• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제27권1호
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• pp.47-57
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• 2000

Objective: The effects of cryopreservation with or without coculture on the in vitro development of blastomere-biopsied 8-cell mouse embryos were investigated. This experimental study was originally designed for the setup of a preclinical mouse model for the preimplantation genetic diagnosis (PGD) in human. Methods: Eight-cell embryos were obtained after in vitro fertilization (IVF) from F1 hybrid mice (C57BL(표현불가)/CBA(표현불가)). Using micromanipulation, one to four blastomeres were aspirated through a hole made in the zona pellucida by zona drilling (ZD) with acid Tyrode's solution (ATS). A slow-freezing and rapid-thawing protocol with 1.5M dimethyl sulfoxide (DMSO) and 0.1M sucrose as cryoprotectant was used for the cryopreservation of blastomere- biopsied 8-cell mouse embryos. After thawing, embryos were cultured for 110 hours in Ham's F-10 supplemented with 0.4% bovine serum albumin (BSA). In the coculture group, embryos were cultured for 110 hours on the monolayer of Vero cells in the same medium. The blastocyst formation was recorded, and the embryos developed beyond blastocyst stage were stained with 10% Giemsa to count the total number of nuclei in each embryo. Results: The survival rate of embryos after cryopreservation was significantly lower in the blastomere-biopsied (7/8, 6/8, 5/8, and 4/8 embryos) groups than in the non-biopsied, zona intact (ZI) group. Without the coculture, the blastocyst formation rate of embryos after cryopreservation was not significantly different among ZI, the zona drilling only (ZD), and the balstomere-biopsied groups, but it was significantly lower than in the non-cryopreserved control group. The mean number of cells in embryos beyond blastocyst stage was significantly higher in the control group ($50.2{\pm}14.0$) than in 6/8 ($26.5{\pm}6.2$), 5/8 ($25.0{\pm}5.5$), and 4/8 ($17.8{\pm}7.8$) groups. With the coculture using Vero cells, the blastocyst formation rate of embryos after cryopreservation was significantly lower in 5/8 and 4/8 groups, compared with the control, 7/8, and 6/8 groups. The mean number of cells in embryos beyond blastocyst stage was also significantly lower in 4/8 group ($25.9{\pm}10.2$), compared with the control ($50.2{\pm}14.0$), 7/8 ($56.0{\pm}22.2$), and 6/8 ($55.3{\pm}25.5$) groups. Conclusion: After cryopreservation, blastomere-biopsied mouse embryos have a significantly impaired developmental competence in vitro, but this detrimental effect might be prevented by the coculture with Vero cells in 8-cell mouse embryos biopsied one or two blastomeres. Biopsy of mouse embryos after ZD with ATS is a safe and highly efficient preclinical model for PGD of human embryos.

• 환경생물
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• 제38권4호
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• pp.518-527
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• 2020

본 연구에서는 신방오도료 Diuron과 Irgarol이 해양 무척추동물인 말똥성게(Hemicentrotus pulcherrimus)에게 미치는 독성영향을 10min-수정률과 64 h-정상 유생발생률의 EC₅₀, NOEC, LOEC 값을 통하여 확인하였으며, 해당 오염물질이 H. pulcherrimus의 초기발생단계에 미치는 지연효과를 확인하고자 하였다. 실험결과, Diuron과 Irgarol은 시험농도(40mg L^-1)에서 H. pulcherrimus의 수정률에 영향을 미치지 않았으며, 정상 유생발생률에 대한 EC₅₀값은 각각 7.12mg L^-1, 2.31mg L^-1로 나타났다. 또한, 수정란이 pluteus 유생으로 발달하는 과정에서 반수영향농도의 Diuron과 Irgarol의 노출 경과시간이 18 h에 도달하면, early gastrular stage로의 발달이 지연되기 시작하여, 24 h에서부터 유의미한 발달지연이 확인되었다. 이후 지속적인 발달지연이 관찰되어, Early gastrular-gastrular-early pluteus-pluteus로 이어지는 과정에서 발달지연이 나타났다. Diuron과 Irgarol은 잔류성이 높으며, 본 연구결과와 같이 무척추동물을 포함한 다양한 해양생물 군에 독성영향이 있는 것으로 알려져 있다. 이에, 해양 환경의 오염을 방지하고 보전하기 위하여, 관련된 규정의 마련을 통하여 환경보호 전략이 필요하다.

• 생명과학회지
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• 제28권7호
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• pp.811-818
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• 2018

본 연구에서는 암컷 생식기관 내 축적된 수은 화합물의 위치와 시간에 따른 수은의 농도 변화를 확인하기 위하여 수행하였다. Methylmercuric chloride를 일주일에 한 번씩 총 3주간 사춘기 암컷 마우스에 피하 주사하였다. 시간에 따른 수은의 농도 변화를 확인하기 위해 투여 종료 후 10일, 150일, 300일째에 희생하였다. 투여 종료 후 10일에 희생한 경우 체중에 유의한 차이가 있었지만, 그 외 경우에는 체중과 난소의 무게에 있어서 대조군과 수은 투여군 사이에 유의한 차이가 없었다. 축적된 수은의 위치를 오토메탈로그라피 방법으로 확인하였고, 자궁, 난소, 난자에 축적된 수은 화합물의 위치를 광학현미경으로 분석하였다. 자궁의 경우, 투여 종료 후 10일째에 수은이 지질 세포와 자궁바깥막의 중피에 위치하였다. 150일째에는 수은 농도가 감소하였으며 300일째에는 나타나지 않았다. 투여 종료 후 10일째 난소의 경우, 수은이 피질 부위의 지질 세포와, 난포를 둘러싸는 난포막 세포, 황체에 분포하였다. 150일째에는 수은이 난소의 수질 부위에 축적되었으며, 300일째에는 분포하지 않았다. 투여 종료 후 10과 150일째 난자의 경우, 수은이 난자의 주변부에 주로 분포하였으며, 300일째에는 수은 농도가 감소되고 난자 전체에 고르게 분포하였다. 이런 결과는 암컷 마우스에서 수은에 의해 호르몬 생성, 착상, 그리고 발생 중인 배아가 영향을 받을 수 있다는 사실을 제시해 준다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제28권3호
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• pp.199-207
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• 2001

Objective: The present study was undertaken to examine the effects of magnesium ion in the culture medium on the development of mouse fertilized oocytes either before or after pronuclear formation, and to investigate whether the effect of magnesium ion is related with the redistributional change of mitochondria. Methods : Fertilized oocytes obtained from the oviducts of mice at 15 hr after hCG injection before pronuclear formation (pre-PN) or 21 hr after hCG injection after pronuclear formation (post-PN) were used. The embryos were cultured for 3 days with basic T6 medium-magnesium free and various concentrations of magnesium ion, 0.0, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0 or 8.0 mM, respectively. After culture, the developmental stages of embryos and the number of nuclei were evaluated. To observe the effects of magnesium ion on the mitochondrial distribution, fertilized oocytes were collected at 21 hr after hCG injection and cultured for 6 hr with various concentration of magnesium ion. As a control, fertilized oocytes with pronuclei at 27 hr after hCG injection were used. Results: The concentration of magnesium ion to accelerate the in vitro development of mouse fertilized oocytes appeared to be at 2.0 mM for the pre-PN and the post-PN stage embryos. In the mitochondrial redistribution patterns, the embryos cultured in 2.0 mM concentration of magnesium ion showed the highest percentage (22.6%) of distinct perinuclear clustering pattern comparing to other experimental group. Conclusion: The effect of magnesium ion may be related to the cytoplasmic redistribution of mitochondria. This relationship seems to connect the developmental competence of preimplantation mouse embryos in vitro. These results can suggest that higher concentration of magnesium ion (2.0 mM) than those of conventional culture medium ($0.2{\sim}1.2\;mM$) is more suitable for in vitro culture of preimplantation mouse embryos.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제31권1호
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• pp.9-17
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• 2004

Objective: The aim of this study were to compare the effects of EG and PROH on cryopreservation of mouse and human embryos, and to find the optimal protocol for embryo freezing. Methods: Human embryos derived from fertilized eggs showing 3 pronuclei (PN) and mouse embryos were divided into two groups respectively: dehydrated with 1.5 M EG + 0.2 M sucrose or 1.5 M PROH + 0.2 M sucrose using the slow freezing method. Moreover mouse embryos were controlled the exposure time of cryoprotectant during dehydration or rehydration steps. Results: The survival rates of human embryos were 79.2% (84/106) in EG group and 77.9% (88/113) in PROH group. In mouse embryos, the survival and development rates up to blastocyst were 70.6% (245/347), 44.1% (123/279) in EG group and 62.1% (198/319), 45.1% (123/279) in PROH group, respectively. However, in EG group, partially damaged embryos after thawing were decreased compared to PROH group. In combination group, when the exposure time during dehydration and rehydration were reduced, the survival and embryonic developments were increased slightly, but not significant. Conclusion: Cryopreservation of mouse and human embryos at cleavage stage by using EG or PROH exhibited no statistical difference in the survival rate and/or developmental rate to blastocyst. However, the use of EG for cryopreservation of embryos might reduce the exposure time of the cryoprotectant because of a high permeation of EG and result in lessen its toxic effects.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제29권2호
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• pp.139-147
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• 2002

Objective : This study was to establish a reproducible differentiation system from the parthenogenetic mouse embryonic stem (P-mES02) cells into functional cardiomyocytes like as in vitro fertilization mouse embryonic stem (mES01) cells. Materials and Methods: To induce differentiation, P-mES02 cells were dissociated and aggregated in suspension culture environment for embryoid body (EB) formation. For differentiation into cardiomyocytes, day 4 EBs were treated with 0.75% dimethyl sulfoxide (DMSO) for another 4 days (4-/4+) and then were plated onto gelatin-coated dish. Cultured cells were observed daily using an inverted light microscope to determine the day of contraction onset and total duration of continuous contractile activity for each contracting focus. This frequency was compared with the results of DMSO not treated P-mES02 group (4-/4-) and mES01 groups (4-/4+ or 4-/4-). For confirm the generation of cardiomyocytes, beating cell masses were treated with trypsin-EDTA, dispersed cells were plated onto glass coverslips and incubated for 48 h. Attached cells were fixed using 4% paraformaldehyde and incubated with specific antibodies (Abs) to detect cardiomyocytes (anti-sarcomeric ? -actinin Ab, 1 : 100; anti-cardiac troponin I Ab, 1 : 2000) for 1 h. And the cells were finally treated with FITC or TRITC labelled 2nd Abs, respectively, then they were examined under fluorescence microscopy. Results: Rhythmically contracting areas in mES01 or P-mES02 cells were firstly appeared at 9 or 10 days after EBs plating, respectively. The highest cumulative frequency of beating EBs was not different in both treatment groups (mES01 and P-mES02, 4-/4+) with the results of 61.3 % at 13 days and 69.8% at 15 days, respectively. Also, the contracting duration of individual beating EBs was different from minimal 7 days to maximal 53 days. However, DMSO not treated groups (mES01 and P-mES02, 4-/4-) also had contracting characteristics although their frequency was a few compared to those of DMSO treated groups (6.0% and 4.0%). Cells recovered from the spontaneously contracting areas within EBs in both treated groups were stained positively with muscle specific anti-sarcomeric ? -actinin Ab and cardiac specific anti-cardiac troponin I Ab. Conclusion: This study demonstrated that the P-mES02 cell-derived cardiomyocytes displayed similarly structural properties to mES01 cell-derived cardiomyocytes and that the DMSO treatment enhanced the cardiomyocytes differentiation in vitro.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제29권1호
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• pp.21-28
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• 2002

Objective: To evaluate whether co-culture of oocytes on vero cell monolayers from Day 0 (Day 0 group) after egg retrieval results in an increase in developmental capacity such as fertilization rate, embryo quality, blastulation and clinical pregnancy rate compared with co-culture of oocytes from Day 1 (Day 1 group). Methods: Sperms were treated with Hams F-10 supplemented with 10% human follicular fluid (hFF). Vero cells for co-culture were prepared in TCM-199 with 10% FBS. Oocytes were co-cultured from Day 0 and fertilized oocytes were co-cultured from Day 1 on vero cell monolayers in DMEM with 10% and 20% hFF, respectively after egg retrieval. On day 1, 2 and 5, fertilization rate and grade of embryos and blastocysts were evaluated. Results (fertilization rate, cleavage rate, grade of embryos and blastocysts and pregnancy rate) were considered statistically significant when p value was less than 0.05 using t-test and $x^2$. Results: In sibling oocytes of same cycles, no differences were found in fertilization rate (94.6 vs. 91.4%), cleavage rates (94.6 vs. 91.4%), embryo grade (on day 2 and 3) and blastulation (65.6 vs. 57.0%) and their grade. In different oocytes of different cycles (patients), no differences were found in fertilization (79.8 vs. 78.3%), cleavage rates (77.7 vs. 76.4%) and blastulation (56.0 vs. 45.3%), but pregnancy rate was higher in the Day 0 group than in the Day 1 group (60.0 vs. 42.9%). Conclusions: This study revealed that the embryonic development capacities were not affected by the different co-culture time in the sibling oocytes of same cycles. Although no statistical significance, because of small size of study, there was a trend for higher pregnancy rates in Day 0 group compared to Day 1 group in different oocytes of different cycles.

• 한국에너지공학회:학술대회논문집
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• 한국태양에너지학회, 한국에너지공학회 1993년도 춘계 공동학술발표회 초록집
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• pp.90-95
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• 1993

수력, 화력, 원자력 다음으로 제 4의 전원으로서 관심의 대상이 되고 있는 연료전지는 연료가 가지고있는 화학에너지를 직접에너지로 변환시키는 점에서 종래의 발전 기술과는 원리적으로 다르며, 카르노(Carnot)사이클에 의한 에너지 변환 효율의 제한을 받지 않기 때문에 효율이 높으며 공해가 없는 특징을 가지고 있다. 연료전지의 발전 방식은 작동 온도, 전해질 등에 의해서 분류되나 현재 실용화단계의 기술은 인산형연료전지 발전이다. 인산형 연료전지의 발전용 연료는 천연가스, 메탄올, 납사 등과 같은 탄화수소 계열의 다양한 연료를 사용할 수 있으며, 이들 연료들을 수소가 많이 함유된 가스로 변환시켜 연료전지에 공급하여야 한다. 연료전지발전시스템 개발은 주로 전력이용 측면에서 천연가스를 개질연료로 사용하는 연구가 주류를 이루었으나, 최근에는 전 세계적으로 대기 공해에 시달리고 있는 도시의 환경개선을 위하여 도심용 버스 및 대형 트럭 등에 응용하기 위한 무공해 수송용 자동차엔진의 개발, 국방용 이동전원 개발 및 100㎾ 미만의 현지설치용 및 낙도용 전원으로서 메탄올을 연료로 한 연료전지의 개발이 활발히 진행되고 있다. 한국에너지기술연구소는 한국전력 기술연구원과 공동으로 1989년부터 1992년까지 본체를 제외한 5.9㎾급 인산형 연료전지 발전시스템 즉, 메탄올 연료 개질장치, 운전자동화 시스템, 배열이용 시스템, 종합 배관 등을 설계 구성하여 발전 플랜트의 운전 특성 연구를 수행하였으며, 본 고에서는 이들 설비들의 운전 특성과 발전 플랜트로서의 효율 특성에 대한 고찰을 수행하였다. 본 시스템은 연료개질기가 연결되고 배열을 이용하는 국내최초의 종합적인 연료전지 발전 시스템으로서 개질된 연료로 운전하였을 경우 본체의 효율은 31.9%, 배열을 회수한 종합발전 플랜트의 효율은 45.2%였다.로서, 흰쥐 유선이 LH의 생성처이면서 동시에 작용처이며 유선에서 합성된 GnRH의 조절하에 국부적인 인자로 작용할 가능성을 시사한다.f variation)가 10% 내외로 만족할 만한 범위에 들었다. 본 실험 방법을 타액과 혈청내 testosterone 농도 측정에 응용하여 RIA의 결과와 비교하여 본 바 상관관계가 타액에서 r=0.969, 혈청에서 r=0.990으로 두 결과가 잘 일치하였다. 본 실험에서 측정된 한국인 여성의 타액내 testosterone농도는 107.7$\pm$12.0 pmol／l이었고, 남성의 타액내 농도는 274.2$\pm$22.1 pmol／l이었다. 이상의 결과로 보아 본 연구에서 정립된 EIA 방법은 RIA를 대신하여 소규모의 실험실에서도 활용할 수 있을 것으로 사려된다.또한 상실기 이후 배아에서 합성되며, 발생시기에 따라 그 영향이 다르고 팽창과 부화에 관여하는 것으로 사료된다. 더욱이, 조선의 ${\ulcorner}$구성교육${\lrcorner}$이 조선총독부의 관리하에서 실행되었다는 것을, 당시의 사범학교를 중심으로 한 교육조직을 기술한 문헌에 의해 규명시켰다.nd of letter design which represents -natural objects and was popular at the time of Yukjo Dynasty, and there are some documents of that period left both in Japan and Korea. "Hyojedo" in Korea is supposed to have been influenced by the letter design. Asite- is also considered to have been "Jap

• 한국가금학회지
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• 제41권2호
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• pp.87-92
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• 2014

The avian embryos have been used as a good model to study embryonic development. Due to its unique development in the eggshell, avian embryos can be cultured and hatch in the surrogate eggshell system. In this study, we examined the viability, normal development and hatchability of Korean Oge (KO) chicken embryos in White Leghorn (WL) surrogate eggshells. Donor KO embryos at 3-day and 4-day-old were transferred into recipient WL eggshells, incubated for further 18 days at $37.5^{\circ}C$ with 70% of humidity until hatching. The viability of 3-day-old KO embryos at 7, 14 and 21 day in surrogate eggshell were 70.0%, 43.8% and 23.1%, respectively. In contrast, the viability of 4-day-old KO embryos at 7, 14 and 21 day in surrogate eggshells were 87.1%, 55.6% and 36.0%, respectively. The hatchability of KO embryos transferred into surrogate eggshells at 3-day-old was 23.1%, whereas embryos transferred at 4-day-old was 36.0%. Furthermore, the development of all viable embryos from 3-day group and 4-day group were normal. Our results suggested that culture of KO embryos in WL surrogate eggshells is highly possible, and transfer of donor embryos at 4-day-old may yield higher percentage of hatchability. This study may provide potential knowledge for the conservation of wild and endangered birds through surrogate system.

• 한국감성과학회:학술대회논문집
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• 한국감성과학회 1998년도 추계학술발표 논문집
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• pp.158-162
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• 1998

향에 의해 유발되는 감성에 대한 중추신경계 및 자율신경계의 반응의 변화를 측정하기 위해 안정시키는 향과 각성시키는 향을 사용하여 주관적 평가와 동시에 시행하였다. 안정시키는 향으로 1% Lavendar 향을 사용하였고, 각성시키는 향으로 0.8% Jasmin 향을 사용하였으며, 안정상태를 향자극 전후에 측정하여 대조군으로 사용하였다. 중추신경계의 지표로 뇌파측정을 하였고 뇌파의 전극은 international 10-20 system에서 4 채널을 사용하였으며, 자율신경계의 지표로는 심전도, heart rate, 피부저항, 피부온도를 기록하였다. 뇌파의 분석은 Fast Fourier Transform analysis의 power spectra로 하였고, 그 frequency bands는 theta(4-8Hz), alpha(8-l3Hz), beta(14-30Hz)로 하였다 또한 심전도를 이용하여 심전도 상의 연속적인 R-R peak간 시간간격을 시계열 데이터로 재구성한 Heart rate variability 분석도 하였다. HRV 분석을 보다 정확히 할 수 있도록 호흡이 심전도에 미치는 영향을 제거하기 위하여 호흡을 분당 20회로 일정하게 하였다 생체신호 측정과 동시에 실시한 주관적 검사에서 lavendar 향은 친숙하게, jasmin 향은 활기차고 상쾌하고 유쾌하게 평가되었다. 뇌파 분석에서 lavendar 향을 주었을 때 theta의 증가 양상을 보였으며, Jasmin 향을 주었을 때는 모든 채널에서 beta 파의 증가 양상을 보였다. 또한 HRV 분석 결과 부교삼신경의 활동성이 부각되는 HF/LF의 값이 lavendar에서는 대조 자극보다 높게 나타났으며, jasmin에서는 대조자극보다 낮은 값이 나타나는 경향을 보였다. 결론적으로 안정과 각성의 후각 자극으로 인한 감성의 변화를 뇌파와 자율신경계 등의 생체지표로 관찰할 수 있었다.정하는 감성요인의 차이를 알 수 있었으며 또한 essential oil에서는 성별 차이가 없는데 반해 페르몬 향의 경우 성별의 차이를 나타내었다.. 방법을 타액과 혈청내 testosterone 농도 측정에 응용하여 RIA의 결과와 비교하여 본 바 상관관계가 타액에서 r=0.969, 혈청에서 r=0.990으로 두 결과가 잘 일치하였다. 본 실험에서 측정된 한국인 여성의 타액내 testosterone농도는 107.7$\pm$12.0 pmol／l이었고, 남성의 타액내 농도는 274.2$\pm$22.1 pmol／l이었다. 이상의 결과로 보아 본 연구에서 정립된 EIA 방법은 RIA를 대신하여 소규모의 실험실에서도 활용할 수 있을 것으로 사려된다.또한 상실기 이후 배아에서 합성되며, 발생시기에 따라 그 영향이 다르고 팽창과 부화에 관여하는 것으로 사료된다. 더욱이, 조선의 ${\ulcorner}$구성교육${\lrcorner}$이 조선총독부의 관리하에서 실행되었다는 것을, 당시의 사범학교를 중심으로 한 교육조직을 기술한 문헌에 의해 규명시켰다.nd of letter design which represents -natural objects and was popular at the time of Yukjo Dynasty, and there are some documents of that period left both in Japan and Korea. "Hyojedo" in Korea is supposed to have been influenced by the letter design. Asite- is also considered to have been "Japanese Letter Jobcheso." Therefore, the purpose of this study is to loo