• Development and Reproduction
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• v.1 no.1
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• pp.1-8
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• 1997

본 연구는 단순배양체계내 소 난포란의 성숙에 요구된는 탄수화물 (glucose, lactate와 pyruvate)을 검토하기 위해 수행하였다. GV(germinal vesicle) 단계의 난구세포로 둘러싸인 소 난자를 단백질, 아미노산 및 호르몬이 첨가되지 않은 modified Tyrodes (mT)에서 24시간, 5% $CO_{2}$ 배양기를 이용하여 성숙배양하였다. Glucose 무첨가군 (0-61%)에 비해 5.6mM의 glucose 첨가군 (71-74%)이 유의적으로 높은 (P<0.05) M-II단계로의 난자 발육을 나타내었다. Glucose를 함유한 배지내에서는 lactate(10mM0와 pyruvate(0.5mM)의 첨가에 따르는 M-II 단계로의 발육에 있어 차이를 보이지 않았다. 그러나 glucose 무첨가 배지에서는 pyruvate와 lactate를 첨가하는 것이 첨가하지 않은 것에 비해 condensed GV(76%vs. 0-2%), M-II, (43-61%vs. 0%)단계에 이른 난자수가 유의적으로 높았다. Glucose 함유 mT배지에 lactate와 pyruvate를 첨가하여 난자를 배양하였을 때, 동결융해 정자와 24시간 정치한 후 난자중 87-93%가 정자침투되었고 39-44%가 전핵단계로 발육하였다. 침투난자의 26-30%는 다정자수정이었다. 결론적으로, GV 단계의 소 난포란은 에너지원으로 lactate, glucose와 Pyruvate를 이용하지만, 감수분열 성숙을 유지하는데 glucose가 가장 효과적이다. 이 결과들로 보아 단순배양배지는 소 난포란의 체외성숙에 영향을 미치는 다양한 물질들을 연구하는데 잠재적으로 유용하다.

• Korean Journal of Animal Reproduction
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• v.25 no.2
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• pp.163-169
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• 2001

OSBA(oocytes-sperm binding assay) is a tool developed for rapid test of optimal condition of IVF medium and protein source by binding ability of mouse sperm and egg. Mouse oocyte-cumulus complexes were prepared by removing of the cumulus cells with 0.1% hyaluronidase. 10$\pm$2 oocytes per 30 ${mu}ell$ medium drop were inseminated with 3 ${mu}ell$ sperm suspension and were cultured f3r 3 hours and 24 hours, respectively. And the oocytes were recovered gently and the No. of sperm bound on oocytes were counted. In the Exp. 1, the ratio of oocytes bound with one sperm at least were 60.2%(50/83), 2%(2/77) and 100%(79/79) in the medium with no protein, FBS(15%, v/v) and BSA(0.4%. w/v), respectively, Fetal bovine serum(FBS) seriously inhibited sperm binding on oocyte, although bovine serum albumin(BSA) promoted the binding ability. The inhibiting effect of FBS was dependent on the concentration of FBS. The sperm binding ability according to oocyte maturity was tested in the Exp. 2. There was no significant difference between Met. II (mature) and Met. I (intermediate mature) oocytes in the number of oocytes bound with sperm and the number of sperm bound on oocytes. Finally, in Exp. 3, two batches of Ham's F10 medium with good and poor quality by OSBA were tested (The ratios of embryos developed from PN 1-cell stage to hatched blastocyst; 25% vs. 70%). In the medium with good quality, sperm binding ability was significantly increased (P ＜ 0.05). The ratio of oocytes bound with one sperm at least was 66% and 90% in the medium with poor and good quality, respectively. Conclusively, It was possible to test IVF medium condition rapidly and easily by OSBA.

• The Korean Journal of Zoology
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• v.30 no.1
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• pp.89-98
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• 1987

The research of fused oocytes was conducted to investigate the in vitro mejotic maturation of immature oocytes (GV oocytes) fused with oocytes in germinal vesicle breakdown (GVBD oocytes) in the presence of dbcAMP which is known as one of the strong inhibitors to GVBD. The immature oocytes fused together as well as those fused with GVBD oocytes proceeded to GVBD in 3 hr culture in plain medium. But in the medium containing dbcAMP (100$\mu$g/ml), the immature oocytes fused together did not show any GVBD and thus the fusion itself could not affect the inhibitory activity of dbcAMP. However, all of the immature oocytes fused with GVBD oocytes underwent GVBD in 3 hr culture despite of the presence of dbcAMP. When the culture was extended to 20 hr, nearly all of the immature oocytes fused together were still arrested at the GV stage in the presence of dbcAMP. But most of the fused oocytes which had shown GVBD during 3 hr culture developed to metaphase II stage extruding one or two polar bodies regardless of the presence of dbcAMP. In this experiment, it was found that two sets of the metaphase chromosomes were somewhat concomitant with a pair of the polar bodies in the fused egg. Upon the results of the present studies, it is assumed that there may be a maturation promoting factor(s) in the cytoplasm of the GVBD occytes, and this factor(s) possibly nullifies the function of dbcAMP.

• The Korean Journal of Zoology
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• v.22 no.4
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• pp.175-183
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• 1979

This simple culture device is based on the microtube culture method (Cho, 1974). The microtube culture system was placed in a plastic tube (Falcon, 12 $\\times$ 75 mm) and the transporting system used in the present study were Trans-Temp 310 (Royal Industries, 209 D 135-1). The simple culture device in the Trans-Temp 310 seems to be an available method for short term culture and some distance transportation of oocytes and embryos.

• The Korean Journal of Zoology
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• v.29 no.3
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• pp.181-189
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• 1986

The present study was undertaken to investigate whether the known adenylate cyclase activators, forskolin and cholera toxin, would affect the germinal vesicle breakdown (GVBD) and the production of cAMP in mouse oocytes in vitro. To do this, in vitro oocyte culture method and adenylate cyclase assay were employed. In response to different concentrations of forskolin (20 to 80 $\\mu$g/ml) added to a culture medium, the percentage of GVBD significantly decreased (56 to 31%) in a dose-dependent manner as compared to that of control (63%). This inhibitory phenomenon by forskolin was reversible since the rate of GVBD was returned to the control level when the oocytes were transferred to a control medium following exposure to forskolin (80 $\\mu$g/ml). Treatment of cholera toxin (10 to 1, 000 ng/ml) was, however, ineffective in suppressing GVBD. When forskolin (10 to 80 $\\mu$g/ml) was added to the mouse oocyte extracts, cAMP production significantly increased by 5 to 18 fold, whereas cholera toxin (10 to 1, 000 ng/ml) was no longer effective. In addition, treatment of guanidyl-imidodiphosphate (GppNHp, 100 $\\mu$M), which is an activator of the regulatory unit of adenylate cycleas, with forskolin did not exhibit any changes in cAMP production as compared to that induced by forskolin alone. Neither cholera toxin nor cholera toxin plus GppNHp (100 $\\mu$M) exhibited any differences in mouse oocytes. From the above results, the suppression of GVBD by forskolin may be mediated by a high level of intracellular cAMP in mouse oocytes. It appears that the changes in intracellular cAMP level may an important role in the mouse oocyte maturation.

• Journal of Embryo Transfer
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• v.22 no.2
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• pp.107-110
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• 2007

본 연구는 BPA 및 nicotine 첨가 농도와 배양 시간이 돼지 난자의 체외성숙에 미치는 영향을 조사하였다. $0.02{\sim}10.0mM$ BPA와 $0.5{\sim}10.0mM$ nicotine이 첨가된 TCM-199배양액에서 $40{\sim}52$시간 난자를 배양했을 때 체외성 숙율을 조사하였다. BPA농도가 높을수록 체외성숙율이 유의적으로 낮게 나타났다. $0.05{\sim}10.0nM$ BPA를 첨가한 TCM-199 배양액에서 난자를 44시간 배양했을 때 체외성숙율은 각각 $40.0{\pm}4.1%,\;24.0{\pm}4.7%,\;10.0{\pm}5.3%,\;6.0{\pm}3.2%,\;0.0{\pm}0.0%$로서 첨가 농도가 증가할수록 낮은 체외성숙율을 나타냈다. 난자를 $0.5{\pm}10.0mM$ nicotine를 첨가한 TCM-199 배양액에서 44시간 배양했을 때 체외성숙율은 각각 $44.0{\pm}4.5%,\;24.0{\pm}4.2%,\;18.0{\pm}4.9%,\;8.0{\pm}2.2%,\;0.0{\pm}0.0%$로서 대조군$(52.0{\pm}4.5%)$에 비해 낮은 체외성숙율을 나타냈다. 난자를 0.5 nM BPA와 2.5 mM nicotine을 첨가한 TCM-199에서 $40{\sim}52$시간 배양했을 때 체외성숙율은 $8.3{\pm}2.1%{\sim}26.0{\pm}3.9%$ 및 $11.2{\pm}2.2%{\sim}28.6{\pm}3.9%$로서, 44시간 배양이 다른 배양시간보다 가장 높은 체외성숙율을 나타냈다.

• Proceedings of the KSAR Conference
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• 2004.06a
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• pp.253-253
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• 2004

본 연구는 소를 이용한 체세포 핵이식에 있어서 탈핵전 demecolcine 처리 및 난자의 세포주기가 재구축배의 생산 및 발육에 미치는 영향을 검토하기 위하여 실시하였다. 도축장에서 회수한 난소로부터 채취한 미성숙란을 각 실험에 따라 성숙배양한 후 실험에 이용하였다. 난구세포 제거 후 일부 난자를 0.4 ㎍/㎖의 demecolcine이 함유된 배양액으로 40분간 처리하여 핵이식에 이용하였으며, 극체 미방출란 및 MI기 난자에 demecolcine을 처리하여 미성숙난자의 핵이식 이용 가능성을 검토하였다. (중략)

• Proceedings of the KSAR Conference
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• 2003.06a
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• pp.57-57
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• 2003

수정란의 체외생산(IVP)기술은 동물생산기술의 적용과 생리학이나 세포생물학의 기본 연구에 새로운 biotchnologies의 발생에 있어 매우 중요하고 흥미로운 사건으로서 여러 종류의 포유류에 적용되고 있다. 이러한 기술은 3가지의 절차를 밟아야 하는데 In vitro maturation(IVM), In vitro fertilization(IVF) 및 In vitro development(culture)(IVD)가 그것이다. 그런데 돼지는 다태동물로서 난소의 난포가 성장할 때 난포간 meiotic competence가 난자에 의하여 진행되므로 난포내의 난포액에 의하여 난자의 발육이 좌우된다고 보고 있다 돼지WP에 사용되는 난자는 난포의 직경이 3~5mm에서 수집하고 cumulus-oocyte complexes(COCs)의 형태에 따라 선택하는 것이 보편화되어 있다. 실험목적은 돼지 난소의 antral follicles이 성장할 때 크기에 의하여 oocyte meiotic competence의 방출에 어떤 영향을 주는지를 난자의 체외성숙과 체외수정 및 체외발육 비율을 각각 조사하여 미성숙 난자의 체외배양 기술을 개선할 목적이었다. 수행내용은 도축돈 난소의 난포크기별 3mm<, 3~5mm, 5mm)로 나누어, 다시 말해서 preantral stage, antral stage, postantral stage으로 구분하여 채취한 COCs를 IVM, IVF, IVC 상태에서의 COCs 형태, cell cleaved rate, developmental rate 등을 조사하였다.

• The Korean Journal of Zoology
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• v.36 no.1
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• pp.109-115
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• 1993

본연구는 북방산개구리 여포난자의 자발적 성숙과 관련된 몇가지 요인들에 대해 조사하였다. 자발적 성숙을 일으키는 여포에서 여포조직을 제거하여 denuded 난자를 만든다음 배양했을 때에는 자발적 성숙을 일으키지 않았다. 이들 denuded 난자에 frog pituitary homogenate(FPH, 0.05 gland/ml)를 처리하여도 역시 성숙이 일어나지 않았으나 progesterone(P4, 0.5 Ig/ml)을 처리하였을 때에는 성숙이 일어났다. 동면기간에 여포들이 생성하는 P4와 testosterone(T)의 양을 측정해본 결과 동면초에는 비슷한 양의 P4와 T를 생성하였으나 후기에는 P4만 생성하고 T는 거의 생성하지 않았다. 배양액에 estradiol을 첨가하면 농도에 의존하여 FPH에 의해 촉진된 P4의 생성을 억제할 뿐 아니라 성숙도 비가역적으로 억제하였다. 배양액에 첨가한 hvpoxanthine은 CAMP와 항진적으로 난자의 성숙을 억제하였다. 이러한 결과들은 자발적 성숙과정에 여포세포와 P4/T 비율의 증가가 중요한 요인이 된다는 것과 일반적인 난자성숙억제제는 자발적 성숙을 역시 억제한다는 것을 보여준다.

• Proceedings of the Korean Society of Developmental Biology Conference
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• 2003.10a
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• pp.137-137
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• 2003

난자의 체외성숙 및 체외배양에는 일반적으로 동물의 혈청을 기본배양액에 5-10% 정도 첨가한 배양액을 사용하고 있다. 그러나, 혈청으로부터 바이러스, 세균, 마이코 플라즈마 등에 오염될 가능성이 있기 때문에, 본 실험에서는 완전 무혈청 배양액에서 난자의 성숙, 배발생, 세포수, 동결성을 검토하였다. 도축된 한우의 난소로부터 채취한 난자는 선별하여 TCM199+10% FBS와 IVMD 101 배양액에서 22~24시간 동안 체외성숙시킨 후, IVF 100(일본, 펩티트연구소)으로 2회 세정한 후, 각각의 배양액 50${\mu}\ell$ 소적에 5개씩 5~6 시간 수정시켰다. 체외수정한 수정란은 TCM 199+10% FBS, IVMD 101, IVD 101 배양액에서 7~8일간 배양하여 배발생율을 조사하였다. 발생된 배반포의 일부는 세포수를 조사하였고 나머지 배반포는 1.8M EG로 동결하였다. (중략)