길항균을 생물 농약으로 개발하기 위해서는 저렴한 산업용 배지를 이용한 대량 생산 체계를 확립하는 것이 중요하다. 본 연구에서는 풋마름병 방제 효과가 뛰어난 Bacillus amyloliquefaciens SKU-78 균주의 배양조건을 확립하였다. 저가의 산업용 기질로는 콩가루와 옥수수 전분 배지가 균 생장에 가장 효과적이었고, 최초 pH 5.5, 배양 온도 $30^{\circ}C$, 교반속도 150-250 rpm의 조건으로 30 L fermenter를 이용한 배양에서 20 시간째에 최대 생균수($1.2{\times}10^{11}$ CFU/ml)에 도달하였다. 저가의 산업용 배지로 배양한 배양액을 관주 처리하였을 때 65%의 발병 억제 효과를 나타냄으로써 SKU-78 균주의 산업용 배지를 이용한 대량배양의 기초가 마련되었다.
Chitin 분해 활성이 높은 Streptomyces 균주들을 인삼재배 토양에서 분리하고, 그 균주들이 인상뿌리 썩음 병균인 Fµsarium solani 에 미치는 길항효과와 그 작용을 조사하였다. 분리된 Streptomyces 중 몇 균주는 F. solani 의 포자발아와 발 아판의 생장을 억제하였고 균사를 분해하였으며, 동시에 세포벽 분해효소로 알려친 Chitinase를 생산하였다. 그중에서도 S alboniger ST 59 와 S. roseolilacinus ST 129 는 길항효과가 아주 좋았는데, 병원균의 분생포자를 두 Streptomyces 의 농축배 양여액에 14일간 처리하였을 때 포지숫자가 처음 정종 정도의 20%로 줄어을였다. 특히 S. alboniger ST 59는 뱅균인 F solani의 분생포자, 균사 뿐만 아니라 분해되기 어려운 후막포자까지도 분해하였다. 이것으로 비푸어 보건데, F. solani의 이 Streptomycetes에 의한 억제작용은 항생물질에 영향을 받은 병균이 Chitinase에 의해 분해된 것으로 생각된다.
채소 등 작물의 부패균인 Erwinia carotovora subsp. carotovora의 생육을 억제하는 길항세균을 경작지 표토층으로부터 분리하고 배양조건에 따른 억제력변화를 조사하고, 길항관련 유전자의 소재를 확인하였다. 분리균들중 가장 우수한 억제력을 갖는 S4, S14, S65 균주를 최종 선발하고 Pseudomonas 근연종으로 동정하였다. 523 배지를 사용하여 배양조건에 따른 억제력 변화를 조사한 결과 배지초기 pH를 7-8로 조정하여 $30^{\circ}C$에서 3일간 배양하였을 때 가장 높은 억제력을 보였고, 배지성분중 탄소원으로 mannitol과 sorbitol, 무기염으로 CaCl2를 첨가했을 때 효과적이었으나 질소원에 대한 감수성은 낮았다.
An amino acid antimetabolite named YS-460 was isolated from the culture filtrate of a newly isolated Actinomycetes identified as Streptomyces sp. Fermentation was carried out in the synthetic medium at 30$\circ$C for 5 days. Purification was done by ion exchange resin, active carbon, silica gel column chromatography and obtained 38 mg of pure active substance per liter of the broth. YS-460, an amino acid like substance, has the molecular formula of C$_{7}$H$_{11}$NO$_{3}$- Its structure determined to be furanomycin by spectral analysis. It is active against some bacteria on a chemically defined medium and reversed competitively by L-isoleucine and non-competitively by L-leucine and L-valine.
A Streptomyces strain YS-943, which produced amino acid antimetabolite, was isolated from soil. During the course of screening for new amino acid antimetabolites from the culture broth of Actinomycetes, we found that the strain produced a substance active against Gram-positive bacteria and its activity was reversed by L-methionine and L-histidine on the synthetic minimal agar medium in the culture broth.The morphological and cultural characteristics serve to identify the producing organism strain YS-943 as the genus Streptomyces. Fermentation was carried out in the synthetic medium at 28$\CIRC$C for 48 hours. The fermentation yield reached about 12 mg per liter of the broth. The YS-943 substance was obtained as white powder, mp 194$\CIRC$C and has the molecular formular of C$_{4}$H$_{8}$N$_{2}$O$_{4}$. Its structure was determined to be o-carbamyl-D-serine by spectroscopic data. It is active against some Gram-positive bacteria and reversed by L-methionine and L-histidine.
In order to select multifunctional powerful antagonistic biocontrol agent against red-pepper rotting fungi Phytophthora capsici, we isolated an indigenous antagonistic bacterium which produces antifungal substances and siderophores from a local soil of Kyongju, Korea. The isolated strain was identified as Pseudomonas fluorescens biotype F. The antibiotic produced from P. fluorescens 2112 inhibited hyphae growth and the zoospore germination of Phytophthora capsici. The favorable carbon, nitrogen source and salts for the production of antibiotic from P. fluorescens 2112 were glycerol, beef extract and LiCi at 1.0%, 0.5% and 5 mM, respectively. And antagonistic activity of P. fluorescens 2112 was confirmed against P. capsici in vivo.
Pseudomonas synxantha A3으로부터 정제된 결정화 효소를 사용하여 몇가지의 성질을 검토하였다. 본 효소에 대한 nucleoside 관련물질의 저해관계를 검토한 결과, 그 중에서 adenine, 8-azaadenine, 2-methyladenine, guanine, 8-azaguanine에 의해서 강한 저해를 받는 것으로 나타났으며, caffenine에 의해서는 저해를 받지 않았다. Adenine과 guanine은 비길항저해제로서, 그 저해상수($K_i$)는 각각 0.037mM과 0.098mM 이었다.
Biocontrol of plant pathogens provides an alternative means of reducing the incidence of plant diseases without the negative aspects of chemical pesticides. Nowdays, as the resistant fungi about the chemical fungicides have revealed and the concern of environment has increased, the biological control of phytopathogenic fungi by the antagonistic microorganisms is very much indispensable. For the selection of strong antagonistic bacterium for biological control agent of rice leafblast and cucumber gray mold rot, the antifungal strain KL-3 strain was selected among 120 strains isolated from the rhizosphere soils. And the strain was identified to be a species of Bacillus subtilis or closely related strain. In several biochemical and in vitro antibiosis tests, antifungal substances of Bacillus sp. KL-3 were presumed heat stable, micromolecular antibiotic substances. In vivo test and vinyl house field test, the antifungal substances of Bacillus sp. KL-3 represented excellent biocontrol ability aganist Alternaria mali, Phyricularia oryzae, and Alternaria kikuchiana as well as broad spectrum of other fungi. In particular, Bacillus sp. KL-3 strain showed more predominant activity than some chemical fungicides against fungi shown to resist chemcal fungicides.
Agrochemicals for the plant-disease control are criticized severely for causing environmental pollution and residual problems, and consequently microbial disease control agents are expected to be safer and more economical for sustainable agriculture. Treatment of biological control agents to seed requires the use of effective delivery systems that allow full expression of the benefical qualities of the bioprotectant. For the activation and establishment of bioprotectant around the plant seed which are able protect the seeds and seedlings from pathogen attack, the optimal liquid coating formulation was obtained using 2% sodium carboxymethyl cellulose (binder), 20% sesame dregs (solid particulate material), and dried spore of Bacillus subtilis YBL-7 (bioprotectants, 10 mg/g of seed). Suppressive of root rot was demonstrated in pot trials with coated kidney bean (Phaseolus vulgaris L.) seeds. Coated seeds with B. subtilis YBL-7 spore in F. solani-infested soil reduced disease incidence by 85% to 90% after 30 days.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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