• The Korean Journal of Zoology
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• v.30 no.1
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• pp.89-98
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• 1987

The research of fused oocytes was conducted to investigate the in vitro mejotic maturation of immature oocytes (GV oocytes) fused with oocytes in germinal vesicle breakdown (GVBD oocytes) in the presence of dbcAMP which is known as one of the strong inhibitors to GVBD. The immature oocytes fused together as well as those fused with GVBD oocytes proceeded to GVBD in 3 hr culture in plain medium. But in the medium containing dbcAMP (100$\mu$g/ml), the immature oocytes fused together did not show any GVBD and thus the fusion itself could not affect the inhibitory activity of dbcAMP. However, all of the immature oocytes fused with GVBD oocytes underwent GVBD in 3 hr culture despite of the presence of dbcAMP. When the culture was extended to 20 hr, nearly all of the immature oocytes fused together were still arrested at the GV stage in the presence of dbcAMP. But most of the fused oocytes which had shown GVBD during 3 hr culture developed to metaphase II stage extruding one or two polar bodies regardless of the presence of dbcAMP. In this experiment, it was found that two sets of the metaphase chromosomes were somewhat concomitant with a pair of the polar bodies in the fused egg. Upon the results of the present studies, it is assumed that there may be a maturation promoting factor(s) in the cytoplasm of the GVBD occytes, and this factor(s) possibly nullifies the function of dbcAMP.

• The Korean Journal of Zoology
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• v.10 no.1
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• pp.1-9
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• 1967

본 실험은 4 일간의 성주기가 뚜렷한 성체인 golden hamster로부터 미성숙인 난자를 적출하여 화학적배양액내에서 그의 성숙을 유도시키고 성주기에 따른 미성숙 난자의 성렬율을 관찰하는 것을 주요 목적으로 하여 행하여졌다. 한 개의 난소로부터 5-6개의 미성숙 난자를 적출하여 5% bovine serum albumin이 섞인 TC Medium 199에 넣어서$CO_2$-incubator를 이용하여 6 시간내지 24시간 동안 37$^{\circ}C$를 유지해가며, 배양액이 직접 공기와접촉하는 것을 막기 위해 유동성인 paraffin oil로 배양액을 덮고서 배양을 완수했다. 실험의 결과를 다음과 같이 완수했다. 1. Hamster의 난자의 성숙분렬을 유발시키는데 가장 적합한 배양액은 BMOC, Eagle's Medium , Waymouth's Medium 그리고 TC Medium 199의 네가지 가운데 TC Medium199이었다. 즉 이 배양액을 이용했을 때 난자가 높은 성렬도를 보여주었다. 2. 5% bovine serum alumn을 TC Medium 199에 섞어주었을 때 미성숙 난자가 성순분렬을 유기하는 율이 가장 높았다. 3. 발정기에 있는 난소로부터 얻은 난자가 가장 현저하게 높은 율로 성숙분렬을 보여주었다. 반대로 발정후기의 난자는 배양 시작 후 단시간 내에 대부분이 퇴화하였으며 발정기에 가까워 갈수록 퇴화율이 줄어들었다. 이것은 노포가 성숙분렬을 억제하는 물질을 생성하리라고 여겨지고 있긴 \ulcorner만, 동시에 이 노포는 또 한편 난자의 배란뒤에까지도 생명력을 유지할수 있는 능력을 발정기에 이르기까지의 기간동안 난자에게 부여하며, 난자는 이 능력을 배란전까지 축적하게 되며 이 때문에 노포로부터 유리되어 나온 난자가 장기간 그 생명력을 유지해나가는 것이라고 추정된다. 4. Paraffin oil 로 공기를 차단하여서 배양한 난자나 혹은 watch glass를 이용하여 공기와 접촉시킨 난자에서나 모든 비슷한 율로 성숙분렬을 보여주었다. 이로 보아 조작이 까다로운 paraffin oil을 이용하는 방법보다는 손쉽게 배양할 수 있는 watch glass 의 방법이 오히려 유용하다고 할 수 있다.

• Korean Journal of Animal Reproduction
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• v.22 no.3
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• pp.207-211
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• 1998

본 연구는 소 미성숙 난자의 동결에 있어서 미성숙 난자의 1, 2, 4, 8 시간 성숙배양한 다음 동결 융해 후 체외배양하였을 때 체외수정율과 생존율을 조사하고저 수행하였다. 미성숙 난자들 1∼8시간 성숙배양후 동결융해 및 체외수정시켰을 때 수정율은 12.8∼30.9%로서 단시간의 체외성숙 배양이 높게 나타났으며(23.8∼28.8%), 또한 체외배양시 생존율은 11.8∼29.9%를 나타냈다.

• Journal of Embryo Transfer
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• v.20 no.1
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• pp.63-69
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• 2005

This study were carried out to evaluate the possibility of nuclear progression of canine immature oocytes, of which was cultured in a reproductive tract, such as oviduct, ovarian bursa and uterus of estrus bitch for 4, 5 and 6 days following immediately collection. Cumulus intact oocytes(COC) fore collected from domestic dog following ovariohysterectomy at local veterinary clinics. In Exp. 1, COCs $of>110\;{\mu}m$ diameter were selected and cultured in vitro at $39^{\circ}C$, $5\%\;CO\_{2} $ in air atmosphere. The nuclear progression of canine oocytes checked at 24, 48 or 72 h after in vitro maturation. There was not increased the nuclear progression to the M II stage depending on culture periods at 24, 48 and 72h $(1.3\%,\;3.7\%\;and\;4.7\%)$. In Exp. 2, to evaluate of nuclear progression of immature oocytes, collected or in vitro cultured oocytes were transfer into a canine reproductive tract (oviduct, ovarian bursa and uterus). The recovery rates of canine oocytes from a reproductive tract after 4 days $(33.7\%)$ in vivo culture were significantly higher than those 5 $(17.7\%)$ 6 day $(3.4\%)$ (P<0.05). The survival rates of collected oocytes after 4 days $(60.0\%)$ were also significantly higher than those of 5 days $(30.2\%)$ and 6 days $(38.9\%)$ (P<0.05). The meiotic resumption rates of canine oocytes were not significantly difference among the culture periods at 4 days $(5.9\%)$, 5 days $(0.0\%)$ and 6 days $(0.0\%)$. These results show that the nuclear progression of canine immature oocytes from in in vivo culture was not affect the nuclear resumption of oocytes.

• Proceedings of the KSAR Conference
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• 2004.06a
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• pp.253-253
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• 2004

본 연구는 소를 이용한 체세포 핵이식에 있어서 탈핵전 demecolcine 처리 및 난자의 세포주기가 재구축배의 생산 및 발육에 미치는 영향을 검토하기 위하여 실시하였다. 도축장에서 회수한 난소로부터 채취한 미성숙란을 각 실험에 따라 성숙배양한 후 실험에 이용하였다. 난구세포 제거 후 일부 난자를 0.4 ㎍/㎖의 demecolcine이 함유된 배양액으로 40분간 처리하여 핵이식에 이용하였으며, 극체 미방출란 및 MI기 난자에 demecolcine을 처리하여 미성숙난자의 핵이식 이용 가능성을 검토하였다. (중략)

• The Korean Journal of Zoology
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• v.35 no.1
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• pp.37-44
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• 1992

북방산개구리, 참개구리 및 옴개구리를 사용하여 성숙된 난자의 세포질에서 활성을 띠는 성숙촉진요인( maturation promoting factor, MPF)을 미세주입 법으로 확인하고 이들의 성질을 조사하였다. 핵붕괴(germinal vesicle breakdown, GVBD)된 난자의 세포질을 미성숙 난자(GV난자)에 주입하고(75-100 nl) 이들을 15-24시간 배양했을 때 대부분의 GV 난자들이 핵붕괴를 일으켰으나(약 80%) 미성숙 난자(GV 난자)의 세포질을 주입했을 때에는 약 200nl의 난자들만이 핵붕괴를 일으켰다. 핵붕괴된 난자들의 crude extract를 주입했을 때에도 역시 성숙유도 효과가 있었으며 이종간에도 효과가 있었다. 난자의 성숙을 잘 일으키지 않는 옴개구리의 난자를 사용하여 MPF를 가진 세포질을 계대주입(serial transfer)하였을 때에도 MPF가 계속 활성을 띠는 것을 확인할 수 있었다. 아울러 개구리 난자의 MPF생성과 증폭과정에 CAMP의 증가나 단백질 합성의 저해가 미치는 영향을 조사한 결과. MPF의 작용이 유의하게 이들에 의해 억제되는 것을 알 수 있었다.

• Proceedings of the Korean Society of Developmental Biology Conference
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• 2005.10a
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• pp.139-140
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• 2005

• Proceedings of the Korean Society of Embryo Transfer Conference
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• 2005.10a
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• pp.139-140
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• 2005

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• v.32 no.1
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• pp.65-70
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• 2005

본 연구는 이식 후 남은 잉여의 포배기 배아를 두 번의 냉동과 융해 과정을 반복적으로 실시한 후 이식한 결과에 관한 보고이다. 사람 포배기 배아의 동결보존에서 높은 생존율과 성공적인 임신율이 보고되고 있으나 미성숙 난자로부터 발달한 포배기 배아에 두 번의 초급속 냉동 방법을 실시한 후 이식한 보고는 되어 있지 않다. 이에 본 연구에서는 다낭성 난소 증후군 환자에게서 얻은 미성숙 난자로부터 발달한 포배기 배아를 artificial shrinkage 후 초급속 냉동함으로써 생존율을 높이는 방법을 이용하여 재냉동 이식하였을 때 임신에 성공한 증례를 보고하고자 한다. 29세의 환자로부터 채취한 55개의 미성숙 난자들(germinal vesicle stage oocytes)을 체외배양 하여 성숙한 37개의 난자들로부터 30개의 수정란을 얻을 수 있었다. 12개의 배아가 포배기 배아까지 발달하였으며 이 중 3개의 양질의 포배기 배아를 선별하여 이식하였고, 이식을 한 후에 남은 9개의 포배기 배아들은 artificial shrinkage의 과정을 마친 후에 초급속 냉동 방법을 이용하여 동결보존 하였다. 그 중, 4개의 포배기 배아들을 융해한 후 이식을 하지 않고 다시 재냉동을 하여 보관하였고 이 후 재냉동 되었던 4개의 포배기 배아들을 다시 융해 하여 이식을 한 결과 임신이 되어 건강한 남아를 분만하였다. 이로써 미성숙 난자로부터 얻은 포배기 배아가 두 번의 냉동과 융해의 과정을 통해 크게 손상을 입지 않고 생존할 수 있다는 것을 알 수 있었다. 그러므로 융해이식 후 남은 잉여의 포배기 배아를 다시 냉동 보관하여 다음 주기에 이용함으로써 축적된 임신율을 증가시킬 수 있을 것으로 사료된다.

• Journal of the Korea Academia-Industrial cooperation Society
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• v.10 no.6
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• pp.1407-1413
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• 2009

The present study was conducted to gain insights into oocyte maturation and early embryo development, SELDI-TOF-MS was used to find the protein candidates that are specifically or prominently expressed in mouse oocytes at the in vitro matured metaphase II (MIl) and germinal vesicle (GV) stages. By using selected CM10 chip, found 16 candidates which were up-regulated in GV stage oocytes compared with in MIl stage oocytes, molecular weight are 8180 (2 candidates), 10226 (5 candidates), 15767 (5 candidates) and 16770 (4 candidates) Da respectively. And 29 candidates were higher in MIl than in GV stage oocytes, molecular weight are 10832 (3 candidates), 17744(8 candidates), 20122 (3 candidates), 22131 (3 candidates), 24857 (7 candidates) and 33507 (5 candidates) Da, respectively. All (45) candidate (0.2 and 1.0 % error tolerances) were performed real time RT-PCR analysis and further selected 13 more potential candidates.