• Journal of Yeungnam Medical Science
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• v.4 no.1
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• pp.17-23
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• 1987

New born rat heart cells were dissociated using trypsin and/or collegenase to elucidate the dissociation efficiency of these two enzymes. And the effect of dimethyl sulfoxide during and immediately after cell dissociation was also investigated to clarify the so-called protective activity of dimethyl sulfoxide on cell performance. The results can be summarized as follows. 1. Cold trypsin 18 hours pretreatment followed by warm collagenase treatment resulted best cell viability and cell yield. 2. Single, warm trypsin treatment gave the poorest result. 3. Dimethyl sulfoxide did not seem to play any protective role during or immediately after rat heart cell dissociation. It had very damaging effect on rat heart cells.

• Proceedings of the Korean Institute of Information and Commucation Sciences Conference
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• 2013.10a
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• pp.943-945
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• 2013

The study of Schwann cell myelination has been facilitated by the availability to isolate and establish pure population of primary Schwann cells. Dorsal root ganglia (DRG) of mouse embryo as source of Schwann cells were used in this study. This method includes three steps: first step of dissociation of the embryonic DRG, second step of expansion of Schwann cell precursors, followed by mechanical separation of the Schwann cell-neuronal network from the underlying fibroblasts, and third step of purification of Schwann cells from the associated neurons and subsequent expansion of the purified Schwann cells. We made a highly purified population of Schwann cells and Schwann cell-neuron networks in a short period using this procedure.

• Microbiology and Biotechnology Letters
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• v.39 no.4
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• pp.364-373
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• 2011

Human embryonic stem cells have been highlighted as a valuable cellular source in the regenerative medicine field, due to their pluripotency. However, there is the challenge of the establishment of specific functional cell type forms of undifferentiated human embryonic stem cells (hESC). To establish and purify functional cell types from hESCs, we differentiated undifferentiated hESCs into vascular lineage cells and sorted the specific cell population from the whole cell population, depending on their cell volume, and compared them with the non-sorted cell population. We observed that about 10% of the PECAM positive population existed in the VEGF induced differentiating human embryoid body (hEB), and differentiated hEBs were made into single cells for cell transplantation. After making single cells, we performed cell sorting using a fluorescence-activated cell sorter (FACs), according to their cell volume on the basis of FSC region gating, and compared their therapeutic capacity with the non-sorted cell population through cell transplantation into hindlimb ischemic disease model mice. 4 Weeks after cell transplantation, the recovery rate of blood perfusion reached 54% and 17% in the FSC regions of sorted cells- and non-sorted cells, respectively. This result suggests that derivation of a functional cell population from hESCs can be performed through cell sorting on the basis of cell volume after preliminary differentiation induction. This approach may then greatly contribute to overcoming the limitations of marker sorting.

• Journal of Periodontal and Implant Science
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• v.34 no.2
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• pp.269-279
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• 2004

백악질 세포의 분리 및 배양방법을 확립하고, 이를 이용하여 백악질 세포의 형질특성을 알아보고자 하였다. 교정목적으로 발거된 소구치를 이용하여, 치은섬유아세포, 치주인대 세포 및 백악질 유래세포를 분리, 배양하였다. 백악질 유래 세포 배양시에는 백악질을 절제한 후 Collagenase P를 이용하여 백악질 유래 세포 외의 다른 세포의 개제를 배제하였고, 기질을 분해하여 세포의 분리 및 배양이 용이하도록 하였다. 분리 및 배양시기의 세포의 형태를 광화현미정을 이용하여 관찰하였다. 조골세포의 특성을 가지는 SaOs-2 세포를 대조군으로 이용하여 분리 및 배양된 세포군들을 동일한 조건으로 배양하였다. 3일 및 7일째에 세포증식도를 측정하였고 7일째에 ALPase 효소 활성도를 측정하였다. 각 세포의 형질 특성을 알아보기 위해 RT-PCR을 실시하여 조골세포 분화 표식자와 연관된 osteopontin(OPN), Alkaline phosphatase(ALP), type I collagen(COL-I), Bone sialoprotein(BSP), BMP-2 및 osteocalcin(OC)의 발현을 비교 관찰하였다. 백악질 유래 세포의 분리 및 배양을 시도한 5명의 치아 중에서 3명의 치아에서 세포군을 배양해 낼 수 있었다. 배양한 백악질 유래 세포는 섬유아세포와 유사한 형태와 증식을 보였다. ALPase 효소 활성도 검사 결과 백악질 유래 세포는 SaOs-2 세포보다 낮은 활성도를 나타내었으며, 배양된 세포의 RT-PCR 결과 백악질 유래 세포군에서는 ALPase의 발현이 나타나지 않았고, 다른 조골세포 표식자의 발현도 낮게 나타났다. 이는 백악질 유래 세포가 조골세포 및 다른 대조군의 세포와는 다른 형질 특성을 가지고 있다는 것을 시사한다. 이상의 관찰결과로 사람의 백악질 유래 세포롤 백악질의 절제 및 효소처리 방법으로 효과적인 분리 및 배양이 가능하며, 이는 향후 백악질 세포의 형질 특성 및 백악질 형성의 분자적 기전을 파악하는 중요한 연구자료로 활용 될 수 있을 것으로 사료된다.

• The Zoological Society Korea : Newsletter
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• v.18 no.2
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• pp.21-25
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• 2001

대부분의 조직은 여러 가지 세포가 모여서 이루어지기 때문에 그 중의 어떤 특정세포에서 발현하는 물질을 분석하려면 조직을 이루고 있는 각각의 세포를 분리해내야 한다. 이렇게 순수하게 세포를 분리해내는 기술 중의 하나가 Laser Captured Microdissection (LCM)이 다. LCM의 개발로 기존에 사용되던 방법에 비하여 빠르고 간편하면서, 매우 정확하게 원하는 세포를 순수 분리해서 그 세포의 분자생물학적 또는 생화학적인 분석을 할 수 있게 되었다. LCM은 현미경으로 조직절편을 관찰하면서 원하는 세포를 낮은 에너지의 laser를 사용하여 도려내는 방법으로 조직절편 이외에도 도말된 혈액이나 자궁경부 조직, 그리고 배양된 세포를 cytocentrifugation한 후에 원하는 세포를 포획 할 수도 있다. LCM을 이용한 연구는 여러 분야에서 다양하게 진행되고 있으며, 특히 같은 조직 내에 존재하는 정상세포와 전이중인 세포, 그리고 암세포를 구분해 냄으로써 암의 전이기전 및 병인 연구에 매우 큰 공헌을 하고 있다. 이렇게 분리된 세포는 RT-PCR, LOH (loss of heterozygosity), microsatellite instability, differential gene profiling, cDNA microarray, Western blot, 2D PAGE protein analysis 등의 기법을 접목하여 연구하게 된다. 본 논단을 통하여 1996년 개발된 LCM의 원리와 이제까지 LCM을 이용한 연구 성과를 살펴보고자 한다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• v.23 no.1
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• pp.73-79
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• 1996

골수나 유산물질에 대한 세포유전학적 검사에 있어 통상적인 염색체검사는 검사에 적합한 중기핵상을 얻기 어려워 실패하는 경우가 많다. 이러한 경우에 진단이나 치료에 도움을 줄 수 있는 방법으로 유식세포분리기를 사용하여 단일 세포내 DNA량에 따른 aneuploidy를 추적할 수 있는 가를 확인하기 위해 본 실험을 실시하였다. 79 (혈액 30, 골수 37, 유산물 12)예에서 염색체 검사와 유식세포 분리검사를 동시에 실시하여 각각의 결과를 비교한 결과 79.7% (63/79)의 일치율을 얻었다. 그러나 염색체의 손실이 없는 전좌와 역위의 경우는 물론 작은 조각의 염색체 부분이 늘어나거나 줄어든 경우에 있어서는 유식세포분리방법에 의해서 추적되지 못하였지만, 염색체 검사의 결과를 얻는데 실패한 경우에는 유식세포분리방법이 DNA량의 변화에 대한 정보를 얻을 수 있다는 것을 확인할 수 있었다. 따라서 본 연구결과는 세포유전학적 검사에서 유식세포분리방법이 염색체 검사보다 신속하며 염색체검사가 불가능한 시료에서도 DNA양에 따른 aneuploidy의 추적이 가능하다는 것을 시사한다.

• Proceedings of the Korean Society of Applied Pharmacology
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• 1993.04a
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• pp.150-150
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• 1993

목적 :크롬친화세포는 카테콜아민 (CA)을 분비하는 새포로서 무신 수질내에 주로 존재한다. 따라서 부신피질의 영향을 배제하여 여러가지 자율신경계 작용 약물의 약리작용을 연구하는데 중요한 조직이다. 그러므로, 부신으로부터 크롬친화세포를 분리하여 배양하는 방법을 습득하여 자율신경계 작용약물연구에 이용코자 히스타민을 이용하여 CA 분비작용을 연구하였다. 방법: 도살장에서 소를 즉사시킨 후 좌우양측 부신을 분리하여 collagenase digestion으로 부신수질로부터 분리하고 Percoll gradient에 의해서 chromaffine cell을 정제하였다. 이렇게 정제한 크롬친화세포는 Dulbecco's modified Eagle medium에 10% fetal calf serum과 함께 culture dish에다 넣어 5% $CO_2$, incubator에서 유지시켜 주면서 실험을 시행하였다. 배양세포는 분리후 일주일 이내에 사용하였다. Catecholamine측정은 electrochemical detector를 연결하여 HPLC로 측정하였다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• v.30 no.4
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• pp.317-324
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• 2003

목 적: 본 실험의 목적은 자궁내막세포를 분리 및 배양법 확립과 함께 불멸화 시키는 것이다. 방 법: 자궁내막에서 상피세포(epithelial cells)와 기질세포(stromal cells)의 분리는 Satyawaroop 등(1979)의 방법에 기초를 두었다. 자궁내막에서 상피세포와 기질세포의 순수 분리도를 확인하고, 불멸화된 기질세포에서 SV40 large T antigen을 확인하기 위하여 면역형광 염색(immunocytochemistry)과 Western blot 기법을 이용하였다. 정상 기질세포의 경우 subconfluence (60%) 상태에서 transfection을 진행하였다. 순수 분리된 plasmid DNA와 Qiagen 사의 superfect를 이용하여 transfection을 실시하였다. 결 과: 본 연구에서 우리는 두 가지 형태의 자궁내막 세포의 분리 및 배양에 성공하였다. 상피세포는 다면체의 형태를 띠며, 선(grandular)조직의 조각으로부터 나선형으로 자란다.기질 세포는 길쭉한 형태를 띠며, 상피세포에 비해 오래 살고, 빠르게 증식하여 나란한 형태로 배열된 세포 다발(cell bundle)을 형성한다. 이렇게 분리된 세포들은 95%의 균질성을 보였으며, 면역형광염색과 western blot을 통해 확인 하였다. 한편 SV40(Simian Virus 40) large T 항원을 암호화 하고 있는 염기 서열을 포함한 플라스미드 벡터로 안정적인 트랜스펙션을 시킴으로써 불멸화 된 자궁내막의 기질 세포주를 확립하였다. 불멸화 된 세포는 그 세포가 유래한 정상의 세포와 동일한 표현형을 가지고 있었다. 결 론: 본 연구에서, 우리는 자궁내막에서 상피세포(epithelial cells)과 기질세포(stromal cells)를 분리하여 배양법을 확립하였다. 동시에 SV40 large T antigen을 이용하여 불멸화된 세포주를 확립하였다. 이렇게 확립된 세포주는 자궁의 생리작용 연구 및 자궁내막증(Endometriosis)과 자궁암(Endometrial cancer) 등과 같은 여러 자궁관련 질병 연구에 많은 도움이 될 것으로 사료된다.

• Journal of Periodontal and Implant Science
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• v.34 no.1
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• pp.93-100
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• 2004

많은 연구들에서 hMSC를 얻기 위해 centrifugation, fluoroscence activated cell sorter(FACS), magnetic activated cell sorter(MACS)가 이용되어져 왔다. 그러나 centrifugation만을 이용한 경우 순도가 떨어지며 FACS나 MACS의 경우에는 비용, 시간이 많이 드는 단점이 있다. 따라서 이 연구에서는 antibody cocktail을 이용하여 hMSC를 좀더 쉽게 얻어내는 방법에 대해 알아보았다. 사람의 골반에서 12G의 바늘을 이용하여 골수를 흡입한 후 heparin이 들어있는 시험관에 넣고 처리과정을 시행하기 전에 냉장고에 보관하며 가능한 한 빨리 처리 과정을 실시한다. 얻은 골수에 적당량의 RosetteSep( Stemcell Technologies)을 첨가한 후 실온에서 20분간 반응시킨다. 그 후 적당량의 Ficoll-paque위에 골수와 RosetteSep의 혼합물을 섞이지 않게 올리고 원심분리를 이용하여 원하는 세포층을 얻어낸다. 이 세포층을 따로 분리한 뒤 배양한다. 배양 시 세포가 80%이상 차기 전에 계속 passage를 시행하며 배양한다. 이는 세포가 밀도가 높아져 원치 않는 세포로 분화되는 것을 막기 위함이다. 배양된 세포가 다양한 분화능력을 가지고 있는지 알아보기 위해 세 가지로 분화를 유도하였다. 적절한 배지와 적절한 환경에서 배양함으로써 얻어진 세포를 osteoblast, chondroblast, adipocyte로 분화를 유도하였다. 분화된 세포가 원하는 형질의 세포로 분화되었는지를 확인하기 위하여 osteoblast의 경우 alizarin red staining, alkaline phosphatase activity, chondroblast의 경우 toluidine blue staining, adipocyte의 경우 Oil-Red-O staining으로 염색하여 분화를 확인하였다. 분리해낸 세포는 각각 세 가지 세포로 분화가 되었으며 이는 RosetteSep이 hMSC를 성공적으로 분리해냈다는 것을 보여준다. 그러나 모든 세포가 분화를 보이지는 않았으며 따라서 hMSC의 순도를 높이기 위한 연구가 더 필요하다. RosetteSep을 이용하면 다른 방법들 보다 쉽게 hMSC를 얻을 수 있으나 기존의 방법과 순도의 측면에서 더 비교할 필요가 있다.

• Proceedings of the Korean Institute of Information and Commucation Sciences Conference
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• 2012.05a
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• pp.909-912
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• 2012

An automated cell tracking system is automatically to analyze and track changes of cell behaviors in time-lapse cell images acquired from microscope in the cell culture. In this paper, we proposed and developed an ellipse fitting based algorithm for separating very small size overlapping cells in a cell image consisted of thousands or ten thousands cells. We were extracted contours of clusters and divided them into line segments and then produced their fitted ellipses for each line segment. By experimentations, our algorithm was separated clusters with average 91% precision for two overlapping cells and average 84% precision for three overlapping cells respectively.