• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
• /
• 제30권3호
• /
• pp.233-240
• /
• 2003

연구목적: 본 연구에서는 정상 환자와 습관성 유산 질환 환자에서 유래된 융모막 조직 내에서의 면역억제유전자들의 발현 양상에 대해 알아보고자 하였다. 연구재료 및 방법: 임신 6주와 8주의 습관성 유산 질환 환자와 정상 환자로부터 융모막 조직을 채취하였다 (Normal N=6; RSA N=6). 면역조직화학적 분석을 통해서 조직을 관찰하고 세포가 살아있음을 확인한 후에, 역전사 중합효소연쇄반응을 통해서 면역억제유전자인 placenta protein 14 (PP14), indoleamine 2, 3-dioxygenase (IDO) 그리고 mucin1 (MUC1) 유전자의 발현 정도를 비교하였다. GAPDH 발현에 기준한 면역억제유전자 발현을 정량 분석하여 Student's t-test를 시행하였고, p<0.05를 유의성이 있는 것으로 판정하였다. 결 과: 습관성 유산 질환 환자의 경우, 임신 6주와 8주의 융모막 조직에서의 면역억제유전자 (PP14, IDO, MUC1) 발현이 현저하게 낮은 양상을 보이고 있었다. 습관성 유산과 면역억제유전자의 발현이 통계학적으로 유의성 있는 연관성을 가지고 있다는 것이 확인되었다. 결 론: 면역억제유전자 (PP14, IDO, MUC1)의 발현이 습관성 유산 질환 환자에서 특이적으로 낮게 나타나는 것으로 보아 습관성 유산 질환의 진단과 치료 연구 방안에 이 유전자들의 발현이 이용될 수 있을 것으로 사료된다.

• 대한의생명과학회지
• /
• 제4권2호
• /
• pp.137-142
• /
• 1998

쥐 뇌에서 발현되는 S-100 beta 유전자의 다형현상을 조사하였다. Polymerase chain reaction을 위한 주형으로는 뇌에서 분리한 mRNA를 직접 역전사한 cDNA, 또는 rat brain cDNA library에서 분리한 phage DNA를 사용하였다. 증폭된 DNA 절편들은 크기가 기존에 보고되었던 것과 일치하였으나 DNA sequencing을 통한 세부적인 분석 결과 coding region 내에 염기변화 (CAT가 CAC로 변함)가 있음이 확인되었다. 그러나 이들은 모두 histidine을 결정하는 유전암호이기에 단백질의 1차구조에는 아무런 영향을 미치지 않는 다형현상으로 결론지어졌다. 본 연구는 S-100 beta 단백질에 그동안 알려지지 않았던 다형현상이 존재함을 시사하는 것으로서 S-100beta 효소 유전자의 전체적인 구조를 이해하기 위한 학문적 자료가 될 것으로 기대된다.

• 식물병연구
• /
• 제8권4호
• /
• pp.207-214
• /
• 2002

대구시와 경상북도 지역에서 Tobacco rattle virus(TRV) 감염에 의한 증상으로 보이는 글라디올러스(Gladiolus hybridus), 크로커스(Crocus spp.), 수선화(Narcissus spp.)를 채집하였다. 톱니무늬(notch), 줄무늬(stripe), 변형 (malformation)등의 증상의 잎 조직을 시료로 하여 direct negative staining method(DN) 및 immunosorbent electron microscopy(ISEM)법에 의해 투과전자현미경으로 바이러스 입자를 관찰한 결과, 각각의 시료에서 긴 입자는 170~200 X 22nm, 짧은 입자는 40~114$\times$22nm 크기의 막대모양 입자가 다수 확인되었다. 글라디올러스에서 분리한 tobacco rattle virus(TRV-K)를 담배(Nicotiana tabacum)에 즙액 접종, 증식시킨 후, 정제하여 항혈청을 제작하였다. TRV-K 의 coat protein(CP)유전자를 특이적인 올리고뉴클레오타 이드 프라이머를 이용하여 역전사-중합효소연쇄반응(RT-PCR)으로 증폭시킨 후에 염기서열분석법으로 확인하였다. 그 결과 TRV-ORY의 CP와 99.5%의 상동성을 나타냈다.

• 한국가축번식학회지
• /
• 제18권3호
• /
• pp.199-206
• /
• 1994

본 연구는 생쥐 배 발생과정의 상이한 발현을 RT-PCR법에 의해 무작위 증폭함으로서 새로운 유전자를 손쉽게 크로닝하기 위해 수행되었다. mRNA의 상이한 display법은 Ling 과 Pardee (Science 257, 1992)에 의해 개발되었으며, 최근 Zimermann과 Schultz (PNAS USA 91, 1994)에 의해 재증명되었다. 이 방법은 특정 유전자의 일시적 발현의 변화가 maternal 제어로부터 접합체 제어로의 이행에 따른 발현전이, 다정자 침입과 단일 정자 침입에 의한 배발생의 기능적 차이, 성공적으로 부화한 배반포기 배와 부화에 실패한 배반포기 배에서의 발현의 차이는 물론 세포주기에 따른 유전자 발현 양식의 변화에 따른 새로운 유전자의 크로닝을 가능케 한다. 이 방법에 의해, 2세포기 특이 발현 유전자를 크로닝 하였으며, 이 유전자는 EcoRI제한 효소 처리후 Southern blot을 행한 결과 약 15kb genomic size를 가진 것으로 나타났다. 이 새로운 유전자는 간장 특이적 발현을 나타내었다. 또한, 적어도 2개의 mRNA가 존재하였으며, 이는 RNA splicing에 의한 것으로 추정되었다. (PCR, RT-PCR, cloning, preimplantation, mouse)

• 한국양식학회지
• /
• 제10권2호
• /
• pp.171-178
• /
• 1997

Infectious pancreatic necrosis virus (IPNV)는 치어에 감염되어 치명적인 질병을 유발하는, 양식산업에 있어 중요한 어류 병원체이다. 본 연구에서는 IPNV를 신속, 정확하게 진단하는 방법을 개발하고자 IPNV의 항원성 단백질인 VP2 유전자 부분에서 선택한 primers를 이용하여 역전사-중합효소연쇄반응법(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)을 실시하였다. RT-PCR 증폭법으로 순수분리도니 IPNV dsRNA 40 ng 정도의 적은 양도 확인 할 수 있었으며, IHNV와 같은 다른 어류 병원체의 게놈을 RT-PCR templates로 사용하였을 경우는 어떠한 PCR 산물도 검출되지 않는 특이성을 보였다. 특히 유전자의 분리없이 조직 그 자체를 대상으로 RT-PCR을 행하는 in situ RT-PCR 방법으로 IPNV가 감염된 넙치 (Paralichthy olivaceus) 치어의 조직에서 IPNV 감염을 신속하게 확인할 수 있었다. 따라서 RT-PCR 및 in situ RT-PCR 방법은 IPNV를 신속, 정확하게 진단하는데 활용될 수 있을 것으로 생각된다.

• 한국임상수의학회지
• /
• 제26권6호
• /
• pp.582-585
• /
• 2009

소 바이러스성 설사병 바이러스는 전세계 축산업에서 경제적 파급력이 큰 질병이다. 콧물을 이용한 역전사 중합효소연쇄반응을 이용하여 한우송아지에서 소 바이러스성 설사병 바이러스의 발생이 진단 되었다. 가검물을 채취한 21 마리 소 가운데 12마리가 소 바이러스성 설사병 바이러스에 양성반응을 보여 지속감염우로 분류되었다. 이 동물들은 설사와 폐렴 같은 증상을 나타내었다. 지속감염우는 일발적으로 지속감염 송아지에서 발견된다. 5'-UTR을 이용한 염기서열 및 계통발생 분석에서 본 증례는 BDVD-2a에 속했다. 이들 결과는 콧물을 이용하여 지속감염우를 진단할 수 있다는 것과, 한우 송아지에서 BVDV 근절 대책이 필요하다는 것을 말해 주고 있다.

• 대한소아치과학회지
• /
• 제33권1호
• /
• pp.77-84
• /
• 2006

자일리톨에 장기간 노출된 mutans streptococci는 자일리톨에 내성이 발현되어 자일리톨 내성균주가 생성된다고 알려져 있다. 본 연구의 목적은 mutans streptococci에서 자일리톨 내성균주와 감성균주의 gtf유전자 발현량을 각각의 유전자별로 정량적으로 분석하고 비교하는 것이다. 실시간 역전사 중합효소연쇄반응법을 이용하여 각각의 gtf발현을 조사한 결과 gtfD는 증가한 반면, gtfB와 gtfC는 감소하였는데 이는 각 유전자의 독립된 조절기전이 존재함을 보여주는 것이다. 또한 자일리톨에 노출된 mutans streptococci에서의 glucosyltransferase와 연관된 유전자변형이 자일리톨의 치아우식증 예방효과의 작용기전 중 하나임을 알 수 있었다.

• 한국정보통신학회논문지
• /
• 제18권2호
• /
• pp.482-487
• /
• 2014

본 연구는 testosterone이 지방세포생성에 미치는 영향과 그것에 대한 분자생물학적 조절기전을 역전사-중합효소 연쇄반응과 일시적인 형질전환 분석을 통해 조사하였다. 정소절제수술 마우스(CAST)에 비해 testosterone이 처리된 정소절제수술 마우스(CAST+T)는 백색지방조직 무게와 지방세포 특이유전자($PPAR{\gamma}$와 aP2)의 발현이 감소되었다. In vivo 결과와 일치되게, testosterone 처리는 분화된 3T3-L1세포에서의 triglyceride축적과 지방세포 특이유전자($PPAR{\gamma}$와 aP2)의 발현을 억제시켰다. Testosterone에 의해 활성화된 androgen receptor(AR)는 $PPAR{\gamma}$ transfection에 의해 유도된 luciferase reporter gene 활성을 억제하였다. 따라서 본 연구결과는 testosterone이 AR을 통해 지방세포분화에 대한 $PPAR{\gamma}$의 작용을 억제 조절한다는 것을 시사하고 있다.

• 구강회복응용과학지
• /
• 제37권1호
• /
• pp.23-30
• /
• 2021

목적: 본연구의 목적은 다양한 산용액을 이용하여 지르코니아의 표면을 처리하여 표면의 양상과 골유착에 미치는 영향을 알아보는 것이다. 연구 재료 및 방법: 준비된 지르코니아 디스크에 다양한 산용액 및 광촉매 산부식을 이용하여 표면을 처리하였다. 각 시편을 SEM으로 관찰하고, 골유착을 관찰하기 위해 MC3T3E-1 세포를 이용하여 형광염색과 역전사 중합효소 연쇄반응을 통해 평가하였다. 결과: 처리한 방법에 따라 다양한 거칠기를 보였다. 불산처리군은 표면의 거칠기가 증가하였으나 약한 네트워크 구조를 가지고 있었다. 골유착능에서는 광촉매 산부식을 시행한 군에서 더 좋은 결과를 보였다(P < 0.05). 결론: 지르코니아를 광촉매 산부식방법으로 처리할 경우 다른 산처리방법에 비해 골유착능을 높이는데 효과적일 것으로 사료된다.

• 대한핵의학회지
• /
• 제38권1호
• /
• pp.99-108
• /
• 2004

목적: 생체 내로 이식한 신경 줄기 세포의 이동과 증식을 비침습적으로 추적하는 것은 기초와 임상에서 중요한 것으로 알려져 있다. 신경줄기 세포주(F3)를 생체내로 이식 후, 비침습적으로 추적하기 위해 사람의 hNIS 유전자를 F3 세포에 안정적으로 형질 도입하여 세포 배양 시간 및 조건에 따른 F3-NIS 세포 내에서 hNIS 유전자의 발현 변화를 알아보았다. 방법: HB1.F3는 태아 종뇌에서 신경 줄기 세포를 분리한 후 v-myc유전자로 불멸화한 신경줄기 세포주이다. CMV 프로모터 조절 받도록 hNIS와 하이그로마이신 저항 유전자를 IRES(internal ribosomal entry site)를 이용하여 재조합하였다(pIRES-NIS/Hyg). pIRES-NIS/Hyg를 리포좀을 이용하여 HB1.F3 세포를 형질전환 하였다. 탈메틸화시약(5-Azacytidine)와 히스톤탈아실화효소저해제(trichostatin; TSA)을 세포주에 24시간 처리한 후, hNIS 발현을 I-125 섭취율과 역전사효소 중합효소연쇄반응(RT-PCR)으고 측정하였다. 결과: pIRES-NIS/Hyg 재조합 유전자를 HB1.F3에 형질도입 후, 2주 동안 하이그로마이신 B를 처리해 hNIS 유전자를 안정적으로 발현하는 HB1.F3 세포를 얻었다(F3-NIS III). I-125 섭취율은 HB1.F3에 비해 F3-NIS가 12.9배 높았으며, $KClO_4$를 처리 했을 때 F3-NIS의 I-125 섭취가 완전히 저해되었다. F3-NIS를 계대 배양하면 hNIS 유전자의 발현이 1.9배 까지 서서히 감소하였다. 5-Azacytidine과 TSA를 F3-NIS에 24시간 처리한 결과, I-125 섭취율이 5-Azacytidine과 TSA 농도에 따라 증가되었다. 또한 같은 방법으로 F3-NIS 세포에 5-Azacytidine과 TSA를 처리한 후 hNIS 프라이머로 RT-PCR을 수행한 결과 hNIS mRNA가 농도에 따라 증가 되었다. 결론: hNIS 유전자 이입된 F3 세포는 계대 배양하는 동안 생물학적인 특성이 변화되는 것으로 관찰되었으며, 이는 줄기 세포에 이입된 외래 유전자의 발현이 DNA 탈메틸화나 히스혼아세틸화를 통한 에피지네틱 조율 때문이라고 생각한다.