• 환경위생공학
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• 제13권2호
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• pp.40-46
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• 1998

For a biological control on a plant pathogen, Pryicularia Oryzae, and a mosquito, Aedes aegypti, Bacillus thuringiensis strain AF6 which produces parasporal inclusion, delta-endotoxin, was isolated. The B. thuringiensis strain AF6 was produced not only an antifungal substance(AFS) against P. oryzae, but also a mosquitocidal delta-endotoxin. The AFS of the strain AF6 in more stable at pH 4.0 than pH 10.0. At the mode of action, the AFS of the strain AF6 was inhibited hypha growth on potato agar plate(pH 5.0), and degraded cell walls of P. oryzae.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제18권3호
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• pp.301-304
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• 1990

Bti와 Btd의 내독소에 대한 면역학적인 검토를 행한 결과 양균주의 내독소에는 동일한 기원의 단백질이 혼존하고 있음을 면역확산반응 및 면역전기영동법으로 확인되었다. 또한 동일한 기원의 단백질 함량은 Bti 내독소 보다 Btd 내독소에 많이 존재함을 효소항체법으로 확인하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제23권4호
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• pp.390-396
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• 1995

Bacillus sphaericus 1593 is a larvicidal toxin-producing mosquitocidal bacterium. The toxin contains a parasporal crystalline inclusion which is composed of a protein that is activated under alkaline condition. To enhance alkaline environment around toxin protein, cryptic plasmid cured, B. sphaericus 1593 was transformed by the Bacillus pasteurii urease gene which generate ammonia from urea. Transformant produced urease at about 80% more than wild type strain. B. sphaericus 1593, and the urease gene was stably maintained. It also produced crystalline toxin protein at the same level as the wild type strain B. sphaericus 1593.

• 한국응용곤충학회지
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• 제47권4호
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• pp.457-465
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• 2008

본 연구는 모기에 활성을 나타내는 Bacillus thuringiensis subsp. tohokuensis CAB167균주에서 생산된 내독소결정단백질의 특성을 조사하였다. B. thuringiensis subsp. tohokuensis CAB167균주는 위상차 현미경과 주사전자현미경으로 관찰하여 일반적으로 모기에 활성을 나타내는 spherical type의 내독소결정 성단백질을 형성하는 것으로 나타났다. 국내에서 서식하는 지하집모기(Culex pipiens molestus), 빨간집모기(Culex pipiens pallens), 이집트숲모기(Aedes aegyti)에 대한 이 균주의 살충활성검정은 각각 173, 190, 580 ng/ml의 $LC_{50}$ 값으로 각각 활성을 보였다. B. thuringiensis subsp. tohokuensis CAB167균주에서 생산된 내독소결정성단백질의 SDS-PAGE를 통해 135, 80, 49와 28-kDa의 주요한 4개의 밴드를 나타냈다. 내독소결정성단백질의 소화에 영향을 미치는 곤충중장액과 유사한 trypsin효소를 처리하여 72와 63-kDa의 단백질이 새롭게 생성하였다. 파리목 위생해충인 모기에 활성을 나타내는 다른 7개의 B. thuringiensis 균주들의 내독소 결정성단백질과 혈청학적인 비교실험에서 독소단백질이 차이가 있는 것을 확인하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제16권5호
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• pp.389-392
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• 1988

Escheriachia coli pSL 2-1 clone은 Bacillus sphaericus 1593의 모기살충 유전자를 클로닝한 재조합 DNA이다. 이 클론이 생산하는 살충독소 단백질의 분자량을 SDS-polyacrylamide gel을 이용하여 측정했다. B. sphaericus 1593균이 생산하는 독소결정체를 분리하여 전기영동을 한 결과는 6개의 단백질밴드(43, 58, 64, 100, 113, 130Kd)가 형성되었으나, 독소결정체를 알칼리 pH로 용해하여 전기영동을 하면 2개의 단백질 밴드(43과 64Kd)만이 나타났다. 그러나 대장균 pSL2-1균이 생산하는 독소단백질을 Sephadex G-200으로 정제하여 모기유충에 살충력이 있는 단백질을 전기영동한 결과는 42Kd만이 나타났다. LC50은 2 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$이었다. B. sphaericus와 pSL2-1 clone 생산하는 살충단백질은 42Kd 단백질인 것으로 생각된다.

• 한국응용곤충학회지
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• 제61권1호
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• pp.101-108
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• 2022

곤충생장조절제(IGR)은 대상 해충에 대한 특이성이 높고 환경에 대한 독성이 상대적으로 낮다는 장점으로 유기합성 살충제를 효과적으로 대체할 수 있는 유망한 수단으로 여겨진다. 현재 시판되는 곤충생장조절제는 작용 기작에 따라 유충호르몬 작용제(JHA), 탈피호르몬 작용제(EA) 및 키틴 합성 저해제(CSI)의 세 가지로 구분된다. 최근 들어, 이집트숲모기의 Met과 FISC/CYC 유전자를 yeast two-hybrid system에 도입하여 유충호르몬에 의해 매개되는 Met과 FISC/CYC의 결합을 in vitro에서 구현하였으며, yeast two-hybrid β-galactosidase assay를 통하여 식물과 미생물 및 화합물 library로부터 다양한 유충호르몬 길항제(JHAN)가 분리되고 있다. 유충호르몬은 곤충의 발달, 생식, 휴면 등을 포함한 다양한 생리 작용을 조절하기 때문에, 유충호르몬 길항제는 대상 해충의 내분비 신호 전달을 방해하여 비정상적인 발달 및 유충 단계에서의 치사를 초래하며, 이는 유충호르몬 길항제가 넓은 기주 범위를 가진 살충제 개발에 효과적으로 이용될 수 있다는 것을 시사하였다. 따라서 본 논문에서는 유충호르몬 길항제의 작용점인 Met에 의해 매개되는 유충호르몬의 신호 전달 체계와 친환경 살충제로서의 유충호르몬 길항제의 전망에 대해 알아보고자 하였다.

• Applied Microscopy
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• 제34권3호
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• pp.199-209
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• 2004

중국얼룩날개모기(Anopheles sinensis; Culicidae; Diptera)를 사육하여 종령 유충의 중장 상피를 구성하는 세포들에 대한 미세구조를 전자현미경으로 관찰하였다. 중장 상피조직은 원주상흡수세포, 재생세포 그리고 분비과립세포 등으로 구성된 단층 점막상피를 이루었다. 원주상흡수세포의 첨단부 원형질막은 미세융모로 변형되어 "brush border"를 형성하였다. 기저원형질막은 심하게 주름이 잡혀 "canaliculi"를 만들며 길게 발달한 사립체와 접해 있었다. 또한 원주상흡수세포는 세포질내에 과립소포체, 사립체 그리고 골지체 등이 고루 발달한 전형적인 물질 흡수세포의 형태이었다. 재생세포는 세포기관이 미분화된 상태이었고, 세포질의 전자밀도가 높아 검게 보였다. 작은 재생세포들은 1개 혹은 $2{\sim}3$개가 집단 (nidi)을 이루어 원주상흡수세포의 기저부 사이에 위치하였다. 직경이 약 $200{\sim}400$ nm 크기의 분비과립을 가지는 분비과립세포가 관찰되었는데 이 세포는 기저막상, 원주상세포의 기부 사이에 위치하여 원추형으로 관찰되었다. 기저막 바깥쪽에는 전형적인 골격근으로 분화된 환상근과 종주근 다발이 있었으며, 기저막과 근육층사이 결합조직인 점막하층에는 신경세포와 기관세지들이 관찰되었다.

• Applied Microscopy
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• 제29권2호
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• pp.223-230
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• 1999

본 연구는 경기도 양평에서 채집한 빨간집모기(Culex pipiens pallens: Culicidae)를 사육하여 유충 시기에 있는 직장 조직을 구성하는 세포들의 미세구조를 관찰하였다. 직장조직은 점막상피조직, 결합조직, 그리고 근육조직 등으로 구성되었으며, 상피 내면에는 않은 큐티클 내막이 덮고 있었다. 점막 상피조직은 단층의 편평상피세포들로 이루어졌으며, 첨단원형질막이 약 $5\sim8{\mu}m$ 길이의 막주름이 잡혀 있었고 그 사이에는 크게 발달한 사립체가 관찰되었다. 측부원형질막의 첨단 쪽에서는 격막연접부위가 길게 관찰되었으며 중간부위는 심하게 주름이 접혀 물질의 수송통로인 세포간극이 불규칙하게 관찰되었고 이 주변에서도 크게 발달한 사립체가 산재해 있었다. 그리고 상피세포의 기저막주름은 세포 내로 짧고 불규칙하게 함입되어 미로 형태로 관찰되었다. 기점막 바깥쪽에는 신경 및 기관소지가 분포하고 결합조직과 전형적인 골격근의 형태를 하고 있는 환상근관 종주근이 장외면에 부착되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권4호
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• pp.273-276
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• 1989

Bti 균주를 배양하여 포자와 $\delta$-endotoxin의 복합물을 직접 field에 적용시키면 미생물 생태계에 변화를 초래할 가능성이 있으며, 배양 후 포자로부터 $\delta$-endotoxin만을 분리할 경우에는 대량생산을 위한 기술적인 어려움이 있다. 또한 $\delta$-endotoxin은 용혈성 단백질을 함유하고 있어 Bti 균주로부터 무포자이며 $\delta$-endotoxin을 생산하는 변이주의 분리와 아울러 $\delta$-endotoxin의 용혈성 인자의 제거 또는 약화를 시도하였다. 그 결과 Bti 균주를 열처리시켜 SPO3 (Spo$^-$ Cry$^+$) 변이주를 분리 선별하고, 그 $\delta$-endotoxin의 모기유충에 대한 LC$_{50}$ 및 응혈성을 조사해 본 결과 LC$_{50}$는 약 20배, 용혈성은 약 25배정도 야생주의 $\delta$-endotoxin에 비해 약화되었다. 이는 변이주의 $\delta$-endotoxin내에 28KDa 단백질의 소실에 기인된 것이라 생각되며, 이는 면역확산반응과 면역전기영동 및 SDS-PAGE에 의해 확인되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제23권2호
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• pp.156-163
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• 1995

Bacillus sphaericus 1593 is pathogenic to the larvae of a number of mosquito species that are known as important vectors for the transmission of certain human and animal diseases. As a preliminary experiment for developing a multfunctional B. sphaericus 1593 as a potent antagonist, we investigated the conditions for the protoplast transformation system of B. sphaericus 1593 using the plasmid pGB215-110$\Delta$B. The protoplast of B. sphaericus 1593 were obtained most efficiency by treating the cells with 500 $\mu$g/ml of lysozyme in the SMM buffer containing 0.5 M sucrose at pH 8.0 and 40$\circ$C for 60 minutes. The cell wall was regenerated on the plate containing 1.2% agar and 0.8 M mannitol. Under the best condition for protoplast formation and regeneration established in the work the highest frequency of transformation was achieved with the 40% PEG (M.W 4,000) treatment for 15 minutes of incubation at 4$\circ$C, and subsequently for 120 minutes incubation at 30$\circ$C for phenotypic expression. The highest transformation efficiency were observed at 1.0 $\mu$g/ml of the final concentration of the plasmid DNA and the plasmids were found to be fairly stable since about 70% of the plasmids were maintained after 8 successive daily transfers onto the fresh medium.