• Korean Journal of Microbiology
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• v.32 no.4
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• pp.285-290
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• 1994

About 500 bacterial and fungal strains from a wide variety of natural habitats were screened for a new type II restriction endonuclease. Among the 500 species, we selected one species that produced a new restriction endonuclease. This strain has an optimum temperature of $30^{circ}C$ for growth. Morphological, cultural, and physiological characteristics were examined for identification of the isolated strain J-482. This strain was found to belong to the genus Alcaligenes. The restriction endonuclease was named as AspJI and partially purified from Alcaligenes sp. J-482 by DEAE-Sephadex A-50 column chromatography and gel filtration. Most of other nucleases were removed by the purification steps. The AspJI has a substrate specificity to ${lambda}$ DNA, pBR322 and Adenovirus-2 DNA. For its maximal activity, the isolated enzyme requires $MgCl_2$, which should be at least 12.5 mM and it does not need any other cofactors. It is maximally active in the absence of NaCl and is completely inactivated at 100 mM NaCl. The pH and temperature optima for activity were pH 7.5 and $37^{circ}C$, respectively. The DNA fragments generated by digesting ${lambda}$ DNA, pBR322, and Adenovirus-2 DNA with AspJI were the same as that produced by AatII. This suggests that AspJI is an isoschizomer of AatII.

• Reproductive and Developmental Biology
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• v.28 no.1
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• pp.37-43
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• 2004

This study was carried out to investigate PSS (Porcine Stress Syndrome) with the PSE (Pale, Soft, Exudative) in 319 different pigs(Yorkshire 150; Landrace 89 and Duroc 80). The PCR-RFLP method was adapted to detect the ryanodine receptor (RYR 1) gene mutation and to estimate the genotype frequency of the RYR1 gene in breeding pig population. The DNA samples were collected from hair follicles of pigs of Yorkshire, Landrace and Duroc. After DNA amplification by PCR, the PCR products were digested by restriction enzyme, Cfo I. Primary PCR products of ryanodine receptor gene were length of 659 bp in hair follicle and their second PCR products were length of 522 bp in hair follicle. The exon region (522 bp) including point mutation ($C \arrow T; Arg \arrow Cys$) in the porcine ryanodine receptor gene, which is a causal mutation for PSS, was digested with Cfo I restriction enzyme. The RYR1 gene was classifed into three genotypes by agarose gel electrophoresis. The normal homozygous (NN) individuals showed two DNA fragments consisted of 439 and 83 bp. The mutant homozygous (nn) individuals showed only one DNA fragment 522 bp. In addition, all three fragments (522, 439 and 83 bp) were showed in heterozygous (Nn) carrier animals. The normal homozygous (NN), heterozygous (Nn) and mutant homozygous (nn) were 98.00, 2.00 and 0.00% in Yorkshire pigs, 87.64, 11.24 and 1.12% in Landrace, 100.00, 0.00 and 0.00% in Duroc, respectively. The gene frequencies of N and n were 0.990 and 0.010 in Yorkshire pigs, 0.933 and 0.067 in Landrace, 1.000 and 0.000 in Duroc, respectively.

• Proceedings of the Korean Society of Toxicology Conference
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• 2002.05b
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• pp.106.2-132
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• 2002

형질전환 (유전자 결핍; Knockout) Min 마우스를 이용하여 대장암 발생에서 배추, 양배추 주성분인 indole-3-carbinol (I3C)의 대장암 예방효과를 규명하고자 하였다. 실험동물로는 C57BL/6J-Apc$^{min/+}$(Min 마우스)계의 5내지 6주령의 수컷 이형접합체 형질전환 마우스 70마리와 C57BL/6J계의 동일 산자, 동일 주령의 수컷 wildtype 비형질전환 마우스 10kfl를 The Jackson Laboratory 사 (Bar harber, ME, USA)로부터 직접 구입하였다. C57BL/6J-Apc$^{min/+}$계 수컷 이형접합체 형질전환 (Min)마우스 70마리를 각 군 20내지 25마리씩 세군으로 나누었다. Group 1에는 20마리, Group 2에는 25마리, Group 3에는 25마리를 배치하고, I3C 투여 실험군 (Group 1과 2)에는 실험시작시에 AIN-76A 분말사료에 I3C가 각각 100 및 300ppm이 함유되도록 조제하여 공급하였다. 그리고 실험군(Group 3)에는 실험시작부터 종료시까지 AIN-76A 정제고형사료(Teklad사, WI, USA)를 자유로이 급이하였다. 각군간의 체중, 사료 및 음수소비량을 매 2주마다 측정하였고, 10주간 (16주령)의 실험종료시에는 최종체중과 간장, 신장, 비장 등의 장기무게를 측정하여 상대장기 무게비를 산출하였다. 대조군으로서 C57BL/6J계의 동일 산자, 동일 주령의 수컷 wildtype 비형질전환 마우스 10마리는 같은 조건의 사육실에서 AIN-76A 정제고형사료를 33주간 자유로이 급이하였다. 실험동물은 부검전에 하룻밤 동안 절식하고 이산화탄소 흡입 마취하에서 흉대동맥을 절단하여 방혈하고 각 장기(심장, 폐, 위)를 적출하여 생리심염수에 넣어 장기무게를 측정하고 포르말린에 고정하였다. 소장과 대장의 검사를 위하여 위의 식도부위와 직장을 실로 결찰하여 적출하고 생리심염수를 주입하여 팽창시켜, 십이지장, 공장, 및 회장, 그리고 대장으로 나누어 여과지에 펼친 후 포르말린에 고정하였다. 소장과 대장은 육안 및 자동 영상분석길ㄹ 이용한 분석이 끝난 후에 각 부위별로 4-6개의 절편을 작제하여 포르말린에 재고정하고, 통상적인 조직처리과정, 파리핀 포매 및 3-4$\mu$m 두께의 조직절편을 제작하여 H&E 염색을 실시하여 현미경으로 검경하였다. 약 1주일간의 포르말린 고정이 끝난 소장 및 대장을 부위별, 별 종양개수 및 분포를 자동영상분석기(Kontron Co. Ltd., Germany)로 분석하였다. 체의 변화, 장기무게, 사료소비량 및 마리당 종양의 개수에 대한 통계학적 유의성 검증을 위하여 Duncan's t-test로 통계처리 하였고, 종양 발생빈도에 대하여는 Likelihood ration Chi-square test로 유의성을 검증하였다. C57BL/6J-Apc$^{min/+}$계 수컷 이형접합체 형질전환 마우스에 AIN-76A 정제사료만을 투여한 대조군의 대장선종의 발생률은 84%(Group 3; 21/25례)로써 I3C 100ppm 및 300ppm을 투여한 경우에 있어서는 각군 모두 60%(Group 1; 12/20 례, Group 2; 15/25 례)로 감소하는 경향을 나타내었다. 대장선종의 마리당 발생개수에 있어서는 C57BL/6J-Apc$^{min/+}$계 수컷 이형접합체 형질전환 마우스에 AIN-76A 정제사료만을 투여한 대조군은 1.40$\pm$0.24(100%)에 비하여 I3C 저농도 투여 실험군(Group 1; 0.85$\pm$0.23; 61%, P<0.01), 그리고 I3C 고농도 투여 실험군(Group 2 ; 1.32$\pm$0.29 ; 94%)의 순으로 감소하였다. 선종의 크기별 종양의 발생개수의 분포에 있어서 I3C 저농도 투여 실험군에 있어서는 선종의 크기가 3mm이하의 수가 현저하게 감소하였다. C57BL/6J-Apc$^{min/+}$계 수컷 이형접합체 형질전환 마우스에 AIN-76A 정제사료만을 투여한 대조군의 부위별 소장선종의 발생수는 십이지장부위를 제외하고 각 군에서 유의한 변화는 관찰되지 않았다. 십이지장 종양의 발생개수에서만 I3C 저농도 투여 실험군(Group 1 ; 3.11$\pm$0.85)이 대조군 (Group 3: 1.48$\pm$0.35) 및 I3C 고농도 투여 실험군(Group 2: 1.56$\pm$0.47)에 비하여 유의성 있게 증가하였다. (P<0.05). 따라서 I3C은 소장에서는 암예방 효과가 뚜렷하지 않으나, 대장에 대한 암에방 효과가 있을 것으로 생각된다. 소장 및 대장을 제외한 간장, 신장, 비장, 심장, 폐 그리고 위 등의 기타 장기에서의 조직병리학적 변화는 관찰되지 않았다. 소장 및 대장의 종양은 선종(polyps)으로 관찰되었다. 지난 10여년간 형질전환 및 유전자 결핍 실험동물의 종류가 기하 급수적으로 증가하여 이용되고 있다. 가족성 대장 선종성 용종증(FAP)의 대표적인 모델로 이용되고 있는 C57BL/6J-Apc$^{min/+}$계 수컷 이형접합체 형질전환 마우스를 사용하여 배추나 양배추의 주요성분인 Indole-3-carbinol(I3C)의 대장암 예방효과가 있는지를 검색하여 본 결과 AIN-76A정제사료만을 투여한 대조군의 대장선종의 발생률 84%에 비하여 I3C 100 및 300ppm을 투여한 실험군에 있어서 각군 모두 60%로서 감소하는 경향을 나타내었으며, 대장선종의 마리당 발생개수에 있어서는 대조군의 1.40$\pm$1.041를 100%로 환산하였을 경우 I3C 저농도 및 고농도 투여 실험군에서는 각각 약 61%와 94%를 나타내여 감소하였다. 특히 대장선종의 크기별 분포에 있어서 선종의 크기가 3mm이하의 수가 현저하게 감소하였다. 따라서 저농도 I3C의 투여는 실험적 유전성 가족성 대장 선종성 용종증 모델에 있어서 어느정도 암 예방효과가 있는 것으로 생각된다. 그러나 소장 선종의 발생에는 별 영향이 없는 것으로 생각된다. 그러나 본 실험에 사용된 C57BL/6J-Apc$^{min/+}$계 수컷 이형접합체 형질전환 마우스는 실험개시 시점이 7내지 8주령이 경과하여 이미 태생기부터 소장 및 대장의 선종 발생이 진행되어 온 것을 감안하고 특히 비스테로이드계 항염증 소염제(NSAIDS)와 같은 강력한 COX-2억제제가 아님을 고려하면, 상당한 선종의 발생을 억제할 수 있는 가능성이 매우 높다고 생각한다. 또한 이제까지 배추나 양배추 성분의 복합성분들에 대한 실험적 대장암 모델에서의 촉진효과 등에 대한 보고들이 있어 온 점을 고려할 때 위암(Kim 등, 1994) 간암(Kim 등, 1994), 유방암(Grubbs, 등, 1995; Bradlow 등, 1995)에 대한 예방효과가 있을 것으로 생각된다. 앞으로 이러한 종양조직내에서의 COX-2 및 iNOS mRNA와 단백질의 발현정도를 분자병리학적으로 연구중에 있으며, 향후 십자화과식물 성분인 indole-3-carbinol이 마우스뿐 만 아니라 랫드의 화학발암물질에 의한 대장종양에 대한 억제효과 있는지 연구 필요가 있다. Min 마우스와 같은 형질 전환(유전자결핍;knockout) 실험동물을 이용한 새로운 중기 발암성 시험범의 확립을 통한 각종 환경 유해물질의 발암성 유무 및 COX-2 억제작용이 있는 식품인자의 암예방 후보물질을 체계적으로 검색하는데 유용하게 활용될 수 있을 것으로 생각한다.

• Journal of Genetic Medicine
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• v.4 no.2
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• pp.160-166
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• 2007

Purpose : The ${\beta}$-adrenoceptors are pharmacologically classified into ${\beta}_1$-, ${\beta}_2$- and ${\beta}_3$-adrenoceptor. The gene of each subtype has polymorphisms related to their function (${\beta}_1$-adrenoceptor: Ser49Gly, ${\beta}_2$-adrenoceptor: Gln27Glu, ${\beta}_3$-adrenoceptor: Trp64Arg). The objectives of this study were to analyse the allelic and genotypic distribution of the representative polymorphism of ${\beta}$-adrenoceptors in preeclampsia and to investigate whether combined genotype of ${\beta}$-adrenoceptors may be associated with preeclampsia. Methods : Blood samples were collected from a Korean population (159 preeclamptic pregnancies and 168 normotensive pregnancies). The ${\beta}_1$-, ${\beta}_2$- and ${\beta}_3$-adrenoceptor genotypes was determined using polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism. Results : There were no differences in allelic and genotypic distribution of ${\beta}_1$- and ${\beta}_2$-adrenoceptor polymorphisms between the two groups. However, the Arg allele of ${\beta}_3$-adrenoceptor polymorphism were more frequent in preecalmpsia than in controls (P<0.05, OR=1.57, 95% CI=1.01-2.46). Moreover, prevalence of genotype carrying heterozygote of ${\beta}_3$-adrenoceptor polymorphism was increased in preeclampsia compared with controls (P<0.05, OR 1.76, 95% CI 1.06-2.92). When combination of the three polymorphisms were evaluated, pregnancies with the particular combined genotype that is consisted of heterozygote of ${\beta}_1$-, ${\beta}_3$-adrenoceptor and wild homozygote of ${\beta}_2$-adrenoceptor (Ser/Gly, Gln/Gln, Trp/Arg), showed a significant increase in the risk of preeclampsia (P<0.05, OR=3.01, 95% CI 1.12-8.08). Conclusion : A particular combined genotype (Ser/Gly, Gln/Gln, Trp/Arg) of - adrenoceptors was associated with the risk of preeclampsia.

• Journal of Life Science
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• v.23 no.2
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• pp.167-174
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• 2013

Peroxiredoxin 6 (Prx 6) is a member of the thiol-specific antioxidant protein family, which may play a role in protection against oxidative stress and in regulating phospholipid turnover. The aim of this study was to determine whether a human Prx 6/Luc vector was stably expressed and responded to antioxidants in a lung cell line (NCI-H460). To achieve this, the luciferase signal, hPrx 6 mRNA expression, and superoxide dismutase (SOD) activity were measured in transfectants with a hPrx 6/Luc plasmid after treatment with four antioxidant extracts, including Korea white ginseng (KWG), Korea red ginseng (KRG), Liriope platyphylla (LP), and red Liriope platyphylla (RLP). First, the hPrx 6/Luc plasmid was successfully constructed with DNA fragments of human Prx 6 promoter, amplified by PCR using genomic DNA isolated from NCI-H460 cells, and cloned into the pTransLucent reporter vector. The orientation and sequencing of the hPrx 6/Luc plasmid were identified with restriction enzyme and automatic sequencing. A luciferase assay revealed significant enhancement of luciferase activity in the four treatment groups compared with a vehicle-treated group, although the ratio of the increase was different within each group. The KRG- and LP-treated groups showed higher activity than the KWG- and RLP-treated groups. Furthermore, the luciferase activity against RLP occurred roughly in a dose-dependent manner. However, the level of endogenous hPrx 6 mRNA did not change in any group treated with the four extracts. The SOD activity was in agreement with the luciferase activity. Therefore, these results indicate that the hPrx 6/Luc vector system may successfully express and respond to antioxidant compounds in NCI-H460 cells. The data also suggest that the Prx 6/Luc vector system may be effectively applied in screening the response of hPrx 6 to antioxidant compounds in transgenic mice.