10% 질산으로 탈회과정을 거친 골수생검조직에서는 각종 병리검사가 불가능하거나 재현성이 극히 제한적이었다. 각 실험군의 고정액으로는 산을 포함한 고정액과 산 비포함 고정액으로 나누어 사용하고, 탈회액으로는 산성 탈회액과 알카리성 탈회액(EDTA계열)으로 나누어 사용하였으며, 단계별 시간을 각각 다르게 하여 실험하였다. 산이 포함된 고정액 및 탈회액을 사용하였을 경우 모든 병리검사가 불가능할 정도로 검체가 불량하였다. 그러나 EDTA 계열의 탈회액으로 처리한 검체들은 EBV ISH에서는 비특이적 반응이 없어졌으며 FISH, DNA, RNA 검사에서도 병리진단이나 각종 연구에 적합한 수준의 결과를 얻었다. 골수생검조직의 고정방법과 탈회방법을 개선함으로써 ISH, FISH, DNA 검사뿐만 아니라 RNA 연구도 가능하게 하며 각종 검사법의 민감도, 특이도 및 재현성을 확보할 수 있게 되었다. 골수생검조직을 이용한 각종 검사법의 안정화로 환자의 진단, 예후 예측 및 치료 방침결정에 기여 할 수 있을 것으로 생각된다.
치근 우식증은 복합적인 요인에 의해 발생되는 질환으로 고령 인구의 증가로 최근 증가추세에 있으나 아직까지는 병소 깊이, 상아질 탈회의 정도 및 양상, collagen의 파괴 정도 및 수산화인회석 결정 변화에 대한 탈회 완충액의 조직학적 연구는 미비한 실정이다. 본 연구는 우식 형성에 영향을 주는 산 완충용액 내의 pH와 유산의 농도변화에 따른 치근 상아질 우식 병소의 진행에 미치는 변화를 편광현미경을 이용하여 관찰하고 관찰된 우식 병소층의 수산화인회석의 결정 형태 변화를 주사전자현미경으로 관찰하여 탈회 과정을 살펴보고자 세 가지 pH (4.3, 5.0, 5.5)군과 각각의 pH군에 세 가지 유산의 농도 (25mM, 50 mM, 100 mM)를 이용하여 인공치근 우식을 형성한 후 비교 분석하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 편광현미경 소견에서 우식 병소의 깊이는 pH보다는 유산의 농도에 의해 더 영향을 많이 받았다. 2. 주사전자현미경 소견에서 유산의 농도가 높아질수록 그리고 pH가 낮아질수록 수산화인회석 결정의 소실이 더 많이 진행되었다. 3. 탈회는 수산화인회석 결정의 변연부가 소실되며 결정 cluster내 결정의 숫자 및 크기가 감소하였고 결정 cluster 사이의 간격이 넓어지는 양상으로 관찰되었다. 4. 표면층에서의 주사전자현미경 관찰 시 유산의 농도가 높아질록 수산화인회석 결정 cluster의 형태는 소실되고 콜라겐 섬유 표면에 수산화인회석 결정의 용해, 재결합된 양상으로 관찰되었다. 5. 탈회 과정에 대한 주사전자현미경 관찰 시 상아질의 탈회는 단순히 탈회만 독립적으로 일어나는 과정이 아닌 탈회와 재광화가 동시에 일어나는 양상으로 관찰되었다. 이상의 결과 산 완충용액 내의 유산의 농도가 높아지고 pH가 낮아질수록 탈회의 속도가 증가하고 탈회의 과정은 수산화인회석 결정 cluster의 표면으로부터 진행되며 시간이 경과함에 따라 수산화인회석 결정의 형태는 원형 또는 타원형에서 불규칙한 형태로 변화되었다.
조직학적으로 유용성이 입증된 산탈회법을 이용한 인접면 비교적 초기 치아 우식의 병소를 형성하여 진단율을 조사하였다. 산 용액을 이용하여 20개 인접면 치아우식을 20개 소구치에 형성하였고, 37개 인접면 치아우식을 30개 대구치에 형성하였다. 건전한 소구치 20개, 대구치 30개를 포함하여 총 96개 치아를 4개씩 나누어 24개의 블록을 형성하였고, 각각 2개 블록의 교합면을 교합시켜서, 교익촬영을 하였다. 촬영 결과를 36명의 치과의사들이인접면 치아우식의 유무를 기록하고, 동시에 및 ROC 분석을 위한 5 개 범주의 판독 기준으로 판독하여 기록하였다. 인접면 치아우식증 유, 무만으로 판독한 결과 진단의 sensitivity는 0.71, specificity는 0.78 이였다. ROC 분석 한 결과의 곡선도표 아래부분의 평균 면적은 약 0.806 이였다. 치아우식증 유무만으로 진단한 결과는 특정한 sensitivity와 specificity 만을 나타내지만, ROC 분석 결과는 주관적 진단 기준과 구별되는 고유의 진단 능력을 표시하는 1-specificity(False Positive)의 변화에 따른 sensitivity(True Positive)의 변화를 연속적으로 나타내어 주었다.
본 연구에서는 lactic acid를 이용하여 인공 탈회용액을 제조하여 우식이 없는 치아로 시편을 만들고 법랑질 부위에 인공 우식 병소를 생성 시키고 유기산 농도 0.01 M, pH 5.5로 고정한 상태에서 유기산 완충용액의 포화도를 달리하여(0.507, 0.394, 0.301, 0.251) 재광화를 시키고 편광 현미경하에서 관찰 및 디지털 카메라로 촬영하였다. 이를 통해 얻은 상에서 탈회 깊이의 변화, 우식 표면층 폭의 변화, 무기질의 양적 변화를 컴퓨터 프로그램을 이용하여 비교, 통계 분석하여 다음 결과를 얻었다. 1. 재광화 전에 비하여 재광화 후 모든 군에서 10-30% 재광화 양이 증가 하였다. 2. 재광화 후 4군에서는 우식 표면층과 심부 모두에서 재광화가 일어나는 양상이 나타난 반면 1군에서는 심부 보다 우식 표면층 부위의 재광화가 더 일어난 양상이 관찰되었다. 3. 재광화 후 시편의 탈회된 깊이의 변화는 탈회시킨 후와 비교할 때 모든 군에서 유의할만한 변화는 없었으며 군간의 통계적 유의차도 없었다. 결론적으로, 유기산 0.01 M, pH 5.5로 고정한 상태에서 포화도가 가장 낮았던 군(0.251)에서는 우식 표면층에서 심부까지 재광화가 일어난 반면, 포화도가 가장 높았던 군(0.507)에서는 우식 표면층에서 재광화가 주로 일어났다.
이 연구의 목적은 교정용 bracket부착에 의한 교정치료시 법랑질 표면에 나타나는 탈회 형태 및 손상정도를 평가하고 이를 개선시킬수 있는 방법에 대하여 알아보기 위함이다. 건전한 법랑질 표면을 갖는 40개의 소구치를 산부식과 다양한 불소도포에 의해 처리한 뒤 환자의 구강에서 3개월동안 유지시켰다. 모든 견본 소구치를 발거하여 주사 전자현미경으로 법랑질 표면을 평가하였다. 이 연구로부터 얻어진 결과는 다음과 같다. 1. Bracket 부착에 의한 법랑질 표면에 어느 정도 탈회와 손상이 나타났다. 2. $2\%$ NaF을 전기이온 도포한 Group 6이 건전한 법랑질 표면에 가장 유사한 형태로 개선되었다. 3. 산 부식 후 아무런 처리도 하지 않은 Group 2에서 불소 도포한 다른 Group들 보다 더 큰 법랑질 탈회와 손상이 나타났다. 4. Bracket 부착에 의한 법랑질 표면의 탈회와 손상 정도는 불소 도포방법에 의하여 개선이 이루어 졌다.
연구목적은 조(粗)난황항체(IgY)의 Streptococcus mutans의 산 생성에 대한 억제 효과 및 법랑질 탈회 억제 효과를 생체외 실험으로 연구하는 것이었다. Todd Hewitt broth 및 자당이 5% 첨가된 Todd Hewitt broth에서 조난황항체 농도 2.5%에서 17.5%에 따른 S. mutans의 산 생성 억제 효과는 2.5%에서 부분적 억제 효과가 있었고 농도가 증가할수록 산 생성이 더 억제되었으며, 항체 농도와 pH사이에는 배양 후기에 높은 순 상관성이 있었다. 자당이 5% 첨가된 Todd Hewitt broth에서 12시간 배양 후 유치 법랑질 시편의 표면미세경도 변화를 측정하였을 때 조난황항체 농도 2.5%에서 법랑질 탈회 억제효과가 있었고 농도가 증가할수록 더 억제되었으며, 항체 농도와 경도 사이에는 높은 순 상관성이 있었으며, 농도별 탈회 억제율은 2.5%에서 32.28%, 7.5%에서 42.28%, 12.5%에서 64.06%, 17.5%에서 92.79%이었다. 이상의 결과는 조난황항체를 이용한 수동면역을 통해 치아우식증의 예방이 가능할 것임을 시사한다.
상아질의 재광화에 적당한 불소농도에 대하여는 서로 다른 주장이 존재하므로 불소가 병소 내 무기질의 분포와 수산화인회석 결정성장에 미치는 영향을 분석하기 위하여 이 연구를 시행하였다. 치아절편을 유산완충 탈회용액에 넣어 인공 치아우식을 형성한 후, 재광화 효과를 관찰하기 위해 불소농도가 각각 1, 2, 4 ppm인 유산완충 재광화용액에서 7일간 유지시켰다. 우식 진행과 재광화 양상을 관찰하기 위하여 탈회 2일, 재광화 7일 등 총 9일간 편광현미경으로 관찰하였으며 수산화인회석결정의 변화를 관찰하기 위하여서는 정상상아질, 탈회 2일군, 재광화 7일군의 파절시편을 주사전자현미경으로 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 모든 군에서 병소상부의 무기질침착과 병소하부의 무기질소실이 동시에 일어났다. 2. 불소농도가 증가하면 우식 병소의 무기질침착이 증가하였다. 3. 수산화인회석결정이 커졌다. 본실험의 결과에 의하면, 상아질의 우식과 재광화과정이 단순히 탈회 또는 재광화만이 독립적으로 일어나는 과정이 아니고 이 두 과정이 동시에 일어나는 동력학적인 과정이다. 또한 불소농도의 증가와 함께 재광화 양상도 증가하였고, 이러한 재광화는 유기기질망 주위의 수산화인회석결정을 중심으로 진행되었다.
초기 법랑질 우식의 경우 주위의 pH, 유기산의 종류 및 농도, 치아의 무기질 및 유기질의 화학적 조성, 불소의 농도, 용액의 포화도 등에 의해 영향을 받는다고 하였다. 본 연구에서는 lactic acid를 이용하여 법랑질을 인공 탈회시키고, pH 5.5인 포화도가 다른 세 가지 재광화 용액 (포화도: 0.25, 0.30, 0.35)으로 12일간 처리한 후, 편광 현미경에서 얻은 상에서 탈회 깊이의 변화, 우식 표면층 폭의 변화 무기질의 양적 변화를 Photoshop. Image pro plus, Scion Image, Excel을 이용하여 비교, 분석하였다. 1. pH 5.5에서 재광화 용액의 포화도가 증가할수록 우식 표면층의 폭은 증가하였다. 2. pH 5.5에서 1군의 경우 우식 부위에 전반적으로 재광화가 일어났으나, 3군의 경우 우식 표면층에서만 재광화의 양상이 뚜렷하게 나타났고, 3군에서는 1군과 3군의 중간적인 양상이 나타났다. 한편, 3군의 경우 1, 2군보다 우식 표면층의 폭이 유의하게 증가하였다. 결론적으로 본 실험의 조건에서 포화도가 가장 낮았던 군에서는 우식 표면층에서 우식 심부까지 전반적으로 재광화가 일어난 반면, 포화도가 높아질수록 우식 표면층의 폭은 증가하였으나 우식 심부에서는 큰 변화를 보이지 않는 양상이 나타났다.
치주조직재생을 도모하기 위한 전통적인 시술방법으로는 여러 가지 골이식재를 이용한 골이식술이 오래 전부터 이용되고 있다. 이번 실험의 목적은 장,단기간의 신생골의 형성과 CPP의 흡수를 비교하여 골이식재로서 Calcium Polyphosphate(CPP)를 평가하는 것이다. 이번 실험에 사용된 CPP는 무수 $Ca(H_2PO_4)$를 condensation하여 무결정의 $Ca(PO_3)_2$를 얻고 이를 용융하고 냉각시킨후 분쇄하여 얻은 것으로 키토산이나 $Na_2O$를 첨가한 후 3세된 비글견에 이식하여 관찰하였다. 양성 대조군으로 동결탈회건조골을 이용하였다. 조직학적으로 3개월 소견과 같이 섬유조직의 게재없이 신생골의 형성이 관찰되었다. 12개월 후의 신생골의 형성은 3개월 결과에 비해서 동결탈회건조골이나 키토산, $Na_2O$를 넣은 CPP 과립에서 더 많은 비율로 나타났다. 음성 대조군과 이식재를 넣은 군간에는 유의성이 있는 것으로 나타났고(p<0.05), 또한 키토산을 첨가한 CPP 과립과 $Na_2O$를 첨가한 CPP 과립 사이에는 신생골의 형성에 유의성이 없었다. 이식한 CPP 과립의 경우 흡수소견이 3개월 결과에 비해 크게 증가하지 않았다. 이번 실험에서는 첨가물에 상관없이 CPP 과립은 골유도성과 생체적합성을 보였다. 그러나 흡수속도가 매우 느려 신생골로 대체되는 여부를 알 수 없었다. 향후 연구에서는 흡수속도를 증가시킬 수 있는 적당한 CPP 형태와 첨가물을 밝혀내어야 할 것이다.
치주조직 재생을 도모하기 위한 전통적인 시술방법으로 여러가지 골이식재를 이용한 골이식술이 이용되고 있다. 이번 실험의 목적은 골형성을 위한 재료로 Calcium Polyphosphate(CPP)를 사용하여 비글견에서의 조직 반응과 골유도성을 보는 것이고 또한 다른 이식재들간에 신생골의 형성에 어느정도 영향을 주는 가를 알아보는 것이다. 이번 실험에 사용된 CPP는 무수 $Ca(H_2PO_4)$를 condensation하여 무결정의 $Ca(PO_3)_2$를 얻고 이를 용율하고 냉각시킨 후 분쇄하여 얻은 것으로 3세된 비글견에 이식하여 관찰하였다. 조직학적으로 CPP granule의 경우는 키토산이나 $Na_2O$를 넣은 경우 모두 bone 의 ingrowth가 관찰되었고 다른 섬유조직의 개재를 볼수 없었다 동결탈회건조골을 넣은 경우에는 주위로 골형성 보이지 않았고 단지 섬유성 조직이 관찰 되었다. 아무것도 넣지 않은 경우에 비해서 동결탈회건조골이나 키토산, $Na_2O$를 넣은 CPP granules 경우에 더 많은 비율로 신생 골의 양이 나타나는 것을 볼수 있었다. 아무것도 넣지 않은 대조군과 이식재를 넣은 군간에는 유의성이 있는 것으로 나타났고(p<0.05). 또한 CPP granules with chitosan과 CPP granules with $Na_2O$ 사이에는 신생골의 형성에 유의성이 없었다. 이것으로 보아 CPP granules with chitosan과 CPP granules with $Na_2O$는 모두 골유도성이 있고 신생골의 형성을 촉진하므로 치주질환으로 인한 골결손 부위에 사용할 수 있는 재료로 우수한 특성을 지닌다고 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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