박테리아나 세포를 표면에 패터닝하는 기술은 세포생물학, 항균제 스크리닝, 항균 모니터링, 조직 공학 등 다양한 분야에 적용될 수 있는 잠재력을 지니고 있다. 본 연구에서는 부분적으로 개조된 열방식의 잉크젯 프린터를 이용하여 박테리아를 평판 한천배지에 2차원 배열로 패터닝할 수 있는 기법을 개발하였다. 박테리아 용액의 농도는 잉크젯 노즐에서 분출되는 용액 한 방울에 한개의 콜로니가 형성되도록 최적화 하였고, 박테리아 농도와 한천배지 농도가 패터닝 성능에 미치는 영향을 정량적으로 측정하였다. 상용 잉크젯 프린터를 이용한 박테리아 패터닝은 기존 방법에 비해 비용과 재료의 소모가 적다는 장점이 있다.
토양으로부터 다량의 적색 색소를 생산하는 KH-95 균주를 분리하였다. 형태학적 특성 및 생리학적 특성을 조사한 결과 KH-95는 Serratia sp.로 동정되었다. 본 균주가 생산하는 적색색소를 용매 추출 및 실리카겔 칼럼 크로마토그라피를 이용하여 분리, 정제 후 기기분석을 수행한 결과 prodigiosin의 일종으로 밝혀졌다. Serratia sp. KH-95 균주가 prodigiosin계 적색색소를 생산하기 위한 최적 조건은 배양온도 28$^{\circ}C$, 초기 pH는 7.0였으며 배지 조성을 검토 결과 카제인이 색소의 생산에 가장 적합하였다. 대두유, 미강유와 같은 oil을 제외한 대부분의 탄소원과 이용하기 쉬운 질소원인 효모즙, 육즙, 펩톤 등은 균체의 생장은 촉진 하였으나 색소 생산을 현저하게 저해하였다. 최적화된 배지 및 배양조건에서 대두유를 탄소원으로 첨가할 경우 3,380 mg/l의 많은 적색색소가 생산되었다.
홍국 색소의 액체배양에 의한 대량생산조건을 개발하기 위하여 Monascus sp. KM 1001 변이주를 대상으로 균체생산 및 색소생성에 미치는 최적배양조건을 비교 검토하였다. 실험균주의 색소생성을 위한 액체배지의 최적화학적 조성은 4% rice powder, 0.15% Bacto-peptone, 0.1% glycine, 0.01% $FeSO_{4}{\cdot}7H_{2}O,\;0.1%\;MgSO_{4}{\cdot}7H_{2}O,\;0.25%\;KH_{2}PO_{4},\;pH4.5$였다. 실험균주의 $2.0{\times}10^{6}\;spores/ml$의 포자현탁액을 액체배지 50 ml에 접종하여 배양온도 $30^{\circ}C$에서 150 rpm으로 5일간 배양하였을 때, 10.00 g/L의 균체생산과 세포외 황색색소 오렌지색소와 적색색소는 각각 3.25 unit, 1.59 unit, 0.88 unit를 생성하였으며, 세포내 황색색소 오렌지색소와 적색색소는 84.96 unit, 78.84 unit, 91.80 unit의 색소를 생산할 수 있었다.
산가수분해법과 칼럼크로마토그라피법을 이용하여 레반 올리고당과 저분자량 레반을 생산하였다. 레반에 대한 산가수분해반응은 시간의존적으로 비례적으로 진행되었으며, 다른 미생물 유래의 레반을 사용시에도 동일한 결과를 나타내었다. 레반 올리고당의 제조를 위한 최적화된 조건은 5% 레반을 0.38 M 황산, 95$^{\circ}C$, 4분간 처리하였을 때였으며, 최종생산물로 중합도 3-6의 레반 올리고당을 얻었다. 생성된 레반을 올리고당을 탄소 원으로 이용하여 두 젖산 생성균주(Lactobacillus plantaurm KCTC 3104와 Pedioccccus pentosaceus KCTC3507)의 생장배지에 첨가하고 레반 자체를 첨가한 배지와 비교시, 뚜렷한 생육촉진효과와 pH 감소효과가 나타났다.
본 연구에서는 2차원 형광 센서를 이용하여 ALA 생산 공정을 실시간 모니터링하고 오프라인 분석 데이터와 비교, 고찰하였다. 배양액의 pH나 균체의 성장 특성 등 생물공정내의 환경 변화에 따라 형광 특성에 차이를 보였으며 최소배지인 MS8 배지에 IPTG, LA 및 기질 (포도당, 숙신산) 등을 첨가한 후 형광 특성의 변화를 살펴본 결과 균체의 성장이나 세포내 대사현상의 변화를 형광 차이로부터 확인할 수 있었다 2차원 형광센서에 의해 실시간 모니터링 된 형광 스펙트럼데이터는 기질 및 생산물 그리고 세포내 효소 활성 등의 각종 공정 변수와 좋은 상관성을 보였다. 따라서 본 연구에서 사용한 2차원 형광센서는 ALA 대량 생산을 위해 주요한 공정변수를 실시간 모니터링 하는데 매우 효과적이라 할 수 있으며 향후 공정의 제어 및 최적화에도 이용될 수 있다.
This study was conducted to optim ize the composition of CEM (cabbage extract medium) and cryoprotectants on the growth of Lactobacillus plantarum, a probiotics growing in plant and milk. For this, we analyzed the growth characteristics of Lb. plantarum in CEM and subsequently optimized the medium composition by addition of carbon, nitrogen sources and buffering agents. Among carbon sources, glucose showed the best result to increase the cell density after dilution of CEM. When 0.5% yeast extract and 1% soy peptone were supplemented in the diluted CEM, Lb. plantarum grew up to the maximum cell density. Addition of buffering agents in CEM was not significantly effective to increase the cell density. Meanwhile, addition of 12% skim milk, 5% sucrose and 0.5% glycerol showed a cryoprotective effect against cell damage of Lb. plantarum during freeze drying process showing high survival rate after 150 days. This optimized CEM can be used for economical production of bacterial cells particularly originated from a plant-related ecosystem.
흡착제 생산균주를 선별하기 위하여 토양시료에서 분리한 홉착제 생산균주중 가장 뛰어난 흡착물질을 생산하는 균주, SK3l을 선별하였으며 분리균주 SK3l은 Bacilus속으로 동정되었다. Bacillus sp. SK3l에 의하여 생산된 흡착물질(생물흡착제 SK3l)은 ethanol 침전과 cetylpyridinium(CPC)침전을 통하여 정제하여 아연과 납 이온에 대한 흡착특성을 조사하였다. 생물흡착제 SK3l의 아연과 납 이온의 흡착량은 각각 52 mg/g과 112 mg/g이었다. Bacillus sp. SK3l 균주가 흡착제를 생산하기위한 flask수준에서의 배양조건들이 조사되었다. 흡착제 생산을 위한 최적 pH와 최적온도는 각각 7.5와 $30^{\circ}C$로 나타났다. 흡착제 생산시 주요한 탄소원과 질소원은 glucose와 ammonium nitrate이었다. 최적화된 배지에서의 흡착제 생산은 기초배지에서 보다 약 3배 증가하였다. Jar fermentor배양에서 배양 60시간에서 가장 많은 흡착제를 생산하였으며, 흡착제의 생산량은 9.2 g/$\ell$이었다.
수소 생산 균주 ES392sms 부산 소재 동의대학교에 위치한 연못 담수에서 분리하였다. 세포는 직경 $0.6\;{\mu}m$, 길이 $1.4\;{\mu}m$의 간균이고 편모와 포자를 형성하지 않았다. 분리된 균주의 16s rRNA 염기서열과 생화학적 특성을 바탕으로 계통학적으로 분류한 결과, ES392 균주는 Enterobacter sp.에 속하는 것으로 동정되었다. 수소생산을 위한 생육최적 pH와 온도는 각각 7.5와 $35^{\circ}C$이었다. 분리한 Enterobacter sp. ES392 균주의 수소생산을 최대화 하기 위해 배지성분을 최적화하였다. 그 결과 4%(w/v) sucrose, 0.5%(w/v) yeast extract, 50 mM potassium phosphate를 첨가한 배지 조건에서 최대수소생산량을 나타내었다. 회분식 배양 조건에서 최대 수소 생산량은 3481 mL/L이었고, 수소생산수율은 1.33mol/mol sucrose를 나타내었다.
식물조직배양기술을 이용하여 인삼 root를 생산하고자, 식물생장조절물질로 유도된 인삼 root를 사용하여 최적액체배양조건을 RSM을 이용하여 조사하였다. 최적액체배양조건을 배지의 pH, sucrose 농도, nitrogen 농도, phosphate 농도의 3 level-4factor의 fractional factorial design에 의하여 조사한 결과, 인삼 root의 생장율은 최저 1.00g에서 최고 2.33g까지 나타났다. 다중회기분석으로 구한 model식을 가지고 등고분석과 3차원분석을 수행한 후 독립변수의 최저 또는 최고수준에서 조속변수가 최대치를 나타내지 않는 배지의 pH와 sucrose농도의 변수에 대하여 model식을 편미분한 결과 인삼 root의 최적액체배양조건은 pH5.6, sucrose 3.8%, nitrogen 50mg/L, phosphate 80.7mg/L로 예측되었다. 이렇게 결정된최적조건값들을 model식에 대입하여 얻은 예상치는 2.36g 이었다.
Biosurfactant를 생산하는 미생물을 토양으로부터 분리하였다. 그 중에서 표면장력 및 계면장력 감소능에서 가장 우수한 L-417주를 순수분리하여 동정한 결과, No-Cardia속으로 판명되었다. Biosurfactant 생산을 위한 최적 배지조성은 3% n-hexadecane, 0.1% $NaNO_3$, 0.02% $K_2HPO_4$, 0.01% $KH_2PO_4$, 0.01% $MgSO_4 \;.\;7H_2O$, 0.01% $CaCl_2$ 0.02% yeast extract였으며, 최적 온도와 pH는 각각 $30^{\circ}C$와 6.0이였다. 이러한 조건에서 500ml용 shaking flask에 최적 배지 50ml를 넣어 배양했을 경우 대수증식기 말기인 4일째에 균의 증식과 유화활성이 가장 높게 나타남에 따라 Nocardia sp. L-417에 의한 bio-surfactant의 생산은 균의 생육과 밀접한 관련이 있는 것으로 판단된다. 이계면활성제는 산업적으로 널리 사용되는 bunker A, paraffin, corn oil 및 oilve oil 등에 대해서도 비교적 높은 유화활성을 나타내였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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