연(Lotus)의 항혈전 활성을 평가하기 위해, 연잎, 연자방, 연자육, 연자심, 연근 및 우절로부터 각각 열수 추출물을 제조하고, 이의 성분 분석, 항응고, 혈소판 응집저해 및 적혈구 용혈활성을 평가하였다. 연의 부위별 추출효율은 우절>연자심>연근>연잎>연자육>연자방의 순으로 나타났으며, 추출물들의 pH는 5.6~6.5, 산도는 0.06~0.20%로 다양하게 나타났다. Brix의 경우 연자육에서 70%로 가장 높게 나타난 반면, 연잎과 연자방에서는 분석한계(0.1%) 이하로 나타났다. TP 및 TF 함량은 연잎에서 179.7 및 68.5 mg/g으로 가장 높은 함량을 나타내었고, 총당은 연자육에서 873.0 mg/g, 환원당은 연잎에서 161.4 mg/g으로 가장 높게 나타났다. 한편 항응고 활성은 우절, 연잎 및 연자방 추출물에서 우수하였으며, 특히 연자방의 경우 TT, PT 및 aPTT 평가에서 무처리구에 비해 모두 15배 이상 연장된 강력한 활성을 나타내었다. 그러나, 혈소판 응집 저해 활성을 평가한 결과 연자심 추출물에서만 0.25 mg/ml 농도에서 무첨가구에 비해 25.1%의 혈소판 응집을 나타내어 강력한 응집저해 활성을 나타내었다. 인간 적혈구에 대한 용혈활성 평가결과, 연자육 추출물에서만 6.1%의 약한 용혈활성을 나타내었고, 나머지 부위 추출물에서는 용혈활성이 나타나지 않았다. 본 연구결과는 연 산업의 부산물인 우절, 연자방, 연자육 및 연자심이 혈전성 질환 예방 및 치료용 식의약품 소재로 개발 가능함을 제시하고 있다.
Hemagglutinating antigen of Toxoplasma gondii was prepared and purified by the method of a slight modification of Tsunematsu, and the preparation of the skin test antigen (toxoplasmin) was made by means of acetone-ether treatment described by Nobute et al. With these antigens the passive hemagglutionation and skin tests were performed for the diagnosis of swine toxoplasmosis by using artificially infected pigs. The results obtained were summarized as follows: 1. The hemagglutinating antibody and the skin test antibody were demonstrated one and three weeks after infection, respectively. And these antibodies were maintained over nine weeks after infection. 2. The antigenicity of hemagglutinating antigen was stable when it was kept in frozen state, while was unstable in a liquid state. 3. Freeze-dried skin test antigen (toxoplasmin) was stable for two months or more if it was kept at $5^{\circ}C$ and room temperature, but in the liquid or reconstituted state it was unstable. 4. Freeze-dried skin test antigen could be preserved without loss of antigenicity for more than two months. 5. Passive hemagglutination test could be applied effectively at the early phase of the disease process and skin test at later phase, mainly for epidemiological survey. However, by combiniation of these methods, the more accurate results could be obtained.
정상 마우스와 Cyclophosphamide(CY)로 처리된 마우스에 Royal Jell(RJ)를 투여하여 면역계에 미치는 영향을 실험한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 정상 마우스에 RJ를 투여하였을 때는 대조군에 비하여 마우스의 체중, 비장, 흉선 , WBC 수 , DNFB에 대한 접촉성 과민 반응으로 측정된 세포성 면역반응 및 면양 적혈구에 대한 응집가와 용혈가로 측정된 체액성 면역 반응이 투여일에 따라 증가 또는 감소되었고, RBC수와 간 중량은 영향을 받지 않았다. 2. 증가 작용을 보여준 투여일에 RJ를 병용 투여함으로써, CY 처리로 인한 마우스의 생존율, 비장의 중량 , WBC수 및 세포성 면역 반응의 감소가 약간 억제되었으나, CY를 감소된 흉선의 중량 및 체액성 면역반응에는 영향을 나타내지 않았다.
BSA로 면역시킨 드렁허리의 혈청에서 lgM 유사면역글로불린의 정제한 후 그 구조적 특성을 구명하였다. 면역후 항혈청에서는 항원특이 항체능이 증가되었다. 정제된 lgM 유사면역글로불린은 199kD의 분자량을 갖는 단량체 4개가 결합된 800kD의 단백질이었으며, 단량체는 70kD인 H-사슬 2개와 29.5kD인 L-사슬 2개가 결합된 형태였다. 또한 드렁허리의 lgM 유사면역글로불린은 lgM의 특성과 같이 포유류 적혈구에 대하여 약한 응집력을 나타냈다.
인체 면역증강제로 활용 가능성을 조사하기 위해 R. aquatilis AY2000 균이 생산하는 당단백질인 AYS의 면역세포에 대한 독성과 면역증강 효과를 조사하였다. 그 결과 AYS는 적혈구에 대한 용혈작용과 hPBMC에 대한 증식 또는 사멸효과는 나타내지 않았으나, 배양 중인 hPBMC를 응집시키는 효과를 나타내었다. 또한 AYS는 in vitro에서 hPBMC에 작용하여 염증성 cytokine인 IL-6, IFN-${\gamma}$, TNF-${\alpha}$와 IL-5 생성을 유도하였고, 생쥐에서 AYS는 alum에 비해 항-BSA의 생산력을 더욱 증가시켰다.
화경버섯의 자실체로부터 PAGE로 한 렉틴을 정제하고, LJAP(Lampteromyces japonicus antibacterial protein)라 이름 붙였다. LJAP는 17-kDa의 서브유닛트가 모여서 된 백 kDa이 넘는 회합 단백질이였다. 이 단백질은 아미노산 분석결과 세린, 글리신, 산성 아미노산의 함량이 높았다. LJAP는 대장균중 특히 JM 109, K 12, HB 101, JW 380에 대한 항세균작용이 뛰어났다. 한편, 항세균활성은 당단백질인 asialofetuin에 의하여 크게 억제되었다. 본 당단백질은 화경버섯에서 처음으로 얻어진 항세균활성과 적혈구 응집활성을 가진 렉틴이다.
한방에서 지혈 및 어혈 제거용으로 사용되고 있는 눈개승마는, 최근 약용 산채로 그 수요가 급증하고 있다. 본 연구에서는 눈개승마의 항혈전 활성을 평가하고자 눈개승마 지상부로부터 에탄올 추출물 및 이의 순차적 유기용매 분획물을 조제하여 이들의 혈액응고 저해활성 및 혈소판 응집저해 활성을 평가하였다. 그 결과, 눈개승마의 에탄올 추출물(0.5 mg/ml)에서 1.4~2.3배의 우수한 TT, PT, aPTT 연장효과를 확인하였으며, 특히 내인성 혈액응고 인자 저해효과가 우수함을 확인하였다. 분획물에서는 ethylacetate 분획에서 가장 우수한 aPTT 연장효과를, butanol 분획에서는 혈액응고 촉진효과를 확인하였다. 혈소판 응집저해 활성평가의 경우, 눈개승마 에탄올 추출물은 임상에서 사용하는 항혈소판제인 아스피린에 필적하는 효과를 나타내었으며, 특히 butanol 분획은 0.25 mg/ml 농도에서 아스피린 0.5 mg/ml 에 해당하는 강력한 혈소판 응집저해능을 나타내었다. 상기의 에탄올 추출물과 활성 분획물들은 0.5 mg/ml 농도까지 인간 적혈구에 대한 용혈활성을 나타내지 않아, 눈개승마가 천연물 유래의 항혈전제로 개발 가능함을 확인하였으며, 특히 상기 활성분획들이 높은 함량의 total polyphenol, total flavonoid, total sugar를 포함함을 고려할 때, 활성물질의 정제시에는 더욱 강력한 항혈전 활성을 나타내리라 판단된다. 본 연구결과는 눈개승마의 항혈전 활성의 최초 보고이다.
본 연구는 식이지방(우지, 잇꽃유)을 급여한 마우스에게 토마토가 면역활성에 미치는 영향을 평가하기 위하여 수행하였다. AIN-76 diet에 포화지방(beef tallow)과 불포화지방(safflower oil)을 각각 5%씩 중량비로 혼합한 식이를 대조군으로 하였고, 실험군은 토마토(수분함량, 95%)를 고려하여 건물기준으로 0.5%를 첨가한 실험식이를 제조하여 BALB/c 마우스에게 10주 동안 급여하였다. 지연성 과민반응검사는 4, 7, 10주에, 항체생산 세포수측 정은 7, 10주에 실시하였다. 혈액은 심장천자(heart puncture)로 채취하였으며 저장된 혈청은 양적혈구(SRBC)에 대한 적혈구응집소가측정(AGG test)에 이용하였다. 각각의 장기는 적출하여 칭량하였고, DTH test후 적출한 비장을 대상으로 세포조직학적 검사를 실시하였다. 토마토군은 대조군에 비해 4주와 10주의 비장계수(spleen index)와 흉선계수(thymus index)가 통계적으로 높았다(p<0.05). 양적혈구에 대한 지연성 과민반응검사에서 토마토군은 4주, 7주, 10주 모두 24시간의 반응값이 대조군 보다 통계적으로 유의하게 높았다(p<0.05). 토마토군은 3시간은 7주, 24시간은 4주, 48시간은 4주와 10주에서 대조군에 비해 통계적인 유의성이 있었다(p<0.05). 항체생산 세포수는 식이급여 7주에 토마토군이 대조군보다 통계적인 차이가 나타난 반면 10주는 차이가 없었다. 양적혈구에 대한 응집소가는 식이의 급여기간이 길어질수록 감소하였는데, 토마토군이 대조군에 비해서 특히 10주의 응집소가는 유의성이 있었다. 임파구(Iymphocyte)는 토마토군이 대조군보다 다소 증가하였고, 비장조직 검사결과 토마토군은 백색수(white pulp)가 심하게 증식되어 활발한 면역반응을 보였다.
본 실험은 월국환합보중익기탕(越鞠丸合補中益氣湯)의 항스트레스효과를 조사하기 위하여 시행되었다. 월국환합보중익기탕(越鞠丸合補中益氣湯)이 전기자극으로 스트레스 상황을 유발시킨 mouse에게 끼친 B 임파구 면역계 변화를 mouse 혈청의 면양적혈구(綿羊赤血球)에 대한 적혈구 응집소가와 비장세포에서 B 세포 및 T 세포가 차지하는 백분율의 변화를 통하여 측정하였으며 이를 대조군과 비교 분석하였다. 혈청 항체가의 측정에서 스트레스 자극하에서 월국환합보중익기탕(越鞠丸合補中益氣湯)을 투여받은 그룹에서 약제를 투여받지 않은 그룹에 비하여 유의성 있는 차이를 보여(p<0.01) 면역 기능을 정상군의 수준으로 유지하는 결과를 얻었다. T 세포와 B 세포의 백분율의 측정에서도 스트레스 자극하에서 월국환합보중익기탕(越鞠丸合補中益氣湯)을 투여 받은 그룹에서 약제를 투여 받지 않은 그룹에 비하여 유의성 있는 차이를 보여(p<0.01) 면역 기능을 정상군의 수준으로 유지하는 결과를 얻었다. 실험결과들로 보아 월국환합보중익기탕(越鞠丸合補中益氣湯)이 체액성 면역 반응과 비장 내 면역 세포의 백분율을 정상의 수준으로 유지하는 효과를 보여 면역 기능의 이상에 응용할 수 있는 가능성을 제시한다고 사료된다.
수은이 마우스의 세포성 및 체액성 면역반응에 미치는 영향을 밝히고자 실험을 통해 얻은 결과를 다음과 같이 요약하는 바이다. $10^{-2}mM$이상의 농도에서 수은은 시험관내의 마우스 비장세포에 대한 명백한 독성 작용(toxic effect)을 나타냈다. 수은에 의한 마우스 생존을(survival rate)은 0.8mg(per 100g body weight) 이하의 농도에서는 100%생존율을 나타냈으며, 0.9mg 이상의 농도에서는 5일 이내에 100% 치사율을 나타냈다. Subtoxic 농도의 수은 투여에 따른 Arthus 및 DTH반응의 결과는 $Arthus(T_3)$반응에 있어서 수은 투여군과 대조군 사이에 유의한 차이가 나타나지 않았던 반면, $T_{24},\;T_{48}$의 DTH반응은 수은 투여군이 대조군에 비하여 억제되었다. 수은 투여 마우스의 면양적혈구(SRBC)에 대한 항체반응을 측정한 결과 면양적혈구에 대한 총응집소가는 수은 투여 농도에 의존적으로 대조군의 값에 비해 억제되었다. 시험관 내에서 마이토젠에 대한 비장세포의 증식 반응은 수은 농도에 의존적으로 억제되었다. 수은 투여군의 IgE 생산은 농도 증가에 따라 $1.7\sim2.0$배의 수준으로 증가하였으며, $IgG_1$의 경우도 증가의 경향을 보였으나 대조군에 비해 큰 차는 아니었다. 이상의 결과를 살펴볼 때 수은 중독시 출현할 수 있는 면역반응의 변화로서, 초기에는 세포성 면역반응의 감소가 현저할 것으로 사료되나 중독이 진행됨에 따라 Ig농도의 상승을 제외한 체액성 면역반응의 전반적인 감소가 수반될 것으로 예측된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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