이 논문은 Callyspongia elegans에서 서식하는 세균군집에 관한 내용이다. 해양세균은 marine agar를 사용하여 해면동물 C. elelgans에서 분리하였다. 그 결과 112균주를 분리하였으며, 본 연구에 사용하였다. 현미경 및 그람 염색을 통해 형태학적 표현형질을 측정하였다. 분리균주의 집락 색소는 노란색, 갈색, 아이보리색, 흰색으로 나타났다. 그람염색 결과 37균주는 그람양성균이였으며, 75균주는 그람 음성균이었다. 균주의 형태는 분리균주 중 79균주는 구균형태로 관찰되었고, 16균주는 간균이었다. 16S rDNA 유전자 염기서열 분석을 통해 분리균주들의 계통학적 특성을 파악하였다. 그 결과, 분리된 112균주는 5개의 주요 계통군이 확인되었으며, Alphaproteobacteria는 39%, Gammaproteobacteria는 22%, Acinobacteria는 14%, Firmicutes는 9%, Bacteroidetes는 6%에 속하는 것으로 나타났다. 그리고 16S rDNA 유전자 염기서열을 통해 계통분석 결과 15균주가 새로운 속 또는 종으로 분류될 가능성을 나타났으며, 앞으로 추가적인 실험이 필요한 실정이다.
Bacillu! thuringiensis var. krustaki 3ab k-3의 감온성치사돌연변이체에 대한 생물학적 성상의 변이성의 차이를 조사하고 유전적 특성을 규명하기 위하여 생화학적 성상검사, 항생제에 대한 감수성 조사, 용혈성 검사, 돌연변이체균주의 특수배지에서의 성장비교, Mouse에 대한 치사효과를 $28^{\circ}C$의 허용온도에서 조사하였다. Urease를 생산하지 못하는 돌연변이체는 ts-U154, ts-U601, ts-U602, ts-U603, ts-U604, t-U788 이었다. ts-U603만이 운동성이 상실되었고, ts-U154는 Salicin과 cellobiose을 분해하지 못했고, ribose를 분해하지 않는 균주는 ts-U603였다. 항생제에 대한 반응은 ampicillin, cephalothin, penicillin에는 모두 저항성을 나타냈으나, ts-U154 균주만이 감수성을 나타냈다. Fructus gardenia배지에서 색소를 생산하지 않은 것은 ts-U21, ts-U74, ts-U131과 ts-U154였다 가장 적은 용혈성을 나타내는 균주는 정상형고 ts-U602였고 가장 많은 용혈성을 나타내는 것은 ts-U603 (1:512 x) 이었다. Mouse 에 대한 치사효과는 전혀 없었다.
PHB 생산을 위하여 메탄올을 기질로 한 선별배지에서 토양, 하천수, 퇴비 등으로부터 분홍색 색소를 가지는 PHB 축적 facultative methylotroph를 분리하여, 균주의 특성을 검토하였다. 분리균주의 최적 생육조건과 PHB 축적을 위한 배양조건을 조사한 결과 균체의 생육은 메탄올 농도 1.0(v/v), 질소원인$ NH_4C$ 농도 1.0g/l, 즉 C/N ratio 13.2 일때 그리고 pH 7.0과'$30^{\circ}C$에서 가장 좋았으며, PHB는 C/N ratio가 50.8, 즉 메탄올 농도 1.0(v/v )$NH_4CL$ 0.26g/l 일때, 그리고 pH 6.0일 때 건조중량의 약 40까지 축적되었다. 고농도 메탄올에 의한 생육저해를 극복하기 위하여 기질을 간헐적으로 계속 공급해주는 fed-batch 배양을 시도한 결과 균체량은 14g/l, PHB 축척량은 5.5g/l까지 증가시킬 수 있었다. 생산된 PHB를 분리.정제하여 IR과 $^I H-NMR$로 구조를 분석한 결과 3-hydroxybutyric acid 의 homopolymer임이 확인되었다. 또한 균주의 pink-pigment를 추출하여 absorption spectrum를 조사하여 그 특성을 규명하였다.
향신료에 오염된 미생물의 효과적인 살균 방법 개발을 목적으로 고추 및 후추가루를 시료로 하여 현행 방법인 ethylene oxide 훈증 처리와 감마선 조사에 따른 미생물의 살균 효과 및 이화학적 품질에 미치는 영향을 비교 검토하였다. 시료에 오염된 일반 세균, 내열성 포자균, 산저항성 세균, 곰팡이 및 내삼투압성 곰팡이와 대장균군은 7-10 kGy 의 감마선 조사로서 사멸이 가능하였으나 훈증 처리구는 살균 효과가 다소 불충분하였다. 살균 처리는 시료의 이화학적 특성 즉, 향신성분, 색소, 정유 성분, 색도 등에 어느 정도 변화를 초래하였지만 훈증 처리는 감균 및 살균선량의 감마선 조사보다 영향이 큰 것으로 확인되었다.
충남 대둔산의 토양으로부터 분리한 점액세균을 ARJ라 명명하고 그 특성을 알아보았다. CT 배지에서 swarming을 하며 성장한 이 균주는 slime을 형성하였고, 액체 및 고체배지 상에서 황록색의 색소를 방출하였으며 swarming 부분을 파장이 366 nm인 자외선으로 조사하였을 때 초록색의 형광을 띄었다. 또한 이 균주는 영양분이 고갈되었을 때 fruiting body를 형성하는 것으로 보아 Myxobacteria라고 생각되었으며 주사전자 현미경 관찰 결과 이 균주가 형성한 fruiting body는 stalk이 없었고 naked myxospore를 가지고 있었다. Myxobacteria의 분류에 있어서 가장 중요한 이러한 형태학적 특성들로 볼때 이 균주는 Myxococcus virescens와 가장 유사한 것으로 밝혀졌다. 한편 이 균주는 특히 gram 양성 세균에 대해 antimicrobial activity가 있는 것으로 나타났는데, 여과한 배양 여액에서도 이렇ㄴ activity가 있었지만 비변성 polyacrylamide 전기영동을 하여 본 결과 이 물질이 단백질은 아닌 것으로 밝혀졌다. 또한 이 배양 여액은 상당한 proteolytic activity가 있었으며 최소한 2개의 proteolytic enzyme이 있는 것으로 비변성 polyacrylamide 전기영동을 통하여 밝혀졌다.
흙으로부터 에탄올을 이용하여 성장하는 분홍색 통성 에단올 자화세율을 분리하여 Methylobacteriu~η sp. strain SY 1이라 명명하였다. 이 세균은 그람음성세균으호 약간 굽은 간균이고 한쪽 끝에 달련 한개의 편모로 운동하였다. 세균의 군략은 매끈 하고 밝은 분홍맺을 띄우며 정성이 높았다. 이 세균이 지니는 DNA의 G+C 함량은 약 66%로 나타났다. 이 제균은 칠대호가 성으호 catalase와 oxidase 활성을 나타내었고, carotenoid 색소와 poly-$\beta$-hydroxy butyrate를 가지고 있었다. 이 세균은 또 한 세가지 종류의 큰 plasmid DNA (45,000, 38,500, 23,000)을 가졌으며, $30^{\circ}C$와 pH7.0에서 0.5%(v/v)의 에탄올을 이용 하여 빼른 성장을 하였다($t_{d}$=6.5시간), 이 세균은 메탄올은 울온 여러까지 종듀의 당, 유기산, 아미노산, 아민 및 알코올을 이용하여 성장할 수 있었고, 메탄올은 serine pathway를 통하여 이 세균의 세포 구성물질로 전환됨을 알 수 있었다.
녹황색 세균인 Chlorobium limicola f. thiosulfatophilum NCIB 8327 로부터 광수확기구인 chlorosome 을 초원심분리법으로 분리하여 그들의 물리화학적 특성을 조사하였다. Chlorosome 은 Percoll self gradient 에서 초원심분리하였을 때 약 1.05 g/$cm^{3}$ 의 밀도인 것으로 측정되었다. UV-visible absorption spectra 에 의한 분석결과. chlorosome 은 세균엽록소 (bacteriochlorophyll)d, chlorobactene 및 약간의 세균엽록소 a 로 구성되었음을 확인하였다. 분리된 chlorosome 은 산성조건에서보다 염기성 조건(pH>7) 에서 더 안정하고, 0.deg. C 에서 $80^{\circ}C$ 까지 온도에서는 안정하나 그이상의 온도에서는 급격하게 파괴되었으며, 빛에 의해서도 쉽게 파괴되는 것을 확인하였다. 이러한 결과를 두고 볼 때, chlorosome 에서는 색소를 안정화시켜주는 단백질이나 지질이 존재할 석으로 생각된다.
Poly(ethylene glycol)/salt가 형성하는 액상 2상계에서 균체내 효소인 $\beta$-galactosidase 분리를 최적화하는 실험을 수행하였다. L. sporogenes에 의해 생산된 $\beta$-galactosidase의 분획은 2상계를 형성하는 PEG 분자량이 작을수록 상층부로 이동하였으며, 상층부 PEG 농도가 증가할 때 salting-out 현상이 나타나서 단백질 뿐아니라 $\beta$-galactosidase는 상층부로 크게 이동하였다. 또한 균체내 효소 정제에서 문제가 되는 세포벽잔사(cell debris)들은 조성이 binodial line에 접근할수록 효소 fraction과 반대방향으로 이동되었다. PEG-salt를 이용한 $\beta$-galactosidase 분리는 조성을 binodial line레 접근시키면서 동시에 상층부의 부피를 줄이는 것이 효과적이었다. PEG1000, 300을 각각 단계적으로 이용한 2단계 추출(two-step extraction)로써 세포벽 잔사, bulk protein, 색소물질 및 핵산 등을 제거할 수 있었으며, 이때 효소의 회수율은 74%, 단백질 회수율 35%로서 정제도는 2 배 이상의 효과를 보였다.
공생 박테리아 Photorhabdus sp. strain TF 균체량이 증가함에 따라서 병원성 선충 Heterorhabditis bacteriophora의 Infective Juveniles의 생산이 증가되었다. 이 공생 박테리아의 성장 최적 조건은 각각 배양 온도 3$0^{\circ}C$ 그리고 초기 배지 pH 5.5부터 7.3 사이에서 얻어졌다. 통기 상태에서 박테리아 균체의 생산과 성장이 촉진됨이 밝혀졌다. Photorhabdus sp. strain TF 박테리아의 성장 중 생산된 색소와 배양액의 pH의 변화는 박테리아의 성장 정도 나타내어 액체배양에서 병원성 선충 Heterorhabditis bacteriophora의 접종시기로 표시로서 이용할 수 있을 것이다.
Streptomyces bobili (YS-40) 의 Hg, Ag, penicillin-G, ampicillin, chloramphenicol, oxytetracycline, streptomycin, kanamycin에 대한 생육최소저해농도는 각각 15, 10, >3,000, >100, >1,000. >100. <5, <5 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$였으며 본 균주의 R-plasmid를 제거시키기 위하여 ethidium bromide, acriflavine, sodium dodecyl sulfate 등의 curing agent를 처리시킨 결과를 요약하면 다음과 같다. Ethidium bromide를 10$\mu\textrm{g}$/$m\ell$의 농도로 처리했을 때 98.0% 정도의 R-plasmid를 제거시킬 수 있었다. pH 7.0에서 curing시킴으로서 R-plasmid가 가장 잘 제거되었으며 분균을 24시간동안 배양해서 curing시킴으로서 R-plasmid의 제거율이 가장 높게 나타났다. Ethidium bromide에 의해서 R-plasmid가 제거된 균과 원균을 여러가지 색소생성배지에서 배양시켜 배양상의 특성을 조사해 본 결과 peptone-beef extract agar 배지에서 aerial mass color가 greyish pink에서 grey로 변했으며 tryptone-yeast extract broth에서 배지에서 soluble pigment가 pale brown에서 무색으로 변했다. 이 결과로는 aerial mycelium, melanin 생성과 R-plasmid 는 무관하다고 추측된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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