• Proceedings of the KSAR Conference
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• 2002.06a
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• pp.57-57
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• 2002

멸종위기에 있는 우리나라 재래돼지의 안전한 보존을 위해서는 수정란 동결보존이 필수적이며 동결에 적합한 수정란 생산이 선행되어야 한다. PMSG/hCG 에 의한 돼지 체내수정란 생산 연구는 주로 대형종을 중심으로 이루어져 왔으며 우리나라 재래돼지와 같은 중소형종에 대한 연구는 미미한 실정이다. 본 연구는 다배란를 유도하기 위해 투여하는 PMSG/hCG 에 대한 우리나라 재래돼지의 난소반응과 외과적 채란에 의한 수정란 회수율을 구명함으로써 재래돼지 체내수정란 생산의 효율성을 높이기 위해 수행되었다. 18일 동안 20㎎/day의 Altrenogest(Regumate/sup R/, Intervert)로 발정주기를 동기화 시킨 미경산 재래돼지 11두를 3군으로 나누어 각각 500, 750, 1,000 IU의 PMSG(Folligon/sup R/, Intervert)를 주사하고 80-84시간 후 500 IU의 hCG(Chorulon/sup R/, Intervert)를 주사하여 다배란을 유도하였다. (중략)

• Proceedings of the KSAR Conference
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• 2003.06a
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• pp.59-59
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• 2003

재래산양은 우리나라 고유의 유전자원으로서 보존뿐만 아니라 개량이 절실히 요구됨에도 불구하고 첨단생명공학기술을 이용한 연구가 극히 미진한 실정이다. 본 연구는 재래산양에 있어서 과배란처리에 의한 미수정 난자의 회수율 개선과 최적의 quality를 확보하기 위하여 과배란 처리 후 회수시간이 난포의 발달과 난자의 회수율에 미치는 영향을 조사하였다. 공시동물은 체중 15kg 전후의 성숙한 미경산 재래산양으로서 발정동기화를 위하여 CIDR(Eazi Breed, InterAg, New Zealand)를 10일간 질내에 삽입하고 과배란 처리는 FSH를 CIDR 삽입 8, 9, 10일째에 12시간 간격으로 70mg을 감량법으로 투여하였으며, PGF2$\alpha$는 8일째에 FSH와 함께 투여하고 CIDR제거는 10일째에 제거와 동시에 hCG 400IU를 투여하였다. 수정란회수는 외과적인 방법으로 실시하였으며, 난관에서 관류방법으로 난자를 회수한 다음 난포에서 흡입방법으로 난포란을 회수하였다. hCG 투여 후 29~34시간과 46~50시간에 관찰된 난포수는 두당 10.29개(144/14) 및 7.83개(47/6)였다. 또한 난포로부터 난포란의 채란율은 각각 66.0%(95/144) 및 53.2%(25/47)였으며, 두당 6.79$\pm$0.9개 및 4.17$\pm$1.1개의 난자를 채란하였다. hCG 투여 후 회수시간에 따른 난관에서 회수한 난자 수는 29~34시간 및 46~50시간 후 채란시 배란점은 평균 4.36개(61/14) 및 7.33개 (44/6)였으며, 난관에서 난자 채란율은 39.3%(24/61) 및 29.5%(13/44)였으며, 재래산양 한마리당 평균 1.71$\pm$0.5개 및 2.17$\pm$1.4개의 난자를 채란하였다. 난관으로부터 회수한 난자의 회수율은 29~34시간째에는 61개의 배란점을 확인하였으나 회수한 난자수는 24개로서 39.3%의 회수율을 보였고 두당 회수율은 1.71$\pm$0.5개였으며, 46~50시간에서는 29.5%의 회수율과 2.17$\pm$1.4개의 두당 회수율을 보였다. 회수한 난포란의 등급에 있어서 29~34시간에 등급별 회수율이 각각 GI(27.4%), GII(14.7%), GIII(43.2%), GIV(14.7%)로 나타났으며, 46~50시간에는 GI(12.0%), GII(12.0%), GIII(28.0%), GIV(48.0%)로 나타났다. 이상의 결과로 볼 때 미성숙 난자의 회수는 hCG 투여 후 29~34시간이 적합한 것으로 생각된다.

• Proceedings of the Korean Society of Embryo Transfer Conference
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• 2002.11a
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• pp.86-86
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• 2002

면양과 염소가 최근 수십년동안 세계여러 나라에서 번식생리의 연구를 위한 모델로 사용되어 왔는데, 체내수정란의 생산에 관한 영역도 유럽을 중심으로 활발하게 연구되어왔다. 수정란생산을 위한 발정동기화방법, 과배란처리 및 수정란회수방법 기술은 현재 상당히 많은 기술진척이 이루어진 상태이나, 우리나라 고유의 재래유전자원인 흑염소에는 이를 위한 기술이 미진한 실정이므로 본 실험에서는 흑염소의 체내수정란생산기술을 확립하여 재래가축 유전자원보존을 위한 기초기술을 마련하고자 한다. 축산기술연구소 남원지소에서 사육하고 있는 체중 20kg 이상의 건강한 흑염소를 이용하여 발정동기화를 위해 controlled intravaginal drug release(CIDR)를 질내에 14일 동안 삽입하고, 과배란처리는 FSH를 CIDR 삽입 12, 13, 14일째에 12시간 간격으로 점감법으로 총20mg을 투여하였으며, PGF$_2$a를 13일째 FSH와 함께 투여하였다. CIDR는 14일째의 아침에 제거하였다. 수컷과의 교미는 CIDR제거 24시간후에 GnRH를 투여와 동시에 실시하였으며, 채란은 교미후 3일째에 외과적인 방법으로 실시하였다. CIDR처리경과에 따른 progesterone농도는 CIDR 주입시 바로 수치가 상승하여 제거전까지 6~12ng/m1의 농도를 유지하였으며, 제거즉시 2ng/ml 이하로 떨어졌다. 채란시 평균 배란점은 16.5개, 미배란난포 9.8개였으며, 회수수정란은 6.0개를 나타내어 채란율은 36.4%를 나타내었다. 회수된 수정란의 발달단계는 4-cell 78.9%, 2-cell 5.3%, fragmentation 15.8%를 나타내었다. 이와 같은 체내수정란생산방법을 기반으로 하여 이후 수정란의 동결 및 수정란이식기법에 관한 연구를 수행한다면 우리나라의 재래가축인 흑염소의 유전자원 장기보존과 생산성향상에 기여할 것으로 사료된다.배양액에 30 embryos/50ul 소적으로하여 38.8$^{\circ}C$, 5% $CO_2$의 탄산가스 배양기에서 각각 7일간 배양을 실시하였다. 조사된 결과는 SAS/STAT를 이용하여 통계분석을 실시하였다. 체외수정 12시간 후에 난자 급속 염색법으로 염색을 실시한 결과, 모든 처리구에서 핵성숙률(76.4~95.2%), 정자침투율(51.1~66.9%), 웅성전핵형성률(95.2~100%), 다정자침입률(18.2~25.6%) 및 평균침입정자수(1.2~l.4개)에서 유의적인 차이가 인정되지 않았다. 체외배양 48시간 난할률을 조사한 결과, 처리구별 차이(53.9~67.9%)는 인정되지 않았으나, 배양 7일째 배반포형성률은 각각 14.5, 25.4, 17.3 및 12.4%로서 25uM의 $\beta$-ME처리구가 유의적(P<0.05)으로 높은 배발달률을 나타내었고, 총세포수에 있어서는 대조구와 처리구간 유의적인 차이가 인정되지 않았다. 따라서 돼지 난포란을 성숙배양할 때, 25uM $\beta$-ME를 첨가배양하는 것이 양질의 돼지체외수정란을 생산하는 하나의 방법으로 조사되었다.다.natural objects and was popular at the time of Yukjo Dynasty, and there are some documents of that period left both in Japan and Korea. "Hyojedo" in Korea is supposed to have been influenced by the letter design. Asite- is also considered to have been "Japanese Letter Jobcheso." Therefore, the purpose of this study is to look into the origin

• Proceedings of the Korean Society of Developmental Biology Conference
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• 2003.10a
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• pp.144-144
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• 2003

본 연구는 수정란이식기술을 이용하여 혈통과 유전능력이 분석된 고능력한우로부터 수정란을 생산하고 이를 번식기반이 미약한 농가의 수란우에 이식함으로서 우수한우 유전자원을 조기확대 보급하여 농가단위의 개량 및 번식우 사육기반을 구축하기 위해 실시하였다. 공란우는 축산기술연구소 남원지소의 축군에서 유전능력이 평가된 우수암소를 선발하였고, 발정주기 9~11일째부터 Folltropin-V(Vetrepharm, Canada) 50mg씩을 4일간 12시간 간격으로 근육주사하고 투여 6회째에 dineprost (LutalyseTM, Upjohn, USA) 20mg을 근육주사하여 과배란을 유기하였다. 인공수정은 dinoprost 주사후 48시간 전후에 발정을 확인하고 12시간 간격으로 2straw씩의 정액으로 3회 실시하였으며, 2차 인공수정 후 100$\mu\textrm{g}$ GnRH를 근육주사하였다. 수정란 채란은 공란우의 발정확인후 7~8일째에 balloon catheter(FHK, Japan)를 이용하여 비외과적방법으로 수정란을 회수하였다. 수란우는 각기 다른 사육조건의 4개 농가(OB, BD, SH 및 SG농장)에서 양호한 번식성적을 가진 개체를 10두씩 선발하여 CIDR plus(EAZI-Breed, New-Zealand)를 질내 7일간 삽입하고, CIDR plus제거 1일전에 dinoprost 20mg을 근육주사하여 발정동기화를 유도하였다. 수란우의 발정상태가 정상이며 발정주기 7~8일째에 직장검사법으로 황체검사를 실시하여 황체가 존재하는 쪽의 자궁각에 수정란 1 개를 이식하였다. 수정란이식 후 13일째에 혈액을 채취하여 임신진단키트(제네디아프로테 트, 녹십자)를 이용하여 임신여부를 1차적으로 확인하였다. 과배란을 유기한 13두의 공란우중 9두(69.2%)가 과배란 반응을 나타내었으며, 회수된 수정란 51개중 이식가능수정란은 38개(74.5%) 였다. 발정동기화를 유도한 수란우 40두중에서 35두(87.5%)가 발정이 동기화되었으며, 그 중 황체검사를 통하여 30두의 수란우에 수정란을 이식하였다. 수정란이식후 13일(발정주기 21일)에 혈액을 이용한 임신진단에서 농가별 수태율은 각각 37.5%, 70.0%, 60.0% 및 71.4% 로서 평균 60.0%를 나타내었다.

• Journal of Embryo Transfer
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• v.19 no.2
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• pp.155-163
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• 2004

The aims of this study are 1) to test oocytes and embryos collected from in-vitro to achieving the valuable protocol by culturing, vitrifying and thawing of oocytes/embryos, and 2) to transfer them to recipient, and finally have resulted in pregnancies from recipient females after surgical or nonsurgical transfer. In vitro maturation and fertilization were performed according to Funahashi et al (1994). Glucose-free NCSU 23 supplemented with 5 mM sodium pyruvate, 0.5 mM sodium lactate and 4 mg/ml bovine serum albumin for 2 days at $39^{\circ}C$, and 10% fetal bovine serum albumin was added to the culture medium thereafter. Embryos were treated with 7.5 ${\mu}g/ml$ cytochalasin-B for 30 min, centrifuged at 13,000 rpm for 13 min and then exposed sequentially to an ethylene glycol(EG) vitrification solution, aspirated into OPS, and plunged/thawed into/from liquid nitrogen. In vivo embryos were surgically collected from three dornors after AI for control group. Forty-nine embryos were washed 3 times in mPBS + 10% FBS, followed treatments : cultured, centrifuged, vitrified, recovered and transferred to recipients as in vitro prepared embryos. Three recipients were transferred individually with 100, 100 frozen embryos derived from abattoir and 34 fresh embryos by surgically, and another three recipients were transferred individually with 150, 150 frozen embryos and 100 fresh embryos by nonsurgically, respectively. all recipient sows exhibited delayed returns to estrus. To our knowledge, theses results suggest that required an improved techniques, more vigorous embryos preparation and substitute to gilt with cleaner uterous condition.

• Journal of Embryo Transfer
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• v.19 no.2
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• pp.113-119
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• 2004

The purpose of the present study was to examine whether collection time affects results of oocyte recovery from superovulated goats. Fiftyty-one mature Korean native goats, maintained in a pen under natural day length and fed hay ad libitum, were pretreated with progestagen impregnated CIDR for 10 days and then the goats were divided into two groups. One group of the goats received a single intramuscular injection of 1,000 IU PMSG on Day 8 of CIDR insertion. The other group of the goats received twice daily intramuscular injections of a total of 70 mg FSH for 3 days from Day 8 of CIDR. All the gonadotropin treated goats were injected with 10 mg $PGF_{2\alpha}$ on Day 8 and 400 IU hCG in the afternoon on Day 10. For oocyte recovery, donor goats were fasted 24 h before operation. Anesthesia was induced by intravenous injection of 2% xylazine(0.2 mg/kg body weight) and ketamin(11 mg/kg body weight). In vivo oocytes were recovered by follicle aspiration or oviduct flushing at 29 to 34, 35 to 40 and 41 to 50 h after hCG injection through mid-ventral incision. There was no significant difference in the mean number of CL and oocytes recovered. Oocyte collection at 29 to 40 h after hCG increased(P<0.05) the recovery rate of ovulated oocytes in oviducts compared to 41 to 50 h. The same results were also observed in the recovery of follicular oocytes. Oocyte grade was not affected by collection time. When oocytes were collected from follicular oocytes at 41 to 50 h after hCG, the recovery rate of Grade II oocytes was the lowest(P<0.05). From these results, it is suggested that oocyte recovery at 35 to 40 h after hCG will be successful for further use.

• Journal of Embryo Transfer
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• v.28 no.1
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• pp.19-24
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• 2013

This study assesses of efficiency of oocyte recovery and in vitro development for during the non breeding season in goat. Thirty-four matured goats, maintained in a pen under natural day length and fed hay ad libitum, were pretreated with progestagen implanted CIDR for 10 days. Superovulation treatment of the goats received twice daily intramuscular injections of a total of 70 mg FSH for 3 days from Day 8 of CIDR. All the gonadotropin treated goats were injected with 10 mg $PGF_2{\alpha}$ on Day 8 and 400~600 IU hCG in the afternoon on Day 10. Oocytes were recovered by follicle aspiration or oviduct flushing at 35 to 40 h after hCG injection through mid-ventral incision. The in vivo matured oocytes were activated by ionomycin (5 min) and 6-DMAP (3.5~4 h). The activated oocytes were cultured in mSOF medium containing 0.8% BSA at $38.5^{\circ}C$ in an atmosphere of 5% $CO_2$, 5% $O_2$, 90% $N_2$ for 7~8 days. There was no significant difference in the mean number of CL and in vivo matured and follicular oocytes recovered. But, quality of I+II grade follicular oocytes was lower (p<0.05) in the prepubertal goat (25.0%) than the adults (52.4%). The same results were also observed in the cleavage and blastocyst rate of activated oocytes. The clavage and blastocyst rate from prepubertal derived oocytes were lower (p<0.05) in the prepubertal goat (54.5%, 23.3%) than the adult goat (86.8%, 46.6%). Considering overall these results, we suggest that maturation of donor goats is a major factor affecting recovered oocytes quality and in vitro development of activated goat oocytes. There was no significant difference in oocyte quality between seasonal treatments.