• Title/Summary/Keyword: 면역 조직화학법

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생쥐 정소에서 Aquaporin9의 발현

  • 강희정;계명찬
    • Proceedings of the Korean Society of Developmental Biology Conference
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    • 2003.10a
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    • pp.62-62
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    • 2003
  • Aquaporin (AQP) family protein은 일종의 수분 전달 통로 역할을 하는 단백질로 AQP를 통한 수분의 조절은 삼투압을 통한 물의 이동과 함께 조직내 정상적인 수분의 상성 유지에 필수적이다. 현재까지 11종의 AQP이 신장·뇌·정소·안구 등에서 발현이 확인되었다. AQP9은 물 뿐 아니라 carbamide, polyol, purine, pyrimidine, urea, glycerol 등의 이동에 관여한다. 본 연구에서는 생쥐에서 출생 후 성체에 이르는 동안 정소 내 AQP9의 발현, Leydig cell의 분화에 따른 AQP9의 발현을 조사하였다. 1, 2, 4, 8주령의 정소로부터 semiquantitative RT-PCR 및 real time PCR 법으로 AQP9의 발현을 분석한 결과 1주령에서는 발현되지 않았고 2주령에서는 미량이 발현되기 시작하였고, 4주령에서는 성체의 1/2수준으로 발현량이 급격히 증가하였고 성체에서는 다량으로 발현됨이 확인되었다. Semiquantitative RT-PCR 법과 real time PCR법을 비교할 때 주령별 발현 양상은 유사하였으나 4주령과 성체에서는 두 시험법 사이에 양적인 차이가 있었다. 면역조직화학염색 결과 주로 Leydig cell에서 AQP9의 발현이 확인되었다. 성체의 정소 균질액의 Western blot 상에서 분자량 80, 55, 35 및 23 kDa의 항원이 검출되어 dimer, trimer 형태로 존재할 가능성과 당쇄 결합에 의한 단백질의 변형이 있는 것으로 추정된다. 미성숙 개체의 정소에서는 23 form이 확인되는 반면 성체에서는 35 kDa form이 주로 발현되므로 정소에서 발현되는 AQP9의 경우 Post-translation 수준에서 AQP9의 변형이 수반되는 것으로 사료되며 AQP9의 기능과의 연관성은 추후 연구되어야 할 것이다. Leydig cell은 fetal 및 adult type 2종의 세포가 정소발달 과정에 출현, 사멸, 분화하며 이들은 각기 정소발달, 성숙과 정자형성에 필요한 steroidogenesis에 관여한다. 정소 내 AQP9의 발현은 17beta HSD의 발현 양상과 같게 나타나므로 성적 성숙에 따른 정소 내 AQP9의 발현의 증가는 adult type Leydig cell의 분화와 관련된 것으로 추측된다. 성체의 정소로부터 분리한 Leydig cell-enriched culture에 hCG를 처리한 결과 배양체의 AQP9의 발현이 증가하므로 AQP9은 LH 수용체 하위 신호전달과정을 통해 Leydig cell의 steroidogenesis 또는 생성된 steroids의 분비에 요구되는 수분 및 중성용질의 이동에 관여하는 것으로 사료된다.

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Detection of HHV6 and EBV in histiocytic necrotizing lymphadenitis (Histiocytic necrotizing lymphadenitis에서 HHV6과 EBV의 검출)

  • Park, Kyung Hee;Park, Sung Shik;Kim, Ji Yeon;Park, Su Eun
    • Clinical and Experimental Pediatrics
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    • v.51 no.9
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    • pp.987-991
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    • 2008
  • Purpose : Kikuchi-Fujimoto disease (KFD), also known as histiocytic necrotizing lymphadenitis (HNL), is a self-limited disease characterized by cervical lymphadenopathy and fever. The etiology of KFD remains unknown; however, the self-limiting nature of HNL suggests the cause of this disease could be viral infection. For this reason, several viruses have been evaluated as possible etiologies of HNL, including Epstein-Barr virus (EBV), human herpesvirus 6 (HHV6), human herpesvirus 8 (HHV8), and cytomegalovirus (CMV). The aim of this study was to examine the relationship of EBV and HHV6 to HNL. Methods : Data pertaining to 51 cases with biopsy-confirmed HNL were collected between January 1999 and December 2005, from the Department of Pathology, College of Medicine, Pusan National University, Busan, Korea. The clinical records-including data regarding age, gender, duration of fever, and lymph node involvementwere reviewed retrospectively. The in situ hybridization (ISH) assay was performed by EBER PNA probe (Dako, Capinteria, CA, USA), and immunohistochemistry testing was performed with anti-HHV type 6 monoclonal antibodies (Chemicon, Temecula, CA, USA). Results : The HNL patients in this study were 24 males and 27 females, ranging in age from seven to 61 years (median: 25.9). ISH for EBV was positive in 8/51 (15.7%) biopsies, and immunohistochemistry for HHV6 was positive in 15/51 (29.4%) biopsies. Serologic analysis of EBV IgM was performed in 23 cases; only one patient was positive for EBV IgM and EBV ISH. Conclusion : Our study could not provide supportive evidence of a viral pathogenesis for HNL; therefore, cases of HNL may not have a dominant viral cause. However, some rare exceptional cases may have been caused by viral infection.

The Effect of Estrogen Deficiency on Rat Pulpodentinal Complex (에스트로겐 호르몬 결핍 백서에서의 상아-치수 복합체의 변화에 관한 연구)

  • Kim, Mi-Ri;Yang, Won-Kyung;Baek, Jin;Kim, Jong-Jin;Kim, Won-Kyung;Lee, Young-Kyoo
    • Restorative Dentistry and Endodontics
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    • v.30 no.5
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    • pp.402-408
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    • 2005
  • The purpose of this study was to investigate the effects of estrogen deficiency on pulpodentinal complex of tooth in ovariectomized rats. Thirty female Sprague-Dawley rats, 10 weeks old, were used. Rats were grouped into two groups. One group (n = 15) was subjected to sham surgery (SHAM) and the other group (n = 15) was ovariectomized bilaterally (OVX). Animals were sacrificed 12 weeks later, and their mandibular molars and associated periodontal supporting tissues were dissected out, and fixed in $10\%$ buffered formalin. For comparison of groups, immunostained for osteonectin. Histomorphometrical measurement of change of teeth was performed using an image analysis system and paired t-test was used and the level of significance for overall differences was set at p < 0.05. In immunostaining of osteonectin, they were significantly different from each other. The predentin thickness in OVX rats was wider than in SHAM rats. And in SHAM rats, osteonectin was more specifically stained in predentin areas than in OVX rats. These results indicate that estrogen deficiency increased the unmineralized predentin areas and decreased osteonectin content in pulpal tissues in rats. If our result is applicable to human studies, odotoblast is affected by estrogen deficiency.

Effect of Oriental Anti-Stress Agent(Bohyulanshintang) on the Salivary Gland of Rats under Restraint Stress (보혈안신탕(補血安神湯)이 스트레스에 의한 백서 타액선 조직 변화에 미치는 영향에 관한 연구)

  • Ryu, Ho-Kyung;Chun, Yang-Hyun;Lee, Jin-Yong;Hong, Jung-Pyo
    • Journal of Oral Medicine and Pain
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    • v.24 no.3
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    • pp.245-257
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    • 1999
  • 일상 생활에서 우리는 스트레스에 항상 노출되어 있으며, 스트레스는 생체의 신경계, 내분비계 및 면역계의 변화를 수반한 항상성의 파괴로 수많은 정신적, 육체적 질병을 야기시킨다. 특히 구강안면영역에서도 다양한 구강점막질환과 구강건조증 등을 발생시킨다. 스트레스를 제거하는 방법으로는 약물요법 및 상담, 명상요법, 종교요법 등 다양한 방법이 제시되고 있는데, 다소의 부작용이 나타나거나 꾸준히 시행하기가 쉽지 않으며 스트레스의 원인을 근본적으로 제거하기가 현실적으로 용이하지 않은 경우가 많아 스트레스에 대한 해결책에 대하여 많은 관심이 집중되고 있다. 이에 본인은 스트레스가 가해졌을 때 백서 악하선에서 관철되며 apoptosis에 대하여 세포보호작용을 하는 clusterin(SGP-2)을 이용하여 구속스트레스를 가하기에 앞서 오랫동안 경험적으로 사용되어 왔고 부작용이 적은 전통약물인 보혈안신탕을 투여하고 스트레스에 의한 타액선의 조직변화를 관찰하여 그 효과를 확인해 보고자하였다. Sprague-Dawley계 응성 백서(200-230g/bw) 33마리를 정상 대조군(3마리), 구속스트레스군(15마리) 및 보혈안신탕 투여 후 구속스트레스군(15마리)으로 나누고 이틀을 각각 구속장치에 구속한 후 0, 1, 3, 5, 7일에 회생시켜 악하선을 적출하였으며, 면역조직화학법 및 Northern Blot을 이용하여 clusterin의 변화를 관찰하였다. 그 결과는 다음과 같다. 1. 구속스트레스군의 악하선 조직에서 clusterin 단백질과 mRNA는 실험 즉일군에서만 미약하게 관찰되었으며 실험 3일과 5일 후에 핵붕괴 및 핵농축 등의 핵변화를 동반한 apoptosis가 관찰 되었다. 2. 보혈안신탕 투여 후 구속스트레스군의 악하선 조직에서 실험 5일군까지 clusterin 이 증가한 후 실험 7일군에서는 감소하였다. 3. 보혈안신탕 투여 후 구속스트레스군의 악하선 조직에서는 apoptosis가 관찰되지 않았다. 4. 보혈안신탕 투여 후 구속스트레스군의 악하선 조직에서 clusterin mRNA가 실험 전군에 걸쳐 미약하게 관찰되었다. 이상의 결과로 타액선 조직은 스트레스 단백질인 clusterin을 생산하여 세포를 보호함으로써 스트레스 상황에 적응하지만, 생리적 적용한계를 넘는 스트레스에 노출될 때는 apoptosis됨이 확인되었다. 그리고 보혈안신탕은 스트레스 상황에서 세포의 생리적 적응력을 높여 세포의 apoptosis를 억제하는 효과를 나타냄이 확인되었다. 따라서 본 연구결과는 구강건조증등의 스트레스성 타액선 질환의 병리기전을 규명하는데 도움이되리라 생각되며, 향후 항스트레스 효과를 가진 보혈안신탕등의 한약재를 임상에 적용함으로써 스트레스로 인한 신체의 병리적 변화를 다소나마 차단할 수 있을 것으로 사료된다.

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An Effect of Endocrinological Changes related to the Stress on the Submandibular Gland in Rats (스트레스와 관련된 내분비계 변화가 백서 악하선 조직에 미치는 영향에 관한 실험적 연구)

  • Chang, Bong-Youl;Kim, Sung-Hoon;Chun, Yang-Hyun;Hong, Jung-Pyo
    • Journal of Oral Medicine and Pain
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    • v.25 no.3
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    • pp.279-289
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    • 2000
  • 현대에는 날로 복잡해지는 생활양식의 변화에 따라 다양한 스트레스에 노출되고 그로 인한 면역계, 신경계 또는 각종 장기의 기능이상이 점차로 증가되고 있다. 최근 치과에 내원하는 환자들 중 구강건조증을 호소하는 환자들의 다수는 스트레스에 노출되어 있고, 임상적으로도 방사선 타액선 기능 검사에서 타액선, 특히 악하선의 기능이 현저하게 저하되어 있는 소견을 관찰할 수 있 다. 더욱이 이는 타액선 조영술에서 이미 보고된 바 있는 면역성 질환인 $Sj\ddot{o}gren$ 증후군과는 다른 양상으로 관찰되고 있어, 이에 본인은 백서에 스트레스와 관련이 깊은 내분비적 환경 변화를 유도함으로써 이와같은 변화가 악하선 조직의 병리적 변화와 어떠한 연관성을 갖는 지를 관찰하고자 본 실험을 시행하였다. 생후 7주된 Sprague-Dawley계 웅성 백서(165-209g/bw) 40마리를 2 개의 실험군(부신 제거군 : ADX 군, 부신 제거 후 dexamethasone 투여군 : DEX 군)으로 나누어 실험하였다. ADX 군은 외과적으로 부신을 제거한 후 다른 조건을 부여하지 않았고, DEX 군은 외과적으로 부신을 제거한 후 매일 dexamethasone($1.5*10^{-46}mg/g$ I.V./day)을 투여하였으며, 이들을 각각 실험 후 즉시, 1일, 3일, 5일, 7일에 희생시켰다. 그 후에는 즉시 악하선을 적출하여 면역조직화학법으로 Clusterin의 발현 정도 및 부위를 관찰하였다. 그 결과는 다음과 같았다. 1. 광학현미경 하에서, 양 군 모두 유의할만한 조직학적 변화는 관찰되지 않았다. 2. ADX 군에서는 실험기간 전반에 걸쳐 도관세포와 선포세포에서 clusterin이 발현되었다. 3. DEX 군에서는 소수의 선세포에서 국소적으로 clusterin이 관찰되었으나, 전반적으로 도관세포, 선포세포에서 공히 clusterin이 관찰되지 않았다. 부신을 제거한 군에서는 실험기간 전반에 걸쳐 clusterin이 발현되었는데, 이는 clusterin이 스트레스의 생리적 반응의 결과로서 세포보호작용을 한다는 사실에 기초하여 볼 때, 부신을 제거하였을 때도 스트레스를 받았을 때와 같은 영향이 백서의 악하선에 가해졌을 것으로 생각된다. 반면, 부신제거후 glucocorticoid agonist인 dexamethasone을 투여하였을 때, clusterin이 감소 내지 관찰되지 않았던 것은 부신제거에 의해 악하선에 가해졌던 영향을 dexamethasone이 길항하여 나타난 결과로 볼 수 있어, 스트레스에 의해 부신으로부터 분비되는 glucocorticoid가 타액선을 보호하는데 중요한 작용을 하는 것을 시사한다.

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The changed expression of CGRP immune-positive nerve in the periodontal ligament of rat molar during tooth movement (실험적 치아이동에 의한 백서 치주인대내 CGRP 면역 양성 신경섬유의 변화)

  • Sung, Jung-Ok;Park, Hyo-Sang;Bae, Yong-Chul;Sung, Jae-Hyun
    • The korean journal of orthodontics
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    • v.26 no.5 s.58
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    • pp.581-590
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    • 1996
  • Bone resorptiion was predominate in compression site, bone formation in tension site of periodontal ligament during tooth movement. The biologic response at compressiion site was different from tension site. Thus the CGHP immuno-positive nerve fiber will respond differently to mechanical force according to the area( compression or tension site). The purpose of this study was to investigate this response of CGRP immune-positive nerve fiber in the periodontal ligament according to the duration of applied force and the area (compression or tension site) during experimental tooth movement. The experimental animals were 7 week old male rat (approximately 200 gm). The orthodontic force was applied mesially to the right maxillary molar using the Ni-Ti coil spring during 12hours, 1, 3, 7, and 120days. Immunohistochemical staining using antibody against CGRP was performed after sacrifice. The results were as follows. The CGRP immune-positive nerve bundle showed reduced immunoreactivity and nerve fibers reduced in density after application of orthodontic force for 12 hours and 1day. The CGRP immune-positive nerve fibers showed many thin branches at the apical periodontal ligament after application of force for 3 days as compared with normal. The tension site in the apical periodontal ligament showed more branches than the compression site. In 7 day group, the CGRP immune-positive nerve fibers increased in terms of the number and had many thin branches in the apical periodontal ligament. The tension site had more branches than the compression site. In 12 day group, the CGRP immune-positive nerve fibers showed similar distribution to normal control at compression site of apical periodontal ligament, but the fibers at the tension site increased in number. The CGRP immuno-positive nerve fibers showed more increased at tension site than compression site after application of orthodontic force. Therefore it seems to have some relation to the bone remodeling besides the local inflammatory process.

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EFFECTS OF MULTIMODAL TREATMENT FOR THE MAXILLARY CANCER (상악암에 대한 병용요법의 효과)

  • Kim, Yong-Gak;Ryu, Sun-Youl
    • Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons
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    • v.27 no.1
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    • pp.54-60
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    • 2001
  • The treatment of maxillary cancer has been commonly performed by the surgery and radiation therapy, alone or in combination. Multimodal treatment has been introduced with improvement of chemotherapy and immunotherapy. Multimodal treatment for the maxillary cancer is composed of surgery, radiation therapy, and regional intra-arterial chemotherapy. The present study was performed to evaluate the effectiveness of the multimodal treatment with Morita's method, with a slight modification, for the maxillary cancer. Twenty-four cases of the maxillary cancer were analyzed. The multimodal treatment increased the 5-year-survival rate up to 66% and reduced the need for maxillectomy. This method made the morphological and funtional preservation possible. This method may be recommended for the treatment of maxillary cancer.

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Prognostic Value of p53 Overexpression in Patients with Pathologic Stage I Non-small Cell Lung Cancer (제 1기 비소세포폐암 환자에서 p53 과발현과 예후의 관계)

  • Um, Sang-Won;Kim, Hojoong;Kwon, O Jung;Han, Joungho;Shim, Young Mog
    • Tuberculosis and Respiratory Diseases
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    • v.65 no.6
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    • pp.487-494
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    • 2008
  • Background: Chromosome 17p allele losses and mutations of p53 gene are the most common genetic abnormalities in lung cancer. The purposes of this study were to evaluate the factors associated with p53 protein overexpression and to evaluate its prognostic value in patients with pathologic stage I non-small cell lung cancer (NSCLC). Methods: This is a retrospective review for the patients who underwent surgical resection at Samsung Medical Center between Jan 2003 and Jun 2004. Immunohistochemical staining for p53 protein was performed on tumor tissues from patients with lung cancer. The p53 overexpression was evaluated in relation to age, sex, smoking history, histology and pathologic stage by univariate and multivariate analyses. The disease-free survival (DFS), disease-specific survival (DSS) and overall survival (OS) were analyzed using the Kaplan-Meier methods and the differences in DFS, DSS and OS were assessed by using the log-rank tests. Results: A total of 125 patients were included in the analysis and a median frequency of p53 expression in tumor tissue was 10%. The p53 overexpression (${\geq}10%$) was more common in squamous cell carcinoma (66%) than in adenocarcinoma (38%, p=0.002). The p53 overexpression was more common in pathologic stage IB (59%) than in IA (38%, p=0.002). Patients with p53-overexpressing tumor (27 years) smoked more years compared with those without it (20 years, p=0.032). Smoking history ${\geq}25$ pack-years was more common in patients with p53 overexpression (58%) than in those without it (38%, p=0.024). In the multivariate analysis, only histology was significantly associated with p53 overexpression. However, there were no significant differences of DFS, DSS and OS in relation to p53 status. Conclusion: The p53 overexpression was associated with histology, pathologic stage and smoking history in patients with pathologic stage I NSCLC. However, the p53 overexpression was not associated with patient's survival.

Immunohistochemical and Immunogold Electron Microscopic Studies on Effects of Cis-platin on the Ciliogenesis of Rat Oviducts (Cis-Platin이 흰쥐 난관의 섬모형성에 미치는 영향에 대한 면역조직학적 및 면역도금법에 의한 전자현미경적 연구)

  • Kim, Jin-Kook;Kim, Won-Kyu;Paik, Doo-Jin;Chung, Ho-Sam
    • Applied Microscopy
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    • v.30 no.1
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    • pp.45-59
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    • 2000
  • Cis-platin is a widely used anticancer drug against certain solid tumors such as malignant ovarian tumor, malignant carcinoma of head and neck, bladder cancer and cervical cancer of uterus, and its major mechanism of action is inhibition of DNA synthesis of the tumor cell. To investigate the inhibitory effects of cis-platin on the ciliogensis of the ciliated cells in the mucosa of oviduct, the author pursued the alterations of $\alpha-tubulin$, which is the main constituent of the microtubles in cilia, after cis-platin treatment. To eliminate the possible variations due to ovarian cycle, female Spargue-Dawley rats ($150\sim200gm$ in B.W.) were pretreated with estradiol benzoate (20 mg/kg, once a day, for 4 consecutive days). Animals were administrated with cis-platin (6 mg/kg, i.p.) and sacrificed at 1day, 3days, 5days and 7days after treatment, respectively. Immunohistochemistry for $\alpha-tubulin$ using mouse anti-rat $\alpha-tubulin$ monoclonal antibody as primary antibody was done. Immunogold electronmicroscopy for intracellular distributions of $\alpha-tubulin$ was also performed with same primary antibody and Goat anti- mouse IgM which is preconjugated with gold particles of 15 nm as secondary antibody. The results obtained were as follows; 1. Strong immunoreactivity of $\alpha-tubulin$ was observed in ciliated cells of oviducts at 1, 3 and 5 days after estradiol pretreatment. 2. Weak immunoreactivity of $\alpha-tubulin$ was observed in ciliated cells of oviducts at 1 and 3 days after cis-platin treatment but it was recovered to strong immunoreactivity in 5 days 3. In immunogold electronmicroscopy, density of gold particles for $\alpha-tubulin$ reactions was decreased in apical cytoplasm, but few changes were observed in basal body or cilia at 1 and 3 days after cis-platin treatment. From these above results, it is indicated that synthesis of $\alpha-tubulin$ in ciliated cells of rat oviduct is inhibited by cis-platin treatment.

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Immunocytochemical Studies on the Pancreatic Endocrine Cells of Phylogenetically Different Vertebrates ll. Reptilia, Amphibia, and Pisces (계통발생에 따른 각종 척추동물의 췌장 내분비세포에 관한 면역 세포화학적 연구 II. 파충강, 양서강 및 어강에 관하여)

  • 김남중;권혁방최월봉
    • The Korean Journal of Zoology
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    • v.34 no.4
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    • pp.433-451
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    • 1991
  • 척추동물(7목 23종)의 췌장에서 insulin( B)세포, glucagon(A)세포, somatostatin( D)세포 및 pancreatic polypeptide( PP)세포 등을 면역세포화학법으로 동정하여 이들의 출현율, 분포양상 및 형태 등을 계통별로 비교하였다. 파충강의 거북목, 양서강의 유미목 및 어강의 악상대목 들을 제외한 모든 종에서 췌도의 형성을 관찰할 수 있었으며, 췌도를 구성하는 내분비세포의 크기에는 계통간의 차이가 있었다. B세포는 파충강의 것이 가장 크고, 양서강, 어강의 순이 었으며 A와 PP세포는 양서강, 파충강 및 어강의 순서였다. D세포는 양서강의 것이 가장 윤고, 다음이 어장이었으며, 파충강의 것이 가장 작았다. 이들 세포의 모양은 B세포의 경우 양서강과 어장에서는 원형, 난원형 및 방추형이었으며, 파충강에서는 원추형 및 단기형 등 다양한 모습이었다. A세포는 어강에서는 원헝, 난원형 및 방추형이 고르게 나타났고, 파충강과 양서 강에서는 원주형, 다각형 및 쐐기형이 나타났다. D세포는 모든 동물에서 원형, 난원형 및 방추형이 관찰되었고, 특히 파충강에서는 원추형및 쐐기형도 나타났다. PP세포는 주로 방추형 및 반원형이 대다수이였으며 간혹 원형 또는 다각형 등의 모습도 나타났다. 각 내분비세포의 출현율은 파충강 열 어강 들에서는 B, A, D 및 PP세포 순이었으나, 양서 강에서는 B, A, PP 및 D세포 순으로 나타났다. B와 PP세포는 양서강, 어강 및 파충강 순서로 출현하였고, A세포는 파충강, 어강 및 양서강의 순서이었으며 D세포는 어강, 파충강 및 양서강의 순서였다. 췌도 내에서의 세포의 분포 위치는 세포의 종류에 따라 차이를 보여 B세포의 경우 대다수 동물들에서 중앙부에 균등하게 분포하였으나 A, D및 PP세포는 주로 췌도 주변부에 분포하였고, 어강에서의 D세포는 췌도 중앙부에서도 관찰되었다. 일반적으로 파충강 및 양서 강에서는 외분비 선포조직에서초 내분비세포들이 출현하였으나, 어강에서는 내분비세포가 전혀 출현하지 않았다. 양서강 및 어강 들의 일부 수에서는 췌관상피에서도 드물게 나타났다.

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