질환성과 관련된 세균의 분포 및 유전자형을 탐색하고자 구강농양 및 골수염의 급성감염 혼자와 진료실 및 실험실의 정상인을 대상으로 시료를 채취하여 포도상구균을 분리 및 동정을 시행하고, 특성을 규명하였으며, plasmid 및 염색유전자를 분리하여 제한효소를 처리후 전기영동을 실시하고 분리된 plasmid로 탐색자를 제작하여 dot blot을 시행하였다. 대부분의 급성환자에서 분리된 포도상구균을 S. lugdunensis와 S. aureus이었으나, 진료실 및 실험실에서는 coagulase 음성 staphylococci가 분리되었다. 급성환자에서 분리된 포도상구균은 ampicillin과 penicillin에 내성을 보였다. 분리된 S. lugdunensis균주중 네 균주는 ${\delta}$형의 용혈소를 생산하였다. Plasmid를 분리한 결과 S. lugdunensis균주중 세 균주는 약 6.5 kilobases이었으나 S. aureus는 약 4.3 kilobases 정도 크기의 band를 보였다. S. lugdunensis에서 분리된 plasmid로 제작한 탐색자로 dot blot를 시행한 결과 치과 영역에서 분리한 plasmid를 갖는 균주는 양성반응을 보였다. 염색체유전자의 유전자형을 분석한 결과 ${\delta}$형의 용혈소를 생산한 네 균주의 S. lugdunensis는 유사한 유전자형을 보였다. 이러한 연구결과 질환의 진행에 S. lugdunensis가 중요한 역할을 하는 것으로 생각되고, 치과영역에 존재하는 plasmid는 공통적인 유전자 서열을 갖는 것으로 추정된다.
Petunia hybrida와 Nicotiana sanderae의 원형질체를 융합하여 체세포잡종식물을 얻고자 융합산물의 배양에 의해 얻은 개체들에 대해 유전분석을 하였다. 재분화 개체중 융합된 것으로 인정되는 개체의 peroxidase pattern은 두 모본의 band를 모두 가진 개체(A-D patterns)에서 나타난 band중 p. hybrida에서 나타난 band 이외에 최상부에 1개의 band가 추가되었는데 이는 융합을 판별할 수 이는 중요한 marker 로서 가능성이 있으며, aspartate aminotransferase isoenzyme pattern은 두 모본의 양상이 모두 나타나거나 N. sanderae의 상부 band가 소실된 개체도 있었다. 염색체 검경에서 P.hybrida는 2n=14, M sanderae는 2n=18개로 나타났으며, 동위효소검정에서 체세포 잡종일 것으로 추정되는 개체들은 2n=32-36으로 나타났다. 표현형 관찰에서 체세포잡종으로 인정되는 개체의 형태적 특징은 두 모본의 중간형태를 나타내었다.
국내 재배종 토마토 서광 품종으로부터 분리한 Polygalacturonase 유전자(PG2)의 3'측 1.1 kb cDNA 단편을 식물 형질전환용 운반체에 antisense 방향으로 삽입한 후 자엽을 이용하여 토마토내 도입하여 형질전환 토마토를 획득하였다. 형질전환 토마토(T$^{0}$ )를 도입시켜 그 종자를 1 mg/mL 농도의 kanamycin 함유 MS 배지에서 발아시켜 분리 집단 중에서 T$_1$9 식물체를 얻었다. T$_1$9의 Genomic Southern blot 분석 결과, antisense PG 유전자 1개가 염색체 내로 삽입되었음을 확인하였고 RNA gel blot 분석으로 endogenous PG mRNA보다 antisense PG RNA가 강하게 발현됨을 확인하였다. T$_1$9 계통 10개체의 성숙 토마토 과피조직내의 PG 효소 활성도 4~60%까지 저해되었다.
고온, 호알칼리성 Bacillus K-17 균주에서 한가지 xylanase 유전자를 pBR322를 벡터로 이용하여 클로닝시켰다. Xylan을 함유하는 LB 한천배지에서 분해환을 형성하는 대장균 형질전환주에서 재조합 플라스미드 pAXl13을 분리하였으며, 본 pAXl13 은 pBR322와 고온, 호알칼리성 Bacillus K-17균주 염색체 DNA의 4.3Kb HindIII 절편으로 구성되어 있었다. Biotin으로 표식된 pAXl13을 probe로 하여 상동성시험을 하여 본 결과, pAXl13에 존재하는 4.3Kb Hind III 절편은 고온, 호알칼리성 Bacillus K-17 균주 유래임을 확인하였다. pAXl13 을 가지는 E. coli 균주가 생성하는 xylanase는 균체외에 존재하였으며 그 효소학적 성질은 고온, 호알칼리성 Bacillus K-17 균주의 xylanase I 과 II중에서 xylanase I과 동일하였다.
장티푸스는 Salmonella typhi에 의해 유발되는 장감염성 질환으로 사람과 동물에 공통되는 질병이다. 본 연구에서는 국립보건원과 공동연구를 수행하여 한국형 장티푸스 유발균인 S. typhi KNIH100을 분리하였다. 분리된 S. typhi KNIH100의 염색체 DNA로부터 방향족 아미노산의 생합성에 관여하는 효소인 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthetase를 암호화하는 aroA 유전자를 포함하는 약 5.0 kb의 SalI절편을 pBluescriptII SK(+) vector와 aroA 돌연변이주인 E. coli CGSC2829를 이용하여 클로닝하였다. 그리고 이 클론을 pSAL80이라 명명하였다. 클로닝된 재조합 plasmid인 pSAL80에는 ATG 개시코돈과 TGA 종결코돈을 포함하는 1,284 염기로 구성된 aroA 유전자가 위치하고 있었으며, 다른 장내세균과 마찬가지로 serC와 하나의 오페론을 구성하고 있음을 밝혔다. 또한 S. typhi Ty2, S. typhimurium, 그리고 E. coli 등 다른 장내세균의 aroA 유전자와 상동성을 비교하여 본 결과 각각 99%, 95%, 77%의 상동성을 나타내었다.
원형질체내에 외래유전물질 도입에 의한 균주 개발의 가능성 검토의 일환으로 사철느타리의 원형질체로부터 핵을 분리하여 느타리의 원형질체내로 전이하여 얻은 결과는 다음과 같았다. 1. 핵전이주는 크게 3가지 type으로 구분되었는데 type 1은 아주 빠른 균사생장과 clamp connection를 형성하지 않으며 CM+benomyl에서 균총분리가 나타남으로서 이질이배체로 사료되었다. type 2는 주된 핵전이주로서 모균주와 비슷하거나 다소 빠른 균사생장과 clamp connection을 지녀 자실체를 형성하였으며 heterokaryon으로서 원형질체 융합주와 유사하였다. 그러고 type 3은 핵 또는 염색체 단편의 전이로 clamp connection를 지니지 않고 아주 느리거나 MM에서 생육이 거의 불가능한 균주였다. 2. 핵전이주 및 모균주를 전기영동법으로 esterase 동위효소 pattern을 조사한 결과 핵전이주는 모균주와 구별되었는데 type 1인 이질이배체는 새로운 band를 나타내었으며, type 2와 type 3은 모균주들을 합한 것으로 보였다.
Neisseria lactamica 2118 의 $\beta$-galactosidase 유전자를 Southern Hybridization 과 colony hybridization을 통하여 Escherichia coli MC 1061에 클로닝 시켰다. $\beta$-Galactosidase 유전자를 함유하는 6.5 Kb EcoR I 단편과 7.2 Kb BamH I 단편들을 pMC 1871의 lac Z 유전자를 probe로 한 Southern hybridization으로 얻고 이들을 pBR 322에 삽입한후 Escherichia coli MC 1061에 형질전환 시키고 이들 형질전환체들을 동일 probe로 colony hybridization 시켜 최종적으로 3주의 $\beta$-galactosidase positive clone들을 얻었다. 이들의 재조합 plasmid에는 Neisseria lactomica 2118 염색체 DNA의 약 7.2Kb BamH I 단편이 삽입되어 있음을 확인 하였고 probe와 상동성이 가장 강한것으로 추정되는 pNL 24에 대한 제한효소지도를 작성 하였다.
식물의 루이신 생합성에 관여하는 3-isopropylmalate isomerase (IPMI) (EC 4.2.1.33) 효소의 소단편을 암호화는 Leucine D유전자를 벼로부터 분리하고 OsLeuD유전자로 명명하였다. OsLeuD유전자는 257개의 아미노산을 암호화하고 있으며 cyanobacteria의 IPMI 단백질과는 약58% 그리고 green sulfur bacteria들의 IPMI 단백질과는 약48%의 상동성을 갖고 있었다. 벼의 OsLeuD 유전자는 japonica벼 (Oryza sativa L.)의 2번 염색체의 26.45 Mb의 위치로서 109.3 cM 거리에 좌위하고 있었다. OsLeuD유전자는 잎과 성숙하는 종자에 많이 발현이 되었으므로 대사가 급증하는 발생단계 에 발현이 조절되는 것으로 여겨진다. OsLeuD유전자와 단백질은 균류와 yeast 보다 광합성 박테리아의 유전자와 높은 동질성을 보이는 것으로 보아 OsLeuD유전자는 식물의 엽록체 유전자 genome 에서 기원하여 핵 genome으로 이동 진화된 유전자로 추측된다.
Flavisolibacter tropicus $LCS9^T$은 한국 중서부에 위치한 서천 국립생태원 에코리움 내 열대관 토양에서 분리되었다. 이 연구에서 G + C 함량이 41.5%인 5,940,863 bp 의 원형 염색체로 구성된 Flavisolibacter tropicus $LCS9^T$ 의 완전한 게놈서열을 분석하였다. 이 완전한 게놈서열은 5,075 개의 유전자, 337개의 위유전자 그리고 59 개의 rRNA 유전자를 포함하고 있다. 유전체 특징은 감마선 및 UVC 에 대응하는 주요 효소를 포함하였다.
Paenibacillaceae계의 Cohnella 속은 다양한 환경 속에서 서식한다. 여기에 우리는 한국 한라산 꼭대기의 구상나무(Abies koreana) 근권 토양으로부터 분리된 Cohnella sp. HS21의 전체 게놈 서열을 보고한다. 균주 HS21은 원형 염색체 7,059,027 bp와 44.8%의 GC 함량을 가지고 있다. 5,939개의 단백질 코딩 유전자와 78개의 트랜스퍼 (tRNA) 유전자, 27개의 리보솜 RNA (rRNA) 유전자, 4개의 비 코딩 RNA 유전자(ncRNA), 90개의 위 유전자가 존재했다. 박테리아는 항생제 관련 유전자 클러스터와 식물 세포벽 분해 효소를 코딩하는 유전자를 포함하고 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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