The author isolated high cellulolytic fungi from natural sources and determined optimal condition of protoplast formation and fusion as fundamental step for improvement of the isolated it's cellulolytic ability. Three different cellulolytic fungi, such as Aspergillus sp., Penicillium sp. and Trichoderma sp., were isolated from soil. Their cellulolytic activities were compared with that of Aspergillus niger which was useful industrially and had cellulase activity. It was Aspergillus sp. that showed the highest activity of all these four fungi. And then it was followed by Penicillium sp., Trichoderma sp., and Aspergillus niger in order. An auxotrophic mutant of Aspergillus sp. was obtained by UV mutagenesis method. Having try to produce protoplast from mycelia, the author found that ${\beta}-glucuronidase$, at pH 6.0, was effective cell-wall lytic enzyme. And the optimal concentration of this enzyme was 5,000 unit/ml. Regeneration rates of wild type, met. auxotroph and arg. auxotroph, in presence of osmotic stabilizer, were 7. 0%, 7. 5% and 5.2%, respectively. PEG with M.W. 6,000 was effective stimulator for protoplast fusion in the concentration of 30% (W IV). In such a condition, we obtained 1.2% cell fusion rate.
A carboxymethyl cellulase (CMCase) bas been isolated and purified from Lampteromyces japonicus. The molecular weight of CMCase was estimated to be 42 kDa by sodium dodecyl sulfate (SDS) polyacrylamide gel electrophoresis. The maximum activity of the purified CMCase was observed at pH 6.0 and $30^{\circ}C$, and stable for pH 4 to 7 to maintain 40% activity. The CMCase activity was activated by $Al_{2}(SO_{4})_{3}$, and inhibited by SDS. Also, the enzyme activity was decreased by the addition of ethylene diamine tetraacetic acid (EDTA), suggesting that the purified CMCase is metalloenzyme.
In the studies of microbiological utilization of cellulosic wastes, cellulolytic fungi were isolated and screened out. At the first stage, 221 cellulolytic fungi were isolated from different sources such as soils, humus, composts and rotten wood debris by enrichment culture techniques. In the second stage, 36 strains of fungi out of those previously isolated were selected for their cellulase activities estimated by means of filter paper degradation, carboxy methyl cellulose liquefaction and cup method. Activities of C$_1$-cellulase, C$\sub$x/-cellulase and filter paper activity were adopted on the final screening stage and five different strains which are tentatively identified as Aspergillus sp.(strain No. AS-9), Penicillium sp. (strain No. KNI-1-2), Trichoderma, sp. (strain No. KI-7-2, KI-7-5, KI-4-1-1B) were selected for their high potency of C$_1$ and C$\sub$x/-cellulase activities. When rice straw milled and treated with NH$_4$OH was hydrolyzed with the crude enzyme Prepared from the culture broth of Trichoderma sp. (strain No. KI-4-1-1B), saccharification rate was obtained up to 26%.
For the utilization of natural cellulosic materials by microorganisms, a potent cellulase-producing microorganism was isolated and identified as Trichoderma spp. Rice straw used as a substrate in this study was preliminarily treated with chemical solvents and/or additionally treated with acids and by heat, and then examined with the cellulase produced by the organism. Better results in sugar production by decomposing the straw cellulose were obtained, when the cellulase was produced by cultivating the organism in the selection medium, pH 5.0, for 5 days, and when the pretreated straw substrate was additionally treated with 0.1% $H_2SO_4$ sulfuric acid at $120^{\circ}C$ for 1 hour. The enzyme production was increased by about 20%, when 0.5% urea 0.5% phosphate, 0.1% meat extract, or 5% orange peel was added into the culture medium. For the practical purposes, the sugar production from the rice straw by the cellulase-producing microorganism can be improved by extending the reaction time of the enzyme up to 24 hr or longer.
This study was carried out to obtain the basic data on artificial culture of Lampteromyces japonicus. Favorable media for mycerial growth were glucose peptone medium, malt yeast extract, yeast malt peptone, potato dextrose medium. The optimum conditions for the mycelial growth were $30^{\circ}C$ and pH 6.0. Dextrose as a carbon source was favorable to mycelial growth. The optimal dextrose concentration was 1.2%. As nitrogen sources, yeast extract, $(NH_4)_2HPO_4$ and 0.2% for glutamine. The mineral salts of $Al_2(SO_4)_3{\cdot}14H_2O$ were effective and the optimal concentration was 0.1 M.
Journal of the Korea Organic Resources Recycling Association
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v.14
no.4
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pp.141-150
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2006
To develop the microbial agents for the environmentally-friendly treatment and recycling of food waste, useful microorganisms, which showed higher degradation activities to various organic compounds and possessed flocculating activities, were isolated from the earthworm. One of the isolated strains, named JS-01, was further selected due to its higher flocculating activity against 0.5% Kaolin clay. JS-01 was identified as Bacillus pumilus sp. by 16s rDNA analysis. The optimal temperature and pH for the growth of JS-01 to express the flocculating activity was found to be at $37^{\circ}C$ in pH 7.0 of EPS broth medium. JS-01 also expressed good degrading activity against cellulose, which is one of the representative organic materials in food waste. We propose that JS-01 will be a good candidate for the efficient treatment of food waste and leachate due to the property to degrade cellulose and flocculating activity.
A carboxymethyl cellulase (CMCase) has been purified from Loweporus roseoalbus. The molecular weight of the purified CMCase was estimated to be 28.5 kDa by sodium dodecyl sulfate (SDS) polyacrylamide gel electrophoresis. The maximum activity of the purified CMCase was observed at pH 4.0 and $30^{\circ}C$, and stable for pH 3 to 5 to maintain 60% activity. The CMCase activity was activated by SDS and inhibited by PMSF and 1,10-phenanthroline. The enzyme activity was also decreased by the addition of ethylene diamine tetraacetic acid (EDTA), suggesting that the purified CMCase is metalloenzyme.
Using PCR amplification, we cloned a cellulase gene (ce/H) from the Bacillus subtilis AH18 which has plant growth-promoting activity and antagonistic ability against pepper blight caused by Phytophthora capsici. The 1.6 kb PCR fragment contained the full sequence of the cellulase gene and the 1,582 bp gene deduced a 508 amino acid sequence. Similarity search in protein database revealed that the cellulase of B. subtilis AH18 was more than 98% homologous in the amino acid sequence to those of several major Bacillus spp. The ce/H was expressed in E. coli under an IPTG inducible lac promoter on the vector, had apparent molecular weight of about 55 kDa upon CMC-SDS-PAGE analysis. Partially purified cellulase had not only cellulolytic activity toward carboxymethyl-cellulose (CMC) but also insoluble cellulose, such as Avicel and filter paper (Whatman No. 1). In addition, the cellulase could degrade a fungal cell wall of Phytophthora capsici. The optimum pH and temperature of the ce/H coded cellulase were determined to be pH 5.0 and $50^{\circ}C$. The enzyme activity was activated by $AgNO_3$ or $CoCl_2$. However its activity was Inhibited by $HgC1_2$. The enzyme activity was activated by hydroxy urea or sodium azide and inhibited by CDTA or EDTA. The results indicate that the cellulase gene, ce/H is an antifungal mechanism of B. subtilis AH18 against phytophthora blight disease in red-pepper.
To investigate nutritive values of a feed fermented with basidiomycetes, among the isolated strains, Lyophyllum decastes (Fr.) Sing. was found with the greatest enzyme productivity and rapid mycelial growth in rice straw medium. Optimum temperature, pH and moisture content for mycelial growth and enzyme production of the strain were $25{\sim}30^{\circ}C,\;pH\;4.0{\sim}7.0\;and\;70{\sim}75\;%$, respectively. Fifteen days of culture were required for the highest enzyme productivity. Among the sub-materials added, $30{\sim}40\;%$ of rice bran and $10{\sim}20\;%$ of defatted perilla seeds were effective for the enzyme production, but caused a reduced mycelial growth. The greatest effect of an addition of inorganic salts was obtained with $0.36{\sim}0.72\;%\;of\;(NH_4)_2HPO_4$. When 40 mesh or smaller rice straw and steam treatment at $0.5\;kg/cm^2$ were used, the mycelial growth decreased, whereas the enzyme production increased. The mycelial growth and enzyme production increased when $Ca(OH)_2$ was used as the alkali treatment, but decreased with increasing concentration of NaOH. As the fermentation proceeded, the amounts of ash, reducing sugar and total nitrogen increased, but cellulose, lignin and pentosan decreased. When the rice straw was treated with alkali, the amounts of ash, total nitrogen and lignin decreased, but reducing sugar and cellulose increased. At higher NaOH concentration, the variation become greater. The in vitro dry matter digestibility of the products increased from 55.03 % at the beginning of the fermentation to 62.72 % at 45 days after fermentation. The most effective alkali treatment on the digestibility of rice straw was KOH followed by NaOH. However, the digestibility increased with increasing concentration of NaOH. The digestibility of pretreated with alkali increased after fermentation as well.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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