Growth kinetic parameters for mass cultivation of Chinese Hamster Ovary (CHO) cells are estimated by measuring oxygen uptake rates. It Is found that there is strong correlation between cell growth and oxygen consumption, showing that correlation factor is 0.83. Derived linear model predicts actual cell density very well. It tells that oxygen uptake rate can play important role in indirectly measuring cell density when conventional method of estimating cell density is no longer meaningful due to heavy cell clumpings. Cell yield per oxygen consumption, $Y_{\chi}o$ and mass transfer coefficient for oxygen, Ka are also estimated as 1.26$\times$10$^4$cells/mmole $O_2$ consumed and 1.01/h, respectively. Average specific growth rate over all runs is 2.891/day for CHO cells with producting 2 grams of tPA per day under continuous perfusion operations.
The object of this work is to improve the maintenance of bioluminescence from stored Photobacterium phosphoreum in a view of developing continuous monitoring system for pollutants. The long-term experiments were performed to determine the effect of storage temperature and immobilization on the maintenance of bioluminescence and viability of P. phosphoreum. A naturally luminescent bacterium, P. phosphoreum was starved in 2.5% Nael solution at $20^{\circ}C$, $4^{\circ}C$, -$20^{\circ}C$ and -$70^{\circ}C$ for 30 days. In vivo luminescence was measured by luminometry, and total cell concentrations and concentrations of culturable and viable cells were determined by acridine orange staining, dilution plate counting, and direct viable counting, respectively. The bioluminescence emission from cells stored at 4De was maintained up to 10 days while those with starved cells at other temperature ranges decreased to background level within 3 days. In terms of viability of cells, concentrations of cells stored at $20^{\circ}C$ were rapidly decreased as a result of cell lysis, leading to a drop in culturable and viable counts while cells stored at $4^{\circ}C$ was shown viable but nonculturable state during starvation. With immobilized cells on strontium alginate, the bioluminescence showed higher maintenance than free cells and decreased with count number of nonculturable cells.
서식수 염분농도의 변화에 따른 guppy(Poecilia reticulotus) 아가미 상피내 염소세포(chloride cell)의 미세구조적 변화를 전자현미경으로 관찰하고, 특히 증가하는 염분농도에 따라 주요변화를 보여주는 염소세포내 미토콘드리아와 tubular system의 면적을 영상 분석기로 측정하여 다음의 결과를 얻었다. 염소세포는 주로 guppy 아가미궁의 일차 총판상피에 위치하는데 담수에서는 하나씩 독립적으로 존재하며 자유면이 apical pit를 형성하여 외부환경에 노출되는 반면. 서식수의 염분농도가 증가하면 여러개의 염소세포들이 다세포복합체를 형성하고 이 세포들의 자유면이 함께 하나의 apical pit를 구성하게 된다. 서식수의 염분농도가 증가함에 따라 염소세포내의 미토콘드리아와 tubular system은 점점 더 조밀하게 분포하는 것으로 관찰되었다 염소세포의 단위면적당 미토콘드리아가 차지하는 면적은 서식수가 담수(0%의 염분농도)인 경우는 24$\pm$5%였고, 1%에서는 26$\pm$5%, 2%에서는 33$\pm$7% 그리고 해수(3.2% 염분농도)에 적응된 경우는 42$\pm$7%로 담수환경의 것과 비교하여 약 18%까지 증가하였다 또한 염소세포의 측면과 기저측 세포막 함입의 결과로 형성되는 tubular system은 세포의 단위면적당 차지하는 면적이 담수에 적응된 개체들에서 38$\pm$9%였고 서식환경의 염분농도에 따라 점차 증가하다가 해수에서는 61$\pm$9%로 약 16%까지 높아졌다.
렉틴(Lectins)은 세포막의 당단백질의 과당류 말단기에 특이적으로 결합하는 비면역성의 당단백질 혹은 단백질을 말하는데 정상세포와 변형된 세포에서 렉틴반응의 차이가 남으로써 요즘에는 렉틴을 병리학적 진단에 이용 가능하게 되었다. “Loss of contact inhibition”은 세포 악성화의 중요한 특징으로 세포의 악성화는 세포막의 구조의 변화와 관계가 있을 것으로 알려져 왔으며 1989년 후두암에서 PNA의 반응이 양성 반응을 나타낸다고 보고되어 저자들은 7가지의 렉틴을 이용하여 후두암전구증의 하나인 후두각화증에서 이형성(Atypia)의 존재유무에 따른 렉틴 반응의 변화를 알아보고자 본 연구를 시행하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 이형성이 없는 단순 후두각화증에서는 Con A와 WGA만이 기저세포에 반응이 있었으며, 후두각화증의 가장 중요한 부위인 극세포층에서는 WGA, RCA-I, PNA, SBA, UEA-I, DBA가 세포질에는 반응이 없이 세포간교에만 염색이 되는것을 관찰할 수 있었고 Con A는 반대로 극세포층의 세포질에 반응을 하였으나 세포간교에는 반응이 없었다. 2. 이형성을 동반한 후두각화증에서, 기저세포에서는 반응의 차이가 없었고 극세포층에서는 UEA-I, RCA-I. WGA, PNA, SBA는 세포간교에서 반응이 나타나지 않았고 세포질에서 양성 반응을 관찰 할 수 있었으며 DBA, Con-A에서는 반응의 차이를 관찰 할 수 없었다. 따라서 후두각화증의 극세포층 세포막에서 UEA-I, RCA-I, WGA, PNA, SBA 반응의 소실은 후두암으로의 진행과 밀접한 관계가 있는 이형성의 존재를 암시한다하겠다.
Intracellular organelles in eukaryotic cells play important roles in many cellular functions. Intracellular trafficking of many proteins to specific intracellular organelles is tightly regulated by various mechanisms in cells. Therefore, elucidating the targeting mechanism of novel markers for intracellular organelles is important for cellular physiology and pathology. In this study, we tried to identify the peptides which could bind to specific glycolipid in cellular membrane using GFP-fused glycolipid-binding peptides, and analyzed their cellular localization. As a result, we could identify mitochondria-, Golgi- or plasma membrane-targeting peptides. Furthermore, we found that the plasma membrane-targeting peptide was localized to the plasma membrane via electrostatic interactions. Thus, our results suggest that various glycolipid-binding peptides could be used as intracellular organelles markers.
The Journal of the Korean Society for Microbiology
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v.11
no.1
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pp.1-11
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1976
An electron microscopic study has been made of the effects of change of cell structure of Escherichia coli treated with several disinfectants. The alterations observed as follows: 1. Nucleoid, cytoplasm which contain ribosomes and cell wall appeared to be composed of a parallel triple. layered membrane can observed in control Escherichia coli. 2. The nuclear material was no longer demonstrable in its normal sites. The cytoplasm lost its granularity, became homogeneous and disruption of cell wall were observed by the treatment with 70% ethyl alcohol and 3% $H_2O_2$. 3. Aggregation of ribosomes and condensation of nuclear material were also observed by the treatment of 5% lysol solution and 1% dodecyl-diamino-ethyl-glycin-hydrochloride. 4. In autoclaved group, the each layer of cell wall was separated and destroyed in some sites where cytoplasm was extracted.
이 글에서는 나노스케일의 직경을 갖는 섬유를 빠른 생산속도로 제작할 수 있는 전기방사공정(electrospinning process)에 대한 개요와 조직공학용 지지체(tissue engineering scaffold)로의 응용을 위한 제조방법에 대해 소개하고자 한다. 세포의 증식, 분화 등의 생물학적 활동에 기반한 조직공학 및 조직재생 분야에서는 일시적 또는 영구적으로 세포가 부착하여 생장할 수 있는 지지체(scaffold)의 활용이 필수적이다. 세포가 이상적으로 성장할 수 있는 지지체를 제작하기 위해서는 세포의 부착 특성, 화학적/물리적/구조적 성장 환경 등이 고려되어야 한다. 따라서 이상적인 세포 성장 환경을 구현하기 위해 실제 세포 주변의 미세환경(microenvironmenr)조건을 모사하는 연구가 많이 이루어지고 있다. 세포외기질(extracellular matrix)이라고 하는 나노크기의 직경을 갖는 섬유기반의 세포 주변 환경을 모사하는 방법의 하나로 전기방사 공정이 '90년대에 들어 활용되기 시작하였다. 현재까지도 전기방사를 이용하여 제작되는 나노섬유는 공정조건 및 재료를 다양하게 응용하여 조직의 물리 화학적 특성을 잘 반영할 수 있는 장점이 있어 조직공학용 지지체로서 광범위하게 활용되고 있다.
Proceedings of the Korean Society of Developmental Biology Conference
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2003.10a
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pp.117-117
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2003
체외에서 한우 난포란의 감수분열과 배발달 능력의 획득에는 단백질 합성이 수반되어야 한다. 그러나 이러한 변화와 관련된 연구 보고는 거의 전무한 실정이다. 본 실험은 난자의 핵성숙과 관련된 세포질내 단백질 변화를 파악하기 위하여, 체외성숙 시간에 다른 배발달율과 세포질내 단백질을 비교하여 배발달능력 획득과 관련 있는 단백질을 규명하고자 실시하였다. 한우 난소에서 2-8mm의 가시난포로부터 난포란을 회수하였다. 회수된 난포란은 10% FBS와 호르몬이 첨가된 TCM199 용액에서 18시간 또는 24시간 체외성숙을 실시하였다. 난자 세포질내 단백질 변화는 2D gel electrophoresis를 이용하였고, 유의적인 변화를 나타낸 spot은 peptide mass fingerprinting을 통하여 단백질 동정을 실시하였다. 체외수정은 fer-TALP 용액을, 체외배양은 CR1aa 용액을 배양 3일째까지는 0.3% BSA, 그 이후에는 10% FBS와 난관상피세포를 첨가하여 사용하였다. 통계분석은 t-test를 이용하였다. 난자의 세포질에 대한 이차원전기영동 결과 29개의 단백질 spot들을 확인하였다. 한편 체외성숙 18시간째에 PB가 출현된 난자는 PB가 출현되지 않은 난자에 비하여 15개의 spot에서 유의적인 변화를 나타냈다. 이들 중 4개의 단백질 spot은 낮았고, 11개 spot의 수준은 높은 경향이었다. 체외성숙 18시간째와 24시간째의 배발달율을 조사한 결과 18시간째에서 유의적으로 높은 배반포 발달율을 나타냈다. 그리고 체외성숙 18시간과 24시간째 난자의 세포질내 단백질 spot들의 변화를 비교한 결과 PB가 출현된 난자 세포질에서 단백질의 변화와 유사한 경향이었다. 그러나 2개의 단백질 spot은 상반된 경향을 나타냈다. 따라서 본 실험에서 난자의 핵성숙과 관련 있는 15개의 spot을 확인하였고, 이들 단백질 spot중에서 2개가 배발달 능력과 관련이 있을 것으로 사료된다.보다는 육질등급에 많은 영향을 받는 것으로 판단된다. 한편 육질 1등급에서 배발달율이 낮은 이유는 육질 향상을 목적으로 암소를 비육 하는 경우 발생하는 번식장애와 밀접한 관계가 있는 것으로 사료된다.각각 가장 높았다. 배양 8일째 배반포의 세포수에 있어서 총세포수와 TE 세포수는 차이가 없었으나, ICM 세포수가 l0mg 첨가군에서 가장 높았다. 본 실험 결과에서 체외성숙 배지에 NEAA와 EAA 첨가가 배발달율에는 효과가 없었지만, 첨가농도의 증가에 따라 ICM 세포수가 증가하였다. 한편 체외성숙 배지에 LAH 첨가는 첨가 농도가 높을수록 배발달율은 낮았지만 ICM 세포수는 증가하였다.에 Csk가 관여하고 있음을 알 수 있다. 결론적으로 성적 성숙에 따른 생쥐 정소 내 Src-Csk loop의 발현과 Src kinase 활성의 변동은 정소 내 간충조직, 세정관 상피의 증식 및 기능적 분화 과정을 매개하는 생리적 활성분자 수용체 하위의 신호전달 과정에 Src-Csk loop에 의한 조절가능성을 확인할 수 있었다.rugrene의 향기성분이 주요 성분군으로 확인되었다. 2. 생강나무에서 생강의 향기를 발산하는 성분으로는 $\beta$-myrcene, o-terpinolene, phellandrone, ι-limonene, $\beta$-eudesmol, $\delta$-cadinone, elemol, trans-caryophyllene으로 동정되었으며 그 중에서도 phellandrene, $\beta$-eudesmol이 주된 역할을 하는 성분으로 확인하였다. 유의적인 관련성이 나타났고, 복부 비만의 지표인 허리엉덩이둘레비는 GPT, alkaline phosphatase, 공복시 혈당 및 MCV 등 다양한 건강지표와 관련성을 나타내어 향후 비만에 있어 다양한 혈액 성상의 변화 및 역할규명에 대한 연구가 이루어져야 할 것으로 본다.hat
이 연구의 목적은 원래의 치수조직과 유사한 조직을 재생하기 위한 pulp tissue engineering의 한 방법으로 건전한 조직으로부터 배양된 치수세포와 쥐의 조섬유세포(NIH 3T3 cell)를 Rat tail type I collagen solution에서 3차원적으로 관찰하기 위한 것으로, 콜라젠 젤의 수축량과 세포의 증식 량을 비교하였으며, 또한 마모된 사람치아의 표면과 배양용기에서 두 세포의 증식 량을 비교하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 콜라젠 젤에 NIH 3T3 세포를 배양한 경우 그 수축량은 최소였으나, 치수세포를 배양한 경우 그 수축량은 현저하였다. 2. 서로 다른 수의 치수세포를 콜라젠 젤에서 배양시킨 경우 세포 수가 많을수록 수축량이 증가하였으며, 세포가 없는 콜라젠 젤은 수축하지 않았다. 3. 치수세포를 콜라젠 젤에서 18일간 배양시킨 후 세포의 증식은 거의 없는 반면, NIH 3T3 세포는 계속 증식하였다. 4. 마모된 사람 치아 표면과 배양 용기에서 치수세포와 NIH 3T3세포를 배양한 경우 NIH 3T3세포가 치수세포에 비해 빠르게 증식 하였으며 , 특히 사람 치아의 표면에서 NIH 3T3세포가 현저히 빠른 증식을 보였다. 이상의 결과는 치수세포를 type I collagen gel에서 3차원 적으로 배양 후 치수조직의 재생을 유도하는 pulp tissue engineering에 관한 연구에 발판이 될 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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