본 연구에서는 곰팡이 독소에 대한 노출을 확인하기 위한 목적으로 닭의 간, 신장 조직에서 곰팡이 독소 분석법을 확립하였다. 곰팡이 독소의 경우 닭에서 독성이 강하며, 본 실험에서는 가축의 사료에서 주로 확인되는 곰팡이 독소 6종(아플라톡신 $B_1{\cdot}M_1$, 오크라톡신 A, 푸모니신 $B_1$, 데옥시니발레놀, 제랄레논)을 선별하여 추출, 정제조건을 확립하고 LC-MS/MS를 이용하여 분석하였다. 확립된 분석조건에서 검량선은 $R^2$값이 0.99 이상으로 우수한 직선성을 나타내었다. QUECHERS법을 응용하여 닭 간, 신장 시료에서 곰팡이 독소를 추출, 정제하여 분석하였을 때 곰팡이 독소 4종(아플라톡신 $B_1$, 오크라톡신 A, 데옥시니발레놀, 제랄레논)의 평균 회수율은 80.94~98.10%이고, 상대표준편차도 14% 미만으로 조사되어 높은 정확도와 정밀도를 확인할 수 있었다. 검량선에 근거하였을 때 곰팡이 독소 6종에 대하여 닭 간 시료의 경우 검출한계는 $7.6{\sim}145.79{\mu}g/kg$, 정량한계는 $23.04{\sim}441.78{\mu}g/kg$이었다. 닭 신장의 경우 검출한계는 $6.07{\sim}197.20{\mu}g/kg$, 정량한계는 $18.40{\sim}597.59{\mu}g/kg$으로 나타났다. 본 연구의 결과 LC-MS/MS를 이용하여 닭의 간, 신장에서 곰팡이 독소 6종 동시 분석법을 확립하였으며, 이는 생체시료에서 효율적인 곰팡이 독소 동시 분석법으로 활용이 가능할 것으로 기대된다.
발암물질의 조기검색법 개발 및 chemoprevention연구의 일환으로 발암물질과 DNA 및 단백질의 공유결합체인 발암물질-DNA 및 -단백질 adduct를 연구하였다. 발암물질(예, 밴조피렌)-단백질 adduct에 관한 연구에서는 시료(단백질)에 soluble protease를 이용하는 간편하고 손쉬운 ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)분석법을 확립했다. 발암물질(예,벤조피렌,아플라톡신 B1) -DNA 및 -단백질 adduct를 이용한 발암성 조기검색법의 개발을 Ames test 및 염색체이상시험과 비교 연구한 결과 본 연구에서 새로이 개발한 DNA 및 Protein-adduct형성 시험법은 저농도에서 고농도에 이르기까지 뚜렷한 용량-반응 관계를 나타냈으며 Ames test 및 Chromosomal test에서 일어날 수 있는 false positive나 false negative의 결과를 나타낼 우려가 없었다. 벤조피렌-DNA adduct를 이용한 chemoprevention 연구에서는 항산화제로 알려진 비타민 E,C 및 $\beta$-carotene을 시험한 결과 용량의존적으로 벤조피렌-DNA adduct 형성을 억제하였다.
돼지고기 중 5종의 곰팡이독소(아플라톡신 $B_1$, $B_2$, $G_1$, $G_2$ 및 오크라톡신 A)를 분석하기 위해 0.1% 개미산을 함유한 50% 아세토니트릴용액으로 추출한 후 고체상추출칼럼을 이용하여 정제하고, LC-MS/MS로 동시 정량할 수 있는 시험법을 마련하였다. 분석조건으로 측정한 5종의 곰팡이독소 matrix-matched 표준곡선식에서 모두 상관계수 0.998이상의 상관관계를 나타내었다. 5종의 곰팡이독소 2배의 정량한계에서 10배의 정량한계로 첨가한 시료에서 평균 회수율은 72.1~109.9%로 실험 결과들이 EU 가이드라인에서 제시하는 유효성 확인을 위한 기준을 만족함으로써 시험법의 신뢰성을 확보할 수 있었다. 충청지역 유통되고 있은 돼지고기 20건에 대한 총아플라톡신 및 오크라톡신A에 대한 오염도 조사결과 정량한계 미만으로 조사되었다.
식품 중 아플라톡신 ($B_1+B_2+G_1+G_2$)의 기준은 곡류, 두류, 땅콩, 견과류 및 그 단순가공품 (분쇄, 절단 등), 곡류 가공품 및 두류가공품, 과자류 (땅콩 또는 견과류 함유식품), 장류, 고춧가루, 팝콘용 옥수수가공품, 기타 식품류 (찐쌀)에 대하여 15 ($B_1$은 10)${\mu}g/kg$ 이하로, 원유 및 우유류 중 아플라톡신의 기준은 $M_1$으로서 0.5 ${\mu}g/kg$ 이하로 설정되었다. 사과주스, 사과주스 농축액 중 파튤린의 기준은 50 ${\mu}g/kg$ 이하로 설정되어 있으며, 오크라톡신 A의 기준은 밀, 호밀, 보리, 커피콩, 북은 커피에 5 ${\mu}g/kg$, 인스턴트커피, 건포도 중 10 ${\mu}g/kg$, 포도주스, 포도주스 농축액, 포도주 중 2 ${\mu}g/kg$ 이하로 설정되었고, 푸모니신($B_1+B_2$)은 옥수수 중 4 mg/kg, 옥수수 단순가공품 및 옥수수 가루 중 2 mg/kg, 옥수수 가공품 중 1 mg/kg 이하로 설정되었다. 현재 식품 중 곰팡이독소에 대한 안전관리는 노출량 조사와 위해평가를 통해 합리적이고 과학적으로 설정되어 관리하고 있다.
Our paper shows the results of 302 samples of herb medicines about fungal contamination at Yakyeang markets in Seoul. The sample medicines were treated VICAM pretreatment and analysed by post column derivatisation procedure(PHRED-HPLC) with a fluorescence detector. Aflatoxin B1 was founded from 50.3% of samples, aflatoxin B2 was 39.7%, aflatoxin G1 was 21.2% and aflatoxin G2 was 23.5%. The detected ranges of aflatoxin B1, B2, G1 and G2 were from 0.1 to $57.2\;{\mu}g/kg$, 0.1 to $42.6\;{\mu}g/kg$, 0.1 to $23.5\;{\mu}g/kg$ and 0.1 to $9.5\;{\mu}g/kg$ respectively. Among total samples, 26 samples contained aflatoxin B1 violated the regulation (less than 10 ug/kg) for aflatoxin B1 of KFDA. From the result, we could presumed that more than a half of samples were contaminated by aflatoxins. Therefore, it seems to be necessary that the new safety giudeline will be established aflatoxin B2, G1 and G2 from herb medicines as aflatoxin B1.
Aflatoxin $B_1$, a known human carcinogen, is the member of aflatoxin subfamily that is most frequently found in contaminated foods. Epidemiological studies have suggested that aflatoxins may be associated with human liver cancer and acute hepatitis. Recently it was reported that the traditional medical herbs sold in domestic markets are contaminated with aflatoxins. Long-term administration of these contaminated medicines could result in adverse health effects. Therefore, it is important to evaluate the levels of exposure to aflatoxin in people who ingest traditional herbal medicines. Blood samples were collected, before and after the herbal medicine intake, from 151 subjects who visited the hospital. The metabolite of aflatoxin $B_1$ in blood, aflatoxin $B_1$-albumin (aflatoxin $B_1$-lysine), is reportedly an appropriate internal exposure indicator, and its levels in the collected bloods were therefore analyzed using a liquid chromatography-mass spectrometry. The analytical method of aflatoxin $B_1$-lysine in blood was firstly optimized in Korea and the levels were detected below quantification limits (2 pg/mg albumin) in this study population. Consequently, the exposure levels of aflatoxin $B_1$ by ingestion of herbal medicines were low but it is important to monitor routinely due to the possibility of risk on the aflatoxin exposure.
2017년 10월부터 2018년 9월까지 광주광역시 시내 슈퍼, 대형마트 및 재래시장에서 구입한 율무, 수수, 기장, 조, 백미, 보리 등 곡류 75건과 볶은 율무, 보리, 옥수수 등 곡류가공품 52건 총 127건을 대상으로 곰팡이독소 함량검사를 실시하였다. 검사한 곰팡이독소는 아플라톡신($B_1$, $B_2$, $G_1$, $G_2$,), 푸모니신($B_1,\;B_2$), 오크라톡신 A, 제랄레논이었다. 127건의 시료 중 38건에서 곰팡이독소가 검출되어 29.9%의 검출률을 나타내었다. 127건의 시료 중 35건에서 푸모니신($B_1+B_2$)은 $4.8{\sim}738.5{\mu}g/kg$, 제랄레논은 20건에서 $8.4{\sim}507.6{\mu}g/kg$ 범위에서 검출되었다. 검사한 곡류와 곡류 가공품 중에서 가장 오염도가 높은 곰팡이독소는 푸모니신과 제랄레논이었고 이들 곰팡이가 중복 검출된 검체는 17건으로 독소가 검출된 38건 중에서 44.7%를 차지하였다. 곰팡이독소 일일추정섭취량(EDI)과 잠정최대일일섭취허용량(PMTDI)으로부터 위해도를 산출하였다. 위해도는 0.0019~1.9526%로 나타나 이번에 조사한 곡류와 곡류가공품은 곰팡이독소 측면에서는 안전한 수준으로 판단되었다.
Aflatoxin $B_1(AFB_1)$ is a potent hepatotoxic and hepatocarcinogenic mycotoxin in human beings. It is accumulated in animal tissues and injured cell through variable metabolic pathway. This study was conducted to determine the effect of antioxidant vitamins on liver function enzymes and hepatic damage of $AFB_1$ treated mice. The 6 weeks old male ICR mice were randomly separated 6 groups, vehicle solvent or vitamin C(10 mg/kg/day) and vitamin E(63.8 mg/kg/day) were administered by intraperitoneal(i.p.) injection and 1 hr later, vehicle solution(DMSO) or $AFB_1$(0.4 mg/kg) were injected. The results obtained as follow ; The levels of liver function enzymes such as GOT, GPT, LDH, and alkaline phosphatase, in sera of mice were remarkably elevated by treatment with $AFB_1$ only. However, those enzymes were significantly alleviated by co-treatment with antioxidant vitamins(p<0.01). Especially the levels of LDH and ALK phosphatase were similar to those of control groups(p<0.01). The transmission electron microscopy(TEM) image of intracellular microrganelles on the liver cell of mice was also degenerated extremely by treatment with $AFB_1$, but vitamin C and vitamin E gave good effects on cellular deformation. The intracellular microrganelles such as mitochondria, endoplasmic reticulum, nucleus and nucleic membrane were nearly disappeared the cellular deformation by antioxidant vitamins co-administration. With above results, we could estimated that antioxidant vitamins blocked AFB1 induced hepatic cell damage.
마늘의 돌연변이유발 억제효과와 사람의 HT-29 결장암 세포의 성장저해 효과에 대하여 검토하였다. 마늘의 메탄올 추출물은 김치 제조시 사용되는 첨가농도 2%에서 아플라톡신 $B_1(AFB_1)$과 MNNG에 대해 항돌연변이적 효과를 나타내었다. 이 메탄올 추출물의 농도를 증가시켰을 때 Salmonella typhimurium TA98과 TA100에서 모두 $AFB_1$에 대하여 돌연변이유발 억제효과가 증가되었다. 이를 다시 분획하였을 때 비극성 분획인 클로르포름 분획에서 더 큰 돌연변이유발 억제효과를 관찰할 수 있었다. 또한 마늘의 클로르포름 분획은 사람의 HT-29 결장암 세포의 성장을 FBS 농도 1%와 5%에서 각각 저해하였다.
The aim of this study was to determine the incidence and contamination levels of aflatoxin in Medicinal Herbs for Food and Medicine at Yakyeang market in seoul. 191 Samples 11 items medicinal herbs for food and medicine were evaluated for the aflatoxin contamination. in result 41 samples 10 items (21.5%) were detected in the alfatoxin, a high incidence of aflatoxins items are cassiae semen (50.0%), testudinis plastrum (43.8%) and Batryticatus Bombyx (40.0%), Polygalae Radix (31.2%), Zizyphi Semen (23.5%), Dolichoris Semen, Myristicae Semen (20.0%), Nelumbinis Semen (15.8%), Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (7.4%), Hoveniae Semen Cum Fructus (4.3%). AFB1 were detected 27 cases (14.1%), AFB2, AFG1 and AFG2 were detected 18cases (9.4%), 16cases (8.4%) and 5cases (2.6%). The excess cancer risk estimated using the cancer potency of aflatoxin B1 (7(mg/kg/day)-1 for HBsAg-and 230(mg/kg/day)-1 HBsAg+) was N.D ~ $3.79{\times}10^{-6}$ for hepatits B surface antigen negative (HBsAg-) and N.D ~ $9.68{\times}10^{-5}$ hepatits B surface antigen positive (HBsAg+) respectively.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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