가자 물 추출물과 70% 에탄올 추출물을 acetone, hexane, chloroform, butanol 용매로 순차 분획하였다. 용매 순차 분획물중 butanol분획물이 E. coli, S. typhimurium, P. aeruginosa, B. subtilis, S. aureus, L. monocytogenes균종에 대해 가장 좋은 항균활성과 추출수율을 나타내었다. 또한 polyphenol 표준물질 중 pyrogallol이 항균활성 실험결과 가장 좋은 활성을 나타내었다. 가자의 물 추출물과 에탄올 추출물을 13가지 표준품을 사용하여 HPLC 분석한 결과, pyrogallol의 수치가 가장 높게 나타났다.
본 실험은 반응표면분석법을 이용하여 양배추(썸머파워)의 추출조건에 따른 이화학적 특성을 평가하였다. 중심합성계획법에 따라 시료에 대한 용매비($10\~30$mL/g), 에탄올 농도($0\~100\%$) 및 추출온도($35\~95^{\circ}C$)를 달리하였을 때 회귀식의 $R^2$는 추출수율, 전자공여작용, tyrosinase 저해효과 및 SOD유사활성에서 각각 0.8162(p<0.1), 0.8173(p<0.1), 0.9374(p<0.01)와 0.9116(p<0.05)로 분석되었다. 조건별 추출물의 수율, 전자공여능, SOD유사활성에 대한4차원 반응표면을 superimposing하여 얻은 최적 추출조건 범위는 시료에 대한 용매비 $15\~30$ mL/g, 에탄을 농도$40\~80\%$, 추출온도 $50\~90^{\circ}C$로 나타났다. 최적 추출조건 범위내의 임의의 조건인 시료에 대한 용매비 25 mL/g, 에탄을 농도 $50\%$ 및 추출온도 $70^{\circ}C$을 각각의 회귀식에 대입하여 얻은 예측값은 추출물의 수율 $37.51\%$, 전자공여능 $45.66\%$, tyrosinase 저해효과 $53.59\%$, 아질산염 소거능의 경우 $73.30\%$(pH 1.0), $65.06\%$(pH 3.0), $16.41\%$(pH 4.2) 및 SOD 유사활성 $31.01\%$로 나타났다.
액상청국장의 추출공정별 청국장 추출물의 특성 비교 및 청국장의 최적 추출조건을 설정하고자 하였다. 용매로 물을 사용하여 추출한 액상청국장을 각각 마이크로웨이브 파워별(30, 60, 90, 120 및 150 W), 시간별(1, 5, 9, 13 및 17분)로 추출한 후 생리활성 실험을 수행하였을 때, 수율, 전자공여능, 아질산염 소거능, tyrosinase 저해작용, SOD 유사 활성 등의 생리활성 측정을 통해 추출 최적조건을 찾아내었다. 반응표면분석법을 이용하여 모니터링 한 결과, 액상청국장은 수율, tyrosinase 저해작용, SOD 유사활성이 일치하는 범위로 마이크로웨이브 파워 $55{\sim}75$ W, 시료에 대한 용매비 $2{\sim}5$ g/mL, 추출시간 $3.5{\sim}15$분으로 확인되었다. 예측결과에 의한 최적조건을 확인하기 위하여 예측된 최적조건 범위 내에서 임의의 조건을 대입하여 이화학적 특성을 예측해본 결과 액상 청국장에 대한 임의의 조건으로 시료에 대한 파워 60 W, 용매비 3.5 g/mL, 추출시간 13분을 설정한 후 액상 청국장에 대한 각각의 회귀식에 대입하여 얻은 예측된 최적값은 수율 24.99%, 전자공여능 75.42%, 아질산염 소거능 70.12%, tyrosinase 저해작용 15.69%, SOD 유사활성 36.16%로 실험값과 예측값 간의 유의적인 차이가 나타나지 않았다.
고등어 유래의 peptide를 제조하고, Sephadex G-25 column, ODS AQ column, Vydac column, Superdex peptide column을 이용하여 순차적으로 분리, 정제하였으며 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 고등어 선어로부터 두부, 내장 및 뼈를 제거하여 얻은 고등어육의 수율은 $65.5{\%}$였으며, 고등어육의 단백질 함량은 $63.3{\%}$, 그리고 지질함량은 $32.6{\%}$로 나타났다. 지질을 제거하기 위하여 알칼리 처리한 후 동결 건조한 고등어 단백질의 수율은 고등어 육에 대하여 $18.2{\%}$로 나타났고, 고등어 단백질을 효소가수분해하여 제조한 고등어 가수분해물의 수율은 $50.6{\%}$로 나타났다. 고등어 가수분해물 cut-off 1만의 membrane으로 ultrafiltration한 결과, MW 10,000이하가 $79.6{\%}$, 10,000 이상이 $20.4{\%}$였으며, ACE저해효과는 10,000이하 획분이 10,000이상 획분보다 높은 것으로 나타났다. (Table 1). 1만 이하의 획분을 Sephadex G-25 column으로 분획하여, 7개의 획분을 얻었고 (Fig. 1), 이 가운데 MS2획분의 ACE 저해효과가 가장 높았다(Table 2). ACE 저해효과가 가장 좋은 MS2획분을 ODS AQ column으로 분획하석 4개의 획분으로 분획하였고 (Fig.2), 이 가운데 Ms2O3획분의 ACE저해효과가 가장 좋았다 (Table 3). Ms2O3획분을 Vydac column으로 재분획하여 8개의 획분으로 분취하였다(Fig.3), 이 가운데 MS2O3V5획분의 ACE저해효과가 가장 좋았다(Table 4). Superdex peptide column으로 재정제하여 얻은 peptide의 N-말단으로부터 아미노산 배열은 Tyr-Val-Ala으로 ACE저해활성은 IC-(50)이 $1.4{\mu}M$로 나타났다. Matsumura등 (1993)은 가다랭이 가수분해물로부터 분리한 6개의 peptides 가운데 tripeptide의 ACE저해활성이 높았다고 하였으며, 본 연구 결과에서도 유사한 경향을 나타내었다.
노랑느타리버섯의 항산화 활성을 측정하여 효율적 추출조건을 예측하기 위해 마이크로웨이브 에너지, 에탄올 농도, 추출시간의 요인변수를 중심합성법에 따라 설정하여 반응 표면분석을 통해 최적화 조건을 설정하였다. 노랑느타리버섯 추출물의 수율, 전자공여작용, SOD 유사 활성, 총 폴리페놀 함량에 대한 반응표면의 회귀식 $R^2$ 값이 각각 0.91, 0.87, 0.86 및 0.87로 분석되었고, 수율은 P<0.01, 항산화 활성이 P<0.05에서 유의적 수준을 나타냈다. 노랑느타리버섯은 요인변수에 따라 수율, 전자공여작용, 총 폴리페놀 함량의 경우 마이크로웨이브 에너지의 영향을 가장 많이 받았고, SOD 유사 활성의 경우 에탄올 농도에 따른 유의적 차이를 보였다. 추출물의 각 특성을 모두 만족시키는 최적의 추출조건의 범위는 superimposing 하여 마이크로웨이브 에너지 71.48~92.84 watts, 에탄올 농도 55.01~71.66%, 추출시간 3~9분으로 예측되었다.
양배추(홍월적) 추출물의 추출수율과 기능성을 최적화하고자 반응표면분석법을 이용하여 모니터링하였다. 추출조건에 따른 수율의 최대값은 44.47$\%$로 시료에 대한 용매비 25.58 mL/g, 에탄올 농도 56.84$\%$ 및 추출온도 79.86$^{\circ}C$였으며, 전자공여능의 최대값은 85.46$\%$로 시료에 대한 용매비 27.71 mL/g, 에탄올 농도 57.06$\%$ 및 추출온도 46.38$^{\circ}C$일 때였다. 또한 tyrosinase 저해효과는 시 료에 대한 용매비 16.03 mL/g, 에탄올 농도 47.71$\%$및 추출온도 37.50$^{\circ}C$일 때 최대값 69.37$\%$를 나타내었다. 아질산염 소거능은 pH 1.0에서 가장 높은 값을 나타내었으며, 최대값은 99.52$\%$이었으며, SOD 유사활성의 최 값은 48.36$\%$로 이 때의 추출조건은 시료에 대한 용매비 29.13 mL/g, 에탄올 농도 70.35$\%$ 및 추출온도 66.12$^{\circ}C$였다. 조건별 추출물의 수율, 전자공여능, SOD 유사활성에 대한 4차원 반응표면을 superimposing하여 얻은 최적 추출조건 범위는 시료에 대한 용매비 20$\∼$30 mL/g, 에탄올 농도 25$\∼$85$\%$, 추출온도 40$\∼$90$\%$로 나타났다.
전통 기호음료의 하나인 볶음보리 추출물을 사용하여 발암성 니트로사민의 직접적인 생성인자인 아질산염 소거작용을 검토하였는데, 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 볶음보리 추출물의 수율은 볶음온도와 볶음시간에 크게 영향을 받는 것으로 나타났다. $230^{\circ}C$에서 60분간 볶았을 때에 수율이 가장 많았으며, 이 때의 수율은 28.5%였다. 아질산염 소거작용은 pH 1.2, 3.0에서는 반응시간과 더불어 증가하였고, pH6.0에서는 2시간 까지는 증가하였으나, 그 이후부터는 큰 변화를 나타내지 않았다. 볶음보리 추출물의 아질산염 소거작용은 볶음온도와 시간에 영향을 받았으며, 수용성획분의 경우 $230^{\circ}C$에서 볶음 보리에서 가장 강한 것으로 나타났다. 수용성획분을 에탄올 침전획분과 에탄올 가용성획분으로 나눈 경우, 에탄올 가용성획분의 아질산염 소거작용이 가장 강한것으로 나타났다. 볶음보리 추출물과 디메칠아민의 아질산염 소거작용을 조사해 본 결과, 반응시간이 3시간 되었을 때 볶음보리 추출물에 의해서는 아질산염을 거의 100% 소거시켰으나, 디메칠아민은 30% 소거시켜, 발암성 니트로사민 생성억제에 볶음보리 추출물이 유효하다고 생각된다.
국내연안에 자생하는 13종류의 홍조류를 남해안의 다대포, 광안리 그리고 송도에서 채취하여 구성성분 및 수용성 성분의 수율과 해조다당류의 이화학적 특성에 중요한 영향을 미치는 황산기 함량을 조사한 결과를 요약하면 다음과 같다. 회분함량은 꼬시래기의 경우 $8.57\%$로 가장 낮았으며 송도에서 채취한 붉은잎은 $30.23\%$로 종류에 따른 함량 차가 클 뿐만 아니라 같은 종류일지라도 채취장소에 따른 차이도 많았다. 단백질 함량은 광안리 풀가사리의 경우 $18.11\%$로 가장 낮았고 송도 붉은까막살의 경우 $33.90\%$로 가장 높았다. 지방은 $0.11\~0.90\%$로 모든 홍조류에서 함량이 $1\%$미만이었다. 수용성 성분의 수율은 남해안의 송도에서 채취한 붉은 까막살의 경우 $4.32\%$로 가장 적었고 광안리 깃꼴진두발은 $55.78\%$로 수율이 가장 많았다. 수용성 성분중의 황산기 함량은 1.65 (다대포 우뭇가사리) 가 $19.48\%$ (송도 돌가사리)로 종류에 따른 황산기 함량의 차이가 매우 큰 것으로 나타났다. 홍조류에서 추출한 수용성 성분의 구성당은 3,6-anhydrogalactose (An-Gal), galactose (Gal), 6-methyl-galactose (6-Me-Gal), rhamnose (Rha), fucose, ribose (Rib), arabiose (Ara), xylose (Xyl), manose (Man) 그리고 glucose (Glu)였다. 그리고 구성당을 GC로 분석한 결과 함량이 가장 높은 당은 Gal였으며, 다음으로는 An-Gal, Glu, Xyl 순이었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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