The present study was conducted to develop an in vitro culture system that would support bovine follicle growth from preantral to antral stage, oocyte maturation, fertilization, and embryonic development. Bovine preantral follicles (150$\pm$1.2 ${\mu}{\textrm}{m}$) surrounded by theca cell were isolated ezymatically and mechanically from ovarian cortical slides in Leibovitz L-l5 medium containing 1 mg/$m\ell$ collagenase and 0.2 mg/$m\ell$ DNase I and cultured for 25 days in the presence of different concentrations of bovine FSH and LH in $\alpha$MEM medium. The survival and growth rates of follicles cultured in the presence of FSH (10~150 ng/$m\ell$) were significantly higher than those of control group (P < 0.001), but no significant differences were observed in survival and growth rates of follicles between the LH treatment groups (1~125 ng/$m\ell$) and the control. The survival (40%) and growth (244 $\pm$ 0.5 $\mu\textrm{g}$) of follicles cultured with FSH (90 ng/$m\ell$) and LH (25 ng/$m\ell$) were higher than those of control (25%, 160 $\pm$1.0 $\mu\textrm{g}$). Finally, 50% percent of healthy antral follicles were obtained, and almost 60% of them has complete meiotic division with 1st polar body (18.1%) and 10.0% have developed to the cleaved embryo and blastocyst stage. These results suggest that bovine preantral follicle with intact theca cell can grow to the antral stage using these culture conditions, and that oocytes from in vitro-matured bovine preantral follicle may acquire meiotic competence and can undergo fertilization and development.
The purpose of this study was to evaluate the effects of growth factors such as epidermal growth factor (EGF) and insulin-like growth factor-1 (IGF-1) on maturation of bovine follicular oocytes in vitro. Oocytes were recovered from the ovaries of slaughtered Hanwoos. The oocytes were matured in TCM 199 at 39$^{\circ}C$, 5% $CO_2$ in air. Growth factors were added to maturation medium as follows: control (no serum), EGF (10ng/m1, 50ng/ml or 100ng/m1), IGF-1 (100ng/m1) and EGF (50ng/ml) + IGF-1 (100ng/m1). The oocytes were placed onto a slide and stained with aceto-orcein dye. Nuclear maturation was evaluated and classified as germinal vesicle breakdown (GVBD), metaphase-I (MI) or metaphase-ll(Mll). Maturation rates were 37.9% (control), 45.8% (EGF, 10ng/m1), 55.8% (EGF, 50ng/ml), 44.4% (EGF, 100ng/m1), 46.7% (IGF-1, 100ng/m1) and 67.0% (IGF-1+EGF). The highest group developed to Mll stage was IGF-1+EGF treatment group (p<0.05). Therefore, nuclear maturation of bovine oocytes were affected by both of growth factors, and it seems to have a mutual activity between them.
The present study was conducted to elucidate genes involved in the primordial-primary follicular transition. By using suppression subtractive hybridization, day1- and day5-subtracted cDNA libraries were obtained with the forward and reverse subtraction method, respectively. In toto, 357 clones were sequenced and analyzed by BLAST and RIKEN program. Sequences of 330 clones significantly matched database entries while 27 clones were novel. Forty-two and 47 genes with known functions were different between day1 and day5 ovaries. Four genes, GDF8, lats2, septin2, and wee1, from the day1 subtracted cDNA library, and 6 genes, HSP84, laminin2, MATER, MTi7, PTP, and wrn, from day5-subtracted cDNA library were chosen, and their differential expression was evaluated using RNAs from whole ovaries as well as captured primordial and primary follicles by laser captured microdissection. Results from the present study would provide insight for the future study on the mechanisms involved in primordial-primary follicle transition in the mouse in addition to the human ovary.
Kim, Yong-Jin;Ku, Seung-Yup;Kim, Yoon-Young;Oh, Sun-Kyung;Kim, Seok-Hyun;Choi, Young-Min;Moon, Shin-Yong
Clinical and Experimental Reproductive Medicine
/
v.36
no.4
/
pp.265-274
/
2009
Objective: MicroRNAs (miR) are known to repress target genes at post-transcriptional level and play important roles in development and maturation of cell. However, the expression profiles of miR during ovarian follicle maturation have not been fully elucidated. Here, we designed this study to investigate the expression profiles of miR in oocytes and granulose cells (G-cells) after in vitro culture according to gonadotropins and adding hCG. Methods: Ovaries from 12-day-old mice (C57BL6) were removed and preantral follicles were isolated and cultured in $20\;{\mu}L$-drop of culture media with supplementation of either rFSH, rLH, or rFSH+rLH. After their full maturation, follicles were incubated with rhCG and rEGF. RNA was isolated from oocytes and G-cells, and real-time PCR were performed with primers of miR known to be expressed in the mouse ovary (mmu-miR-16, -miR-27a, -miR-126, -miR-721). Results: FSH+LH group showed the highest ovulation and MII rates among gonadotropin groups. The profiles of miRs in oocytes and G-cells differed according to gonadotropin groups and adding hCG. The profiles of miRs showed divergent changes between oocytes and G-cells. Conclusion: miR expression profiles are altered by gonadotropins and supplementation of hCG during in vitro maturation of murine follicles. Target gene study must be necessary to validate these findings.
Kim, Jin-Kyu;Lee, Chang-Joo;Lee, Young-Keun;Song, Kang-Won;Yoon, Yong-Dal
Journal of Radiation Protection and Research
/
v.23
no.2
/
pp.89-96
/
1998
To assess the radioprotective effects of follicle stimulating hormone (FSH) on ovarian follicles, 3 week-old female mice were irradiated with 8.33 Gy of ${\gamma}$-ray (group R) and followed by 5 IU ip-injection of FSH (group RF). For control groups, 5 IU of saline (group C) or 5 IU of FSH (group F) was ip-injected. Ovaries were collected 0h, 6h, 12h, 14, 2d, 4d, and 8d after irradiation or saline/FSH injection, and followed by fixation in neutral buffered formalin for routine histochemistry. Immunohistochemistry was used to assess the status of follicles and DNA fragmentation was analyzed by agarose gel electrophoresis for total DNA. Staining specific for apoptotic follicles showed high intensity at 6h and 12h in group R and RF On the other hand, staining specific for proliferating follicles showed noticeably high intensity at 8d in group R and Rf. DNA fragmentation of 185bp increased with time in all experimental groups. Especially 370bp appeared at 6h in group R, then disappeared after 1d. In case of group RF, it appeared at 12h and disappeared after 1d. From the above results, the irradiated antral follicles become completely disappeared from 4d to 8d, and then new follicles started to grow again at 8d. FSH had delaying or suppressing effects on follicular atresia after irradiation. In addition, it became clear that radiation-induced follicular atresia was mediated by granulosa cell apoptosis.
1991년 8월부터 그이듬해 7월까지 채취된 무지개 송어(Oncorhvnchus mykiu) 난모세포의발달 단계를 이해하기 위하여 광필 및 전자현미경을 이용하여 본 각구를 실시하였다. 건국 대학교 축산대학 양수.장에서 수온이 14-16$^{\circ}C$이고 용존산소량이 7.6 $\pm$ 0.3ppm. PH 5.8 $\pm$ 0.2인 자연채광 상태인 1개의 10m3 탱크에서 N R.C. 사양표준에 준한 펠렛트 배합사료를 급여하여 연중 사육중인 체중 700-1,2009의 한복새끼인 무지개 송어 암컷 120마리를 공시희.로 이용 하였다. LPO(late perinucleolus oocyte), EMO(early maturing oocyte) 단계에서 과립막 세포와 협막세포와 같은 난포막 세포는 단층구조로 부터 입 방형구조로 변화되었고. 완전한 성장, 성숙 및 과숙기에 방사대(Eons rsdiat3)에 있는 pore canals의 입구가 봉쇄되었다. 방사대는 맨바깥목에 균일하면서 점은 두께의 막과 나선형의 두꺼운 복의 2개의 막으로 구성되어 있으며. 성숙기에 있는 난모세포에는 수초 및 자갈에 붙을 수 있는 온수성 어종 보다 상대적으로 얇은 점액성의 막이 그 주위를 둘러싸고 있다. 난모세포가 성장함에 따라 세포질 주변부 및 임립등 세포내에 막대기 형태의 미토콘드리아와 비대해진 내형질세강의 육가 급증하였다. 전자밀도가 높은 소포는 방사대에 인접한 난세포질 주변부에 많이 존재하며. 이는 성장중인 방사대의 pore Canals을 통해서 간으로 부터 합성된 단백질과 탄수화물을 수송하는 것과 밀접한 관계가 있는 것으로 사료된다. 자연적인 조건하에서 fP포막은 난형성 및 이에 영향을 미치는 성호르몬의 발달에 충분한 대르몬을 계절에 따라 분비시키는 데에 커다란 영향을 미치는 것으로 나타났다.
Production of a mature oocyte is a complex process that requires the close association between oocyte and follicular cells. The present study was conducted to investigate the difference between oocytes with and without close junctional communication with cumulus cells and the involvement of two connexins(CXs) in the interactions. Follicles at different sizes(small: 200~400 ㎛; large:>450 ㎛) were mechanically isolated from PMSG-primed mouse ovaries, and punctured to get cumulus-oocyte complex(COC). Oocytes were released themselves(denuded), with partially attached(partial), or with tightly attached(intact) cumulus cells. Maturation and fertilization capacity of the COCs were measured. Expression of CX 37 and CX 43 was examined by RT-PCR and in situ hybridization. The ratio between intact COC and denude/partial oocytes was 30%(SI) and 70%(SPD) in small follicles, while 55%(LI) and 45%(LPD) in large follicles, respectively. Maturation and fertilization rates of the released oocytes were similar among SI, LPD, LI groups, but those were significantly lower in SPD oocytes. In oocytes, CX 37 was the major CX and CX 43 was not expressed, whereas in the cumulus cells, CX 43 was the major, and CX 37 was the next. Results of the present study suggest that 1) immature oocytes from small follicles with intact cell-to-cell communication with cumulus have the similar quality to that of the oocytes from larger follicles, 2) gap junction between oocyte and cumulus cells may be the heterotypic channel, and 3) we could not explain the difference in the cell-to-cell communication between intact and partial/denuded COCs through the expression of the two CXs.
Objective: The purpose of the present study was to examine the hormonal regulation of RGS-2 in the rat ovary. Methods: Immature rats were injected with 10 IU of PMSG to induce multiple growth of preovulatory follicles and 10 IU of hCG to induce ovulation. Northern blot analysis performed for gene expression and in situ hybridization performed for mRNA localization. Results: Northern blot analysis revealed that pregnant mare's serum gonadotropin (PMSG) treatment did not affect RGS-2 mRNA levels. In contrast, human chorionic gonadotropin (hCG) treatment of PMSG-primed rats resulted in an increase in RGS-2 expression within $1{\sim}3\;h$. The major cell-types expressing RGS-2 mRNA were oocytes regardless of follicle size. Interestingly, hCG treatment caused the stimulation of RGS-2 gene expression in granulosa cells of preovulatory and growing follicles. In contrast, cell types expressing RGS-2 protein were theca cells regardless of hCG treatment. Like in vivo, treatment of preovulatory granulosa cells with LH in vitro stimulated RGS-2 levels within 1 h. Interestingly, GnRH antagonist II enhanced the stimulatory action of LH. Conclusion: The present study demonstrates the LH/hCG induction of RGS-2 in preovulatory granulosa cells and suggests a role of RGS-2 in Gq protein signaling pathway during ovulation.
The research has been aimed to investigate the effect of different sera including fetal bovine serum (FBS), male bovine serum (MS), female bovine serum (FS), and castrated-male bovine serum (C-MS) on cell proliferation, follicular maturation and ovulation in vitro. Established cell lines and primary cells were cultured in the culture media supplemented with different sera and cells proliferation was observed by cell counting and MTT assay. The results indicated that cell proliferation was significantly different for different serum source. Proliferation of bovine and human myogenic satellite cells was highest in MS. In contrast, proliferation of breast cancer cells and immune cells were the highest in FS and FBS, respectively. There was no difference in the rate of follicular growth, whereas the rate of ovulation was higher in FBS and C-MS. Finally, the wound healing effect and cell proliferation of 3T3-L1 cells showed that wound healing was fastest in FS and cell proliferation was higher in MS. These results suggest the importance of an optimal serum selection in the experiments involving cell culture system, and gender-specific Hanwoo sera may be used as a substitute to FBS.
본 연구는 돼지의 미성숙 난포란을 체외에서 성숙, 수정시킨 후, 생산된 체외 수정란을 NCSU 23 체외배양액에 항산화제(NAC, ebselen 및 glutathione) 와 성장 인자 (EGF, PDGF)의 첨가가 돼지 체외 수정란의 체외 발육에 미치는 영향을 검토하였다. NAC을 0, 0.5, 1.0 및 2.0 mL 첨가하여 체외배양한 결과, 상실배기 이상 발육된 체외발육성적이 1.0mL과 2.0 mM 첨가구가 여타구보다 유의하게 높은 체외발육성적을 나타냈다.(p〈0.05). (중략)
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.