• Korean Journal of Animal Reproduction
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• v.25 no.1
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• pp.51-61
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• 2001

This study was conducted to determine developmental ability of reconstructed embryos by nuclear transfer using somatic cell of Korean bull with high genetic value. Fibroblast cells obtained from ear biopsy of the bull were cultured in Dulbecco's Modified Eagle's medium (DMEM) at 37$^{\circ}C$ in air containing 5% $CO_2$. The cummulus-oocyte complexes were collected from slaughterhouse and were matured in vitro for 20 h in TCM 199 culture medium and the oocytes were then enucleated in modified phosphate buffered saline with cytochalasin B. Matured bovine oocytes were enucleated by aspirating the first polar body and metaphase chromatin using a beveled pipette in modified phosphate buffered saline. The ear fibroblast cells were fused into enucleated oocyte by electrical stimulation. The reconstructed oocytes were activated with ionomycine and 6-dimethylaminopurine, and then cultured in CR1aa medium for 7.5 days. Out of 524 bovine eggs reconstructed by nuclear transfer 65.6%(277/422) embryos were cleaved, and 30.7% (85/277) cleaved embryos were developed to the morula to blastocysts. There was no difference of developmental ability in vitro of reconstructed embryos regardless of donor cell passages. In order to determine fate of foreign mitochondria of donor nucleus, the Mito Tracker stained cells were fused into enucleated oocytes. The donor mitochondria were detected early stage of embryos, but disappeared rapidly. The developmental ability of reconstructed embryos was not impaired by Mito Tracker treatments. The results indicate that viable reconstructed embryos can be producted by nuclear transfer using somatic cell of Korean bulls.bulls.

• The Korean Journal of Zoology
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• v.18 no.1
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• pp.27-40
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• 1975

dbcAMP와 theophylline이 난자의 성숙을 억제하는 기작과 난자내 glycogen 함량과의 관계를 밝혀보기 위하여 실험한 결과는 다음과 같다. 1. 생쥐 여포난자의 PAS 양성물빌은 glycogen이며 핵의 성숙분열이 진행됨에 따라 glycogen의 함량은 감소한다. 2. dbcAMP나 theophylline에 의해 핵의 성숙이 억제된다 하더라도 난자내의 glycogenolysiss는 촉진된다. 이에 반해 핵분열이 일어나지 않은 난자는 배양이 진행되더라도 glycogen을 그대로 유지하고 있다. 일단 dbcAMP나 theophylline에 의해 성숙이 억제되었던 난자가 성숙과정에 들어가려면 다시 glyconeogenesis가 일어나 세포질내의 glycogen의 양이 회복하며 이때의 glycogen은 핵성숙과 더불어 소모된다. 3. Glycogen의 회복은 배양액내의 glucose 유무에 관계없이 이루어지며 따라서 이는 난자내 glucose 혹은 다른 전구물질에 의해 이루어지리라고 추측된다. 4. 결국 dbcAMP나 theophylline은 난자내 cAMP의 양을 증가시켜 glycogen의 소모를 일으키는 것으로 생각되며, glycogenolysis와 난자의 핵 성숙과정이 별개로 진행되기는 하지만 성숙의 요건은 일정량 이상의 glycogen이 함유되어 있어야 한다는 것을 알게되었다.

• The Korean Journal of Zoology
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• v.18 no.4
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• pp.181-196
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• 1975

Rabbit follicular oocytes were cultured in a basic medium containing 0.4% bovine serum albumin (BSA), carbohydrates and amino acids in various combinations. Osmolarity of the medium was maintained at 308 mOsm. The carbohydrates, pyruvate, lactate and glucose were all about equally beneficial, but not essential for rabbit oocyte maturation. Glutamine and proline, but not methionine or phenylalanine stimulated oocyte develoment. Glutamine stimulated more follicular oocytes to develop to prophase and metaphase II than did any of the three carbohydrates tested alone or in combination. Ammonia production after 24 hours of culture was highest in medium containing glutamine(15.2$\\mu$g/ml) but this was not inhibitory to maturation. Negligible amounts of ammonia were found with the other amino acids added. The optimum level of osmolarity for rabbit oocyte maturation appears to be ranged from 250$\\sim$310 mOsm with the maximum level of 270 mOsm. With 0, 0.08, 0.4, 2, 10 and 50 mM of glutamine in the medium, plus BSA but without carbohydrates, 30, 73, 70, 71, 59, 45% of the oocytes developed to prophase or metaphase II respectively. This indicates that no carbohydrate is required of the maturation of rabbit oocytes when 0.08$\\sim$2 mM of glutamine is included, which are the optimum range. Follicular oocytes could develop in the medium containing $^14 C$-glutamine and BSA but without carbohydrates or other organic compound. From the $^14 CO_2$ produced and TCA precipitable material isolated, it is suggested that glutamine probably is utilized by oocytes and cumulus cells as a source of energy as well as for protein synthesis.

• Proceedings of the Korean Society of Developmental Biology Conference
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• 2003.10a
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• pp.87-87
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• 2003

난자성숙 중 MPF활성은 MI 과 MII에서 최대로, MII로의 성숙 직후 난자를 핵이식에 이용하는 것은 핵과 세포질 사이의 reprogramming에의 효율을 높일 수 있을 것이다. 일반적으로 돼지의 IVF나 핵이식은 체외성숙후 44h에 이뤄지고 있다. 이는 aging을 낳을 수 있고 aging은 또한 발달능을 떨어뜨릴 수 있다. 따라서, 본 실험은 돼지의 체외성숙시간에 따른 체외성숙율과 단위발생후 체외발달율을 비교하여 최적의 체외성숙시간을 찾고자 실시하였다. 돼지 난포란을 10% pFF, 0.1mg/ml cysteine, 10IU/ml PMSG, 10IU/ml hCG, 10ng/ml EGF가 첨가된 TCM-199배양액에서 22, 30, 44시간 동안 배양하여 성숙을 유도하였다. 체외성숙이 야기된 난자는 난구세포를 제거한 후 전기자극(2.0kv/cm, $30 \mu s$) 후 5분 동안 TCM-199에서 세정하고 다시 4시간 동안 6-DMAP에서 배양된 후 4mg/ml BSA가 첨가된 NCSU-23에 넣어 $39^{\circ}C$, 5% $CO_2$배양기에서 각각 6-7일 동안 배양을 실시하였다. 체외성숙 22시간 성숙난자는 M I 44.3%(35/79)와 A I -T I 36.7%(29/79)로 81%가 M II로의 성숙에는 아직 미치지 못했다. 30시간 성숙난자는 46.3%(56/121)가 M II로 성숙하였고, M I과 A I -T I 은 각각 25.6%(31/121), 27 3%(33/121)이었다. 44시간 성숙난자는 78%(71/91)가 M II로 성숙하였고, M I 과 A I -T I 은 각각 12.1%(31/121), 7 7%(33/121)이었다. 단위발생율은 22시간에 난할율은 35.4%(75/137)이었고, 배반포 발달은 없었다. 30시간에 난할율은 51.8%(145/280)이었고, 배반포 발달율은 5.5%(8/145)이었다. 44시간에 난할율은 80.0%(244/306)이었고, 배반포 발달율은 14.3%(35/144)이었다. 본 연구결과 핵 및 세포질의 완전한 성숙은 44h에 이루어지고, 이에 따른 배발달율도 뒤따름을 알 수 있었다. 난자가 핵성숙의 완성에도 불구하고 완전한 활성을 위한 발달능은 갖지 못함을 알 수 있었으며, 질 좋은 배반포 생산을 위해 핵과 세포질 성숙의 synchronous가 중요하다 사료된다. 체외성숙을 위한 배양기술의 진전과 더불어 체외성숙 시간에 따른 세포질적인 기전에 대한 연구가 필요하다.

• Korean Journal of Animal Reproduction
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• v.19 no.4
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• pp.323-329
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• 1996

In vitro cultrue systems for the growth of sma-II oocytes and for meiotic maturation are expected to provide a new source of a large population of oocytes as well as assistance in basic physiological studies of oogenesis. Mouse oocytes mid-growth phase can complete grovvth and acquire full developmental capacity in vitro. On the other hand, growing pig oocytes need some other factors. FSH at a low concentration maintains the viability of both oocytes and granulosa cells, and hypoxanthine promotes the meiotic competence of the oocytes during culture period. Considerable improvement in the culture systems for growth of pig oocytes, suggested from mouse studies, and for oocyte maturation could help to develop this technology in larger species.

• The Korean Journal of Zoology
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• v.28 no.2
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• pp.99-107
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• 1985

In order to investigate the synergistic effect of dbcAMP and progesterone which are known as the agents to inhibit maturation of mammalian oocytes in vitro, the present studies were done and the results were obtained as follow: 1) if 10 $\\mug$/ml of dbcAMP or 2 $\\mug$/ml of progesterone was given into the medium, each of the agents at the concentration above did not give any inhibitory effect on the maturation of the mouse oocytes in vitro; 2) however, when the two agents at the concentration shown above were given together into the medium, the mouse oocytes were arrested at GV stage; and 3) the oocytes, precultured in the medium containing two agnts at the same concentration as above for four hours, resumed their maturation division upon transfer to the plain medium for the extended culture. Thus, it was found that dbcAMP and progesterone were capable to suppress the maturation of mouse oocytes at the suboptimal concentration when they were given together, and such inhibitory effect was reversible.

• Journal of Embryo Transfer
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• v.12 no.2
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• pp.127-132
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• 1997

본 연구는 rat에서 PMSG도는 FSH 처리에 의한 과배란 유도가 배란율과 수정란의 질에 미치는 영향을 알아보기 위해 호르몬 처리하고 교미시킨 후 4일령에 난관과 자궁을 세척하여 정상 8-세포기 난자와 비정상 난자를 조사하였고 각 처리에서 채란된 난자 중에 정상난자를 골라 체외 배양하여 발육율을 비교 평가하였다. 미성숙 rat에서는 평균19.1개의 수정란이 채취되었으며 성숙rat에서는 14.2개가 채취되었고 미성숙 rat에서는 성숙 rat에 비해 더 많은 비율의 비정상적인 난자가 회수되었다. FSH와 LH-RH에 의한 방법이 PMSG와 HCG에 의한 방법보다 유의성 있게 많은 난자를 배란시켰으며, 비정상란의 빈도도 낮은 것으로 나타났다. 그러나 호르몬 처리에 의한 두 가지 방법은 자연배란에 의한 방법에 비해 훨씬 높은 비정상난자의 배란을 유도하였다(FSH, 20.1%;PMSG, 41.2%;자연배란 13.4%). 또한 FSH처리에 의해 회수된 난자보다 체외 발육율이 높은 것으로 나타났다. 그러므로 rat에서 PMSG와 FSH를 이용하여 과배란을 유도할 수 있으나 배란된 난자의 비정상율은 자연배란에 비해 훨씬 높았고, 과배란 유도시 호르몬의 종류에 따라 체외 배양율에도 영향을 미치는 것으로 나타났다.

• Proceedings of the KSAR Conference
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• 2004.06a
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• pp.268-268
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• 2004

재래산양은 우리나라 고유의 유전자원으로서 첨단생명공학 연구에 매우 적합한 동물이다. 본 연구는 동물복제 및 형질전환동물 생산 등의 연구에 기초자료를 제공하고자 재래산양의 체내 및 체외유래 난자에 단위발생을 유도하여 회수난자의 조건, 활성화방법, 배양조건 등이 단위발생란의 체외발달율에 미치는 영향을 조사하여 최적의 배양조건을 확립하고자 실시하였다. 난자의 회수는 체중 15∼25 ㎏ 전ㆍ후의 성숙한 미경산 재래산양에 FSH와 PMSG를 사용하여 과배란을 유기하였다. (중략)

• Korean Journal of Animal Reproduction
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• v.25 no.3
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• pp.243-250
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• 2001

The objectives of the present study were to examine the relationship between catalase (0.1 mg/$m\ell$) and xanthine (5 mM) on in vitro maturation of porcine follicular oocytes. At 48 h after maturation, the proportions of oocytes matured to metaphase-II stage were significantly higher (P＜0.05) in the medium with control (72%), catalase (73%) or catalase plus xanthine (70%) than of oocytes cultured with xanthine (54%). On the other hand, oocytes cultured in medium with catalase and/or xanthine for 30 h were not significantly different in maturation rates (6~l4%). At 36, 42 and 48 h after culture, however, the maturation rates were significantly (P＜0.05) higher in medium with (49~70%) that than without (29~50%) catalase regardless of presence of xanthine. When the oocytes were cultured with periods prolonged in medium with and without xanthine, the maturation rates did increase with high proportions at 72 h of culture. No significant differences, however, were observed in maturation rates between groups with and without catalase. On the other hand, degenerated oocytes were increased with culture periods, the proportions was significantly (P＜0.05) lower in medium with (28%) than without (47%) catalase at 120 h of culture. However, there were no significant difffrences between with and without catalase in medium added xanthine. The parthenogenetic oocytes were observed from 72 h after culture in medium with xanthine, but were no significant differences between with and without catalase. From these results, it is indicated that porcine oocytes nay respond to maturation stimulus by 72 h of culture in medium with catalase and xanthine and that parthenogenesis can be obtained with prolonged culture periods.

• Journal of Embryo Transfer
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• v.21 no.1
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• pp.7-11
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• 2006

개 난자의 체외성숙과 체외수정을 통해 수정란을 획득하기 위하여 개 난소를 채취하여 난자의 형태, 난소의 채취시기 등이 체외성숙과 체외수정에 미치는 영향을 구명하기 위하여 수행하였다. 1. 난구세포 부착 및 미부착 난자를 48시간 배양했을 때 체외 성숙율은 $42.0{\pm}3.4%,\;24.4{\pm}4.1%$였다. 난구 세포 부착 난자의 체외 성숙율이 미부착 난자의 체외 성숙율보다 유의하게 높게 나타났다(p>0.05). 2. 난소를 휴지기, 난포기 및 황체기로 구분하여 난자를 회수하여 배양했을 때 체외 성숙율은 각각 35.6%, 50.0%, 31.1%였고 체외 발생율은 각각 2.2%, 20.0% 및 8.9%로서 난구 세포 부착 난자가 미부착 난자에 비해 유의한 체외 수정율을 나타냈다. 3. 난구세포 부착 및 미부착 난자를 이용하여 체외수정시켰을 때 체외 수정율과 체외 발생율은 각각 48.0%, 35.6% 및 22.5%, 13.3%로서 난구세포 부착 난자가 미부착 난자에 비해 유의하게 높게 나타났다.