토끼 바이러스성 출혈증의 원인체를 실험 토끼에 접종하여 증식을 유도하고 간장에서 hematoxylin & eosin 염 색 에서 조직학적 진단과 세포내 viral RNA의 소재를 결정하기 위해 post-unicryl 포매한 block의 절편을 사용하여 단 염색과 전자현미경적 in situ hybridization을 시도하였다. 토끼 출혈증 viral RNA의 보합 결합에 이용하는 probe는 4717에서 4800(84bases)까지 oligonucleotide를 5'말단에 biotin-CE phosphoramidite로 표지하여 사용하였다. 보합결합물의 증명은 신호 표지로서 antibiotin antibody-l0nm gold를 사용하였으며, hybridization이나 증명은 기존 protocol에서 약간의 변법을 사용하였다. 0.02% glutaraldehyde에서 고정하고 unicryl resin 포매한 표본, biotinylated oligonucleotide probe, antibiotin antibody-l0nm gold로 실험한 결과 증강된 신호를 얻을 수 있었다. 특히 전처리를 생략하므로써 실험 과정을 간단하게 하여 신속한 결과를 얻을 수가 있었다. 전자현미경 in situ hybridization을 통하여 토끼 출혈증 바이러스의 주요 표적은 간세포로 감염 세포의 세포질 내 미토콘드리아와 핵 사이에서 immune gold입자가 뚜렷하게 표지 됨으로서 viral RNA를 증명할 수 있었다.
Human cytomegalovirus (HCMV) replication and $Ca^{2+}$ response in human cell lines of neuronal origin were investigated. SK-N-SH (neuroblastoma cells) and A172 cells (glioblastoma cells) were used. SK-N-SH cells were permissive for HCMV multiplication with a delay of one day compared to virus multiplication in human embryo lung (HEL) cells. The delay of HCMV multiplication in SK-N-SH cells appeared to be correlated with a delay in the $Ca^{2+}$ response. The cytoplasmic free $Ca^{2+}$ concentration ($[Ca^{2+}]_i$) began to increase at 12 h p.i. in HCMV-infected SK-N-SH cells, while $[Ca^{2+}]_i$ increase in HCMV-infected HEL cells was observed as early as 3 h p.i. On the whole, the level of the increase in $[Ca^{2+}]_i$ in SK-N-SH cells was about 30% of that in HEL cells. On the other hand, in A172 cells infected with HCMV, neither production of infectious virus nor detectable increase in $[Ca^{2+}]_i$ was observed. Treatment with TPA of HCMV-infected SK-N-SH cells resulted in $[Ca^{2+}]_i$ increase at 6 h p.i. The stimulatory effect of TPA on HCMV- induced $[Ca^{2+}]_i$ increase continued until 12 h p.i., but TPA failed to stimulate the $Ca^{2+}$ response in SK-N-SH cells at 24 h p.i., suggesting that the effect of TPA had disappeared in SK-N-SH cells at that time point. In conclusion, SK-N-SH cells are permissive for HCMV replication and the delay in $Ca^{2+}$ response may be a consequence of the lower responsiveness of SK-N-SH cells than HEL cells to HCMV infection.
Fetal bovine serum (FBS) is essential for cell culture and is used in the determination of infectivity titer and propagation of viruses. To clarify the effects of FBS on the propagation of viral haemorrhagic septicaemia virus (VHSV), which is a causative agent of mass mortalities of olive flounder Paralichthys olivaceus in Korea, VHSV was inoculated into an EPC (epithelioma papulosum cyprinid) cell line supplemented with MEMs (minimal essential medium) with FBS concentrations of 0%, 2%, 5%, and 10% (MEM0, MEM2, MEM5, and MEM10), respectively, and infectivity titers were compared. Cytopathic effects were observed in all experimental groups at 2 days post virus inoculation (dpi) and all cells were detached from cell culture flasks at 7 dpi. Infectivity titers increased to 3 dpi, persisted to 7 dpi, and decreased when cells were detached. The titer of VHSV in EPC cells in MEM0 was the lowest while those in the other experimental groups showed similar levels. In conclusion, 2% (v/v) of FBS was sufficient to propagate VHSV in EPC cells and the withdrawal of VHSV from cell culture flasks should be performed before cell detachment.
콩모자이크 바이러스(SMV)에 의한 갈반립의 형성율과 SMV의 종자전염율을 조사하기 위하여 대두품종 Clark, Woodworth, 북해1호를 재료로 SMV 이병정도와 갈반립율 결협절위 및 갈반립형성등의 관계를 조사하고 그 갈반립을 통한 SMV의 종자전염율을 면역이중확산법과 유묘감염률로 조사하였다. 1. 갈반립의 형성율은 식물체의 이병정도와 정비례적인 상관(r=0.796)을 보였다. 2. 이병식물체의 갈반립형성은 결협절립 및 협중종실위치와 유의상관이 없었으며 (r=0.34), 동일절위 및 협내에서도 갈반립과 비갈반립이 함께 형성되었다. 3. 면역이중확산법으로 조사한 SMV의 종자전염율은 4.2 -33.3%로 비교적 낮았으며 품종에 따라 현저한 차이가 있었다. 4. 유묘에 나타난 SMV 증상으로 조사한 종자전염율은 면역이중확산법으로 검정한 종자감염율보다 약관 높게 나타났으며 이는 항혈청의 역가 또는 Virus의 체내증식과 관계가 있는 것으로 보였다. 5. 이병직물의 갈반립은 SMV 종자전염율과 일치하지는 않으나 SMV의 포장이병율 추정에 유용한 지표가 될 수 있으며 파종시 갈반립의 제거는 SMV 전염원의 감소효과를 가져올 수 있을 것으로 보였다.
단백질 티로신 kinase인 PTK6는 대부분의 유방암에서 과발현되며, 암세포의 증식만을 촉진하는데 역할을 한다. 이 연구에서 PTK6의 활성도메인을 초파리의 peptidoglycan recognition protein (PGRP) -LB 단백질을 퓨전파트너로 사용하여 바큘로바이러스 시스템을에서 과발현하는데 성공하였다. 우리는 PGRP-LB가 바큘로바이러스 시스템에서 잠재적으로 퓨전 단백질로 사용될 수 있는 가능성을 처음으로 발견하였다. 정제된 PTK6단백질은 기존의 박테리아에서 발현된 단백질보다 1.5배 높은 활성을 지녔다. 이 단백질은 PTK6의 분자기전 및 그것의 저해제 개발에 필수적인 결정 구조를 규명하는데 사용될 것이다.
서울 경마장(競馬場)의 경주마(競走馬) 517두를 대상으로 호흡기병상(呼吸器症狀)을 관찰하여 1978년 12월 중순(中旬)부터 1979년 1월 초순(初旬) 까지 42.9%의 호흡기병상발생률(呼吸器症狀發生率)을 보았고 1979년 1월 하순(下旬)부터 5월 중순(中旬)까지 임신마(姙娠馬)의 60%가 사산(死産)을 일으켰다. 사산(死産)된 태자(胎仔)는 육안적(肉眼的)으로 흉강수액(胸腔水液)의 저류, 각 장기(臟器)의 울혈성수종(鬱血性水種), 출혈성병변(出血性病變)과 간장(肝臟)의 소상괴사(巢狀壞死)를 나타내었고, 조직학적(組織學的)으로는 간장(肝臟)의 한국성괴사소(限局性壞死巢), 비장(脾臟), 임파절(淋巴節), 흉선(胸線)과 Peyer판(板)에서의 세강(細網) 세포(細胞)의 증식성(增殖性), 괴사성변화(壞死性變化)와 임파양세포(淋巴樣細胞)의 붕괴(崩壞)를 시현(示顯)하였다. 여기서 간세포(肝細胞), 담관상피세포(膽管上皮細胞), 소기관지상피세포(小氣管支上皮細胞) 및 비장(脾臟), 임파절(淋巴節), 흉선(胸線)의 세강(細網) 세포(細胞)에서 Cowdry type A 봉입체(封入體)를 확인하였다. 이상의 역학적(疫學的) 및 병리학적(病理學的) 소견(所見)에 의하여 본(本) 마유산증(馬流産症)을 말 바이러스성 비폐염(鼻肺炎)이라고 진단(診斷)할 수 있었으며 본(本) 발병예(發病例)가 한국(韓國)에서 초발생(初發生)인 것으로 추정(推定)되었다.
난 시장이 확대되고 있지만 일반대중이 선호하고 있는 동양계 심비디움 난은 대부분 수입 또는 산채에 의존하여 고가로 판매되고 있고, 서양계 심비디움은 외국 품종에 대한 로열티 지불 등의 문제가 대두되고 있다. 본 연구에서는 관상가치가 있고 대량증식이 가능하여 외국산 품종을 대체할 수 있는 소형 심비디움 난을 육성하고자 하였다. 동양계 및 서양계 심 비디움의 교배종인 "동양"의 바이러스 무병주를 생장점배양에 의해 기내에서 대량증식을 하던 중, 잎무늬 돌연변이 식물체를 선발하여 고정계통을 "대국"이라 명명하였다. "대국"은 잎의 가장자리에 백색이나 노란색 줄무늬가 있는 복륜 무늬종으로 광택이 있다. "대국"의 잎 길이는 약 40 cm, 엽폭은 1.6 cm, 엽수는 4~5장으로 동양에 비교하여 잎 및 초세가 작고 단아하다. 꽃에도 복륜무늬가 있으며 개화시기는 3~5월과 9~10월 연 2회이다. 신품종 "대국"은 잎무늬 줄무늬와 초세가 단정하여 분화용 엽예품으로 관상가치가 뛰어나며, 기존 동양계 심비디움 품종에 비교하여 조직배양 및 순화가 잘되고 생육이 왕성하여 값싸게 공급 가능한 품종이다.(품종특허 등록번호: 특허 제 0478734).
용담에서 전형적인 모자이크 증상을 나타낸 바이러스 이병주 및 황화증상을 보이는 식물체를 채집하였다. 이들 중, 모자이크 증상의 잎을 접종하여 전신감염된 Nicotiana benthamiana로부터의 접종원을 동부의 초생엽에 접종하였을 때, 2가지 형태의 괴사 국부병반이 형성되었다. 즉 하나는 작은 크기 pinpoint 형태의 국부 괴사병반(SNS)이며, 다른 하나는 SNS보다 약간 큰 halo 형의 국부 괴사 병반(LNS)으로 뚜렷하게 구분되었다. 한편 황화 병징의 용담으로부터 증식된 접종원은 동부의 초생엽에 LNS만 형성하였다. 동부에 형성된 SNS 및 LNS형 병반을 각각 단일병반 분리하여 N. bentamiana에 접종하였다. 그 결과 SNS를 접종한 N. bentamiana에서는 접종엽에 무병징, 상위엽에는 전형적인 모자이크 증상이 발현되었다. 반면 LNS를 접종한 식물체에서는 접종엽에 퇴록 윤문이 형성되었으며, 상위엽에는 괴저를 동반한 모자이크 증상이 발현되었다. 이들 SNS 및 LNS 병반으로부터 분리한 바이러스를 dsRNA, RT-PCR 및 혈청학적 유연관계 분석을 통하여 SNS 병반은 CMV에 의해서, LNS는 BBWV2에 의해서 유도된다는 것을 확인하였다. 이 연구의 결과로부터 자연계에서 CMV와 BBWV2가 복합감염되어 병징의 구분이 어려운 경우, 동부에 접종하여 유도된 병반을 이용하여 두 바이러스의 감염을 쉽게 구분할 수 있는 방법으로 활용할 수 있을 것으로 생각되었다.
Focal epithelial hyperplasia(FEH)는 구강편평상피의 국소적인 증식으로 사람유두종바이러스(Human papilloma virus)에 의해 유발되는 것으로 알려져 있다. 보통 어린 나이에 호발하며 종종 젊은 성인에서 발생하기도 한다. 협,순측 및 설측 점막에 호발하지만 치은이나 혀의 병소(lesions of tongue)도 보고된 바 있다. 이 병소는 전형적으로 다발성인 부드럽고 촉진 시 압통이 없는 편평한 구진이나 반의 형태를 갖는다. 종종 유두상의 표면을 보이기도 한다. 각각의 병소는 비교적 작고 분리되어 있으며 잘 경계지어진다. FEH의 조직학적 특징은 구강 상피의 유극세포증(acanthosis)이다. 그 밖에 바이러스에 의한 세포병리학적 변화를 나타내는 구멍세포(koilocyte)나 유사분열상 세포(mitosoid cell)가 관찰되기도 한다. 본 증례의 5세 여자환아는 치은의 돌기성 병소를 주소로 연세대학교 치과대학병원 소아치과에 내원하였다. 임상구강검사 결과 무경형의 유두상 구진(sessile papillary papules)이 상악 좌우측 제 2 유구치 협측 치은에서 관찰되었다. 촉진 시 동통은 없었다. 조직학적 검사를 위해 조직생검을 시행하였으며, 유극세포증이 관찰되었다. 이에 FEH로 진단되어 보고하는 바이다. FEH는 몇 달이나 몇 년 이내에 자발적으로 소멸하므로 일반적으로 치료는 불필요하다. 다만 진단적인 이유나 심미적인 이유로 보존적인 절제술을 시행하기도 한다. 이러한 치료 후 재발의 위험은 최소한이며, 악성 전이 가능성 역시 거의 없다.
본 연구에서는 잣피 20% 주정 추출물을 첨가한 식이로 하여 바이러스에 감염되어 면역력이 결핍된 마우스에서 면역조절 효과를 확인하고자 T, B 세포의 증식능, Th1 type cytokine과 Th2 type cytokine, NK cell activity, phagocytic activity를 확인하였다. 바이러스로 인하여 AIDS와 유사하게 면역 결핍된 마우스 모델에서 cytokine의 불균형과 T 세포와 B 세포의 proliferation이 균형적으로 회복됨을 확인하였고 바이러스로 인해 자연살해세포와 대식세포의 활성능이 감소하였지만 잣피 20% 주정 추출물의 공급 시 활성능 회복에 도움을 주는 것을 확인하였다. 따라서 잣피 20% 주정 추출물은 LP-BM5 virus로 유도한 면역 결핍 마우스 모델에서 면역조절작용에 효능이 있음을 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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