 바이오필터의 악취처리에 있어서 균주 DAH-1056이 기존 균주 Thiobacillus sp. IW보다 황화수소 제거능이 우수하였다. KD-1212 균주를 이용하여 황화합물의 농도 및 질소원 및 탄소원에 대한 성장특성을 조사한 결과, KD-1212는 sodium thiosulfate의 25 mM 농도에서 성장이 가장 잘되었고, 탄소원으로는 glucose와 maltose를 잘 이용하는 것으로 나타났다. 그리고 질소원으로는 yeast extract를 잘 이용하였으며 0.5% 농도에서 성장이 가장 잘 되었다.
Two-phase fermentation을 통한 Beauveria bassiana 149균주의 대량 배양을 위한 탄소원, 질소원, 기질 그리고 배양 조건 선발 실험을 실시하였다. 1차 액체 배양을 위한 적정 탄소원으로는 옥수수 분말, 전분 그리고 쌀가루가, 질소원으로는 펩톤과 효모 분발을 첨가한 것에서 포자 생산량이 높았다. 포자 대량 생산을 위한 기질 및 첨가물로는 톱밥+밀기울+옥수수 분말, 톱밥+밀기울, 쌀겨+밀기울 혼합에서 포자 생산량이 높았다. B. bassiana 149 균주의 포자 대량 생산을 위한 고체 배양 결과, 포자 생산량은 $30^{\circ}C$ 배양에서 $20^{\circ}C$보다 2배 정도 높은 경향을 보였다. B. bassiana 149 균주의 포자 생산량은 $25^{\circ}C$, 수분함량 60%와 70%에서 배양 시 $26.9{\times}10^8conidia/g$와 $38.6{\times}10^8conidia/g$로 40%와 50%의 $13.9{\times}10^8conidia/g$와 $11.6{\times}10^8conidia/g$ 보다 상당히 높았다.
포도당과 글루탐산을 함유한 배지에서 시드로포어인 2, 3-dihydroxybenzoic acid (DHB)를 생산하는 Acinetobacter sp. B-W 균주를 글루탐산을 유일한 탄소원과 질소원으로 함유한 배지에 배양한 결과, 상등액에서 2, 3-DHB가 아닌 카테콜 형의 시드로포어를 생산하는 것으로 조사되었다. 글루탐산의 농도는 3%에서 시드로포어 생산이 최고로 나타났으며, 3% 보다 높은 농도에서는 감소하는 것으로 조사되었다. 글루탐산을 유일한 탄소원과 질소원으로 함유한 배지에서 자란 균주 B-W는 배양 온도 $28^{\circ}C$에서는 시드로포어를 생산하지만 $36^{\circ}C$에서는 생산하지 않았다. 또한 $10{\mu}M\;FeCl_3$를첨가한 배지에서는 시드로포어 생산이 완전히 억제되었다. 글루탐산 배지에서 생산된 균주 B-W의 시드로포어는 TLC 전개 용매 butanol: acetic acid: water =12:3:5에서 Rf치가 0.32로 나타나 Rf치가 0.82인 2, 3-DHB와는 다른 것으로 조사되었으며, 또한 항산화 활성도 없는 것으로 나타나 항산화 활성을 가진 2, 3-DHB와는 다른 시드로포어인 것으로 추정되었다.
섬유소자원의 이용을 목적으로 담자균류인 T. trogii를 실험 균주로 하여 합성배지에서 cellulase 생성 최적 배양조건을 검토해 본 결과는 다음과 같다. 합성배지에서 T. trogii에 의한 cellulase 생산은 $30{\sim}35^{\circ}C,\;pH\;4.0{\sim}6.0,\;and\;11{\sim}15$일 배양시 가장 높았다. 탄소원은 Avicelase와 ${\beta}-glucosidase$의 경우 CMC를, CMCase는 cellulose를 탄소원으로 했을 때 최고의 생산성을 보였으며, CMC의 최적 농도는 세 효소 모두 3%이었다. 질소원은 ammonium tartrate 첨가시 cellulase 생산이 높았으며, 그 최적 농도로 Avicelase와 ${\beta}-glucosidase$는 0.03N, CMCase는 0.04 N이었다.
본 연구에서는 CFSTR(Continuous-flow Stirred-Tank Reactor) 형식의 반응조에 담체가 채워진 호기-혐기조합 공법에 따른 질산화 및 탈질화에 관한 효율의 증대와 유입수 및 침전조 상등액의 유량대비를 조절 하므로써 질소제거의 효율 증대에 관한 방법을 모색하고자 하였다. 탈질조 내의 탈질효율에 비례하여 포기 반응조 내의 질산성 질소 농도를 산출하고자 유입수와 침전조 내에서의 상등액을 탈질조로 반송하여 유입하고 유입수와 반송되는 침전조 상등액 유입의 유량대비를 통하여 최종적으로 반응조에 대한 질소제거의 효율을 파악하고자 하였다. 적절한 유량대비를 이용하였을 때 탈질조 내의 필요한 탄소원의 공급이 유입수로 통해 이루어지는 것으로 판단되어지며, 외부탄소원의 주입 없이 유입수 만으로도 완벽하게 탈질이 이루어지는 것을 확인 할 수 있었다. 하지만 유입수와 침전조 상등액의 유량대비에서 침전조 상등액의 유량비가 커지면 커질수록 유입수내의 탄소원의 유입이 줄어들기 때문에 이에 대한 탄소원의 농도에 대한 산정이 중요하다고 생각된다.
본 연구에서는 Chlorella saccharophila의 배양을 통하여 바이오에너지 자원을 대량으로 확보하고자 배지 최적화 실험을 진행하였다. 최적화 인자로는 배양 형태, 초기 접종량, 탄소원 종류 및 농도, 질소원 종류 및 농도, 배양시간이다. 실험 결과, 배양 형태는 광원과 외부탄소원을 모두 공급하는 mixotrophic 배양이 적절하였다. 초기 접종량은 3% (v/v), 탄소원은 glucose 30 g/L, 질소원은 $NaNO_3$ 0.95 g/L를 첨가하는 것이 우수하였다. 최적 배지 조건으로 배양한 결과, oil의 함량은 12일에서 가장 높았으나, 회수되는 C. saccharophila의 biomass양과 chlorophyll의 양은 10일에서 가장 높았다. 위의 결과는 미세조류의 배지 최적화를 통하여 대량배양을 위한 기초자료로 사용될 수 있으리라 판단된다.
청국장의 기호도를 개선하는 발효균으로 분리된 protease 생산균은 Bacillus licheniformis로 확인되었다. Protease 생산을 위한 배지를 최적화하기 위한 탄소원, 질소원, 인, 금속이온의 성분을 변화시키면서 균의 성장과 효소 생산성을 비교하였다. Glucose를 탄소원으로 사용하였을 때는 균의 성장은 정상적으로 일어나지만, protease 생산이 심하게 억제되는 것으로 나타났으며, Potato starch를 탄소원으로 사용하였을 때 효소 생산성이 가장 높았다. 질소원으로는 yeast extact가 효소 생산에 가장 적합하였다. 한편 2가 금속이온중 $Zn^{2+}$, $Cu^{2+}$, $Co^{2+}$을 배지에 첨가하였을 때는 균의 성장이 심하게 저해되었으며, 효소 생산도 되지 않았다. $CaCl_2$를 첨가한 배지에서는 균이 성장과 효소 생산성이 증가되었다. Potato starch(1.5%), yeast extract(1.5%), $CaCl_2$(0.7%), $K_2HPO_4$(0.03%)와 $KH_2PO_4$(0.03%)를 포함하는 것으로 구성된 최적화 배지에서 최대효소 생산성은 800 U/mL로 나타났으며 28시간 이후에는 배양액내 효소활성이 서서히 감소하였다.
액체배양을 이용한 잣버섯(Lentinus lepideus KACC 50120)의 균사체 생육에 관한 결과로는 최적온도는 $25^{\circ}C$이고, 최적 pH는 5.5이었다. 공시배지중에서 최대 균사 생육을 보인 최적배지는 YMG 배지로 조사되었다. YMG 배지를 기본배지로 하여 영양 요구성 실험을 한 결과 탄소원 선발 및 최적 농도에서는 최적 탄소원은 glucose이고 최적 농도는 4.0%(w/v)이며 질소원 선발 및 최적 농도에서는 malt extract와 yeast extract를 혼합하여 사용하였을 때 최대 균사 생육을 보였고, 상기의 두가지 복합질소원을 1:1의 무게비로 혼합하여 1.5%(w/v)농도로 첨가하였을 때 균사생육이 가장 양호하였다.
The production of fumaric acid in shaken flask cultures by Rhizopus oryzae KCTC 6946 was studied. The effects of various carbon and nitrogen sources on fumaric acid production were investigated. The strain fermented starch (or glucose) and corn steep liquor (or polypepton) better than other carbon and nitrogen sources to fumaric acid. When C/N ratio of carbon and nitrogen source was 41.7, the concentration of fumaric acid produced with 2N NaGH as a neutralizing agent was more than 10 g/L after 3 days.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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