• Applied Microscopy
• /
• v.30 no.2
• /
• pp.193-204
• /
• 2000

Nowadays, mongolian gerbil is widely utilized in the research of brain and water deprivation because of congenitally incomplete Willis' circle, audiogenic seizure in low noise, and special cholesterol metabolism without water absorption for a long time. In this study, we intended to identify the time lapse changes in the general morphoogy and ultrastructure of the catecholaminergic neurons of mongolian gerbil brain in after long-term water deprivation. Fifteen mongolian gerbils were divided into 3 groups (5, 10, and 20-day water deprivation groups), each with 5 mongolian gerbils. Additional 5 mongolian gerbils which received water without limitation were used as a control. The brain sections were immunostained using tyrosine hysroxylase (TH), $ dopamine-\beta-hydroxylase$ (DBH), and phenylethanolamine-N-methyltrasferase (PMNT) antibodies. And immunoreactive cells were observed by electromicroscopy for the ultrastructural changes . The TH-immunoreactive (TH-IR) nerve cells were observed in the para- and peri-ventricular nucleus of the 3 rd ventricle in the hypothalamus and the substantia nigra. The number of TH-IR neurons in these areas was decreased from the 5th day of the water deprivation to the 10 th day and reincreased until 20 th day water deprivation. The shape and density of the dopamine-secreting cells identified by immunohistochemistry showed changes in the continuous water deprivation. Electron microscopy revealed a round nucleus in the neurons of control group but 5-day water deprivation group showed a dense and irregularly shaped nucleus. Also in the 5-day water-deprived group, mitochondria was decreased in number and junctins were disappered. Endoplasmic reticulum, Golgi complex did not show changes after water-deprivation. In this results, we can conclude that dopamine are involved in the water metabolism in mongolian gerbil, and mongolian gerbil could be used as an animal model for the researches of water deprivation.

• Korean Journal of Food Science and Technology
• /
• v.39 no.4
• /
• pp.438-446
• /
• 2007

The fermented soybean product, cheonggukjang, is favored by many people, partly due to its bio-functional ingredients. Since the fermentation process of cheonggukjang is mediated by enzymes, including proteases, produced by microbes, analysis of the proteome profile changes in cheonggukjang during fermentation would provide us with valuable information for fermentation optimization, as well as a better understanding of the formation mechanisms of the bio-functional substances. The soluble proteins from cheonggukjang were prepared by a phenol/chloroform extraction method, in order to remove interfering molecules for high resolution 2-D gel analysis. Proteomic analysis of the cheonggukjang different fermentation periods suggested that most of the soluble soy proteins were degraded into smaller forms within 20hr, and many microbial proteins, such as mucilage proteins, dominated the soluble protein fraction. The proteomic profile of cheonggukjang was very different from natto, in terms of the 2-D gel protein profile. Among the separated protein spots on the 2-D gels, 50 proteins from each gel were analyzed by MALDI-TOF MS and PMF for protein identification. Due to database limitations with regard to soy proteins and microbial proteins, identification of the changed proteins during fermentation was restricted to 9 proteins for cheonggukjang and 15 for natto. From de novo sequencing of the proteins by a tandem MS/MS, as well as by database searches using BLASTP, a limited number of proteins were identified with low reliability. However, the 2-D gel analysis of proteins, including protein preparation methods, remains a valuable tool to analyze complex mixtures of proteins entirely. Also, for intensive mass spectrometric analysis, it is also advisable to focus on a few of the interestingly changed proteins in cheonggukjang.

• Journal of Life Science
• /
• v.13 no.3
• /
• pp.324-332
• /
• 2003

The objective of this study was to examine if transient transfection of CAR can transactivate CYP2B1 PBRU reporter gene in COS cells in which the endogenous CYP2B1 gene is not induced by PB. In non-transfeced cells of both Hep G2 and COS, the endogeneous expression of CAR was not detected by antibody against CAR. When cultured cells were transfected with CAR expression plasmid, mCAR1-GFP, both cell types expressed high levels of CAR protein and could allow to examine the effect of CAR in PBRU transactivation. Both cell types expressed endogenous RXR and transfection of RXR expression plasmid dramatically increased its protein expression. Whereas CAR transactivated PBRU2C1Luciferase about 12 fold as compared to 2C1Luciferase in Hep G2 cells, it did not stimulate the luciferase activity of the PBRU reporter gene in COS cells. These results indicate that Hep G2 cells can respond to CAR differently from COS cells, and suggest that factors other than CAR and RXR may be required in inducing PBRU activation and the expression of these factors may be different between liver and kidney.

• Proceedings of the Korean Society for Food Science of Animal Resources Conference
• /
• 1995.11a
• /
• pp.1-48
• /
• 1995

식생활은 인간 생활의 주체이고 먹는다는 것은 그 수단이다. 그중 중요한 하나의 명제는 인간이 놓여진 여러 환경에서 어떻게 건강을 유지하고 그 개체가 소유하고 있는 능력을 최대치까지 생리적으로 성장 발전시킴과 동시에 최대한 수명을 연장시키기 위한 식물 섭취방법을 마이크로 레벨까지 해명하는데 있다. 인간은 일생동안 엄청난 양의 음식물을 먹는다(70세 수명일 경우 200만 파운드 즉 체중의 1,400배). 그러나 먹기는 먹되 자신의 건강과 장수를 위하여 어떤 음식을 어떻게 선택하여 어떻게 먹어야 하는 문제가 매우 중요하다. 최근 우리나라도 국민 소득이 늘면서 식생활은 서구화 경향으로 기우는 듯하다. 공해를 비롯한 수입식품 등 여러 가지 문제점이 제기됨에 따라 자연식과 건강식을 주장하는 소리가 높이 일고 있다. 그중에는 축산 식품이 콜레스테롤 함량이 다른 식품에 비하여 높게 함유하고 있다는 것으로 심혈관질환의 주범인양 무차별 강조하는 나머지 육식공포 내지는 계란 등의 혐오감 마저 불러 일으키는 경향까지 있는 듯하다. 따라서 본논고에서는 축산식품중의 콜레스테롤 함량수준이 과연 성인병의 주범인지 아니면 다른 지방산과 관련해서 올바르게 평가하고 그 문제점과 대책을 개관해 보고 요약하면 다음과 같다. 1. 사람은 유사이래 본능적으로 주변의 식물이나 동물의 고기를 먹고 성장하여 자손을 증식시키고 어느 사이에 늙으면 죽음을 맞이 하는 싸이클을 반복하면서 기나긴 세월동안 진화를 하여 오늘날의 인간으로서의 자태를 이루었다. 유인원과 같은 인류의 선조들은 수렵을 통해 육식을 많이 하였을 것이므로 인간은 원래 육식동물이 아닐까? 구석기시대의 유물을 보면 많은 뼈가 출토되고 “얄타미라”나 “라스코” 동굴벽화가 선명하게 묘사되고 있다. 2. 우리나라 선조 승구족의 일파가 백두산을 비롯한 만주 송화강 유역에 유입되면서 수렵과 목축을 주요 식품획득의 수단으로 식품문화권을 형성하면서 남하하여 한반도 민족의 조상인 맥족(貊族)으로 맥적(貊炙)이라고 하는 요리(오늘날의 불고기)를 먹었다는 기록이 있다. 3. 인간의 수명을 1900년대로 거슬러 올라가서 뉴질랜드가 세계최장수국(호주는 2위)로서 평균수명은 남자 58세, 여자 69세인 반면 일본과 한국은 당시 남자 36세, 여자 37세이던 것이 일본은 1989년에 이르러 세계 최장수국으로 등장했으나 1990년 당시 뉴질랜드${\cdot}$호주 등은 목축 및 밀(小麥) 생산국가였기 때문이라는 것과 일본은 오늘날 합리적인 식생활 국가라는 것을 간과해서는 안된다. 4. 우리나라 10대 사망원인중 (1994년도) 뇌혈관질환이 1위, 교통사고 2위, 암이 3위 순위로서 연령별로는 10~30대의 불의의 사고(교통사고), 40~60대는 암, 70대 이상은 뇌혈관질환이 가장 많다. 구미${\cdot}$일 7개국 정상국가들은 심질환 사망이 가장 높다. 5. 식생활의 변화에 있어서 우리나라는 주식으로 섭취해 왔던 곡류는 70년 대비 94년에는 0.7배 감소된 반면 육류 5배, 계란 2.4배, 우유는 무려 29.3배 증가되었다. 식생활 패턴이 서구화 경향으로 바뀌는 것 같다. 6. 71년도 우리나라의 지질섭취량은 국민 1인당 1일 평균 13.1g에 섭취에너지의 5.7%수준이었으나 92년도에는 34.5g으로서 총에너지 섭취량의 16.6%에 달하고 총섭취 지방질중 동물성 섭취 비율은 47%를 차지 한다. 국민 평균 혈청콜레스테롤 농도는 80년에 비해 88년에는 11%가 증가되었고 80년에 210mg/dl 이상 되는 콜레스테롤 혈증인 사람의 비율이 5%에서 88년에는 23%로 크게 증가했다. 7. 세계 정상국가들의 단백질 즉 축산식품의 섭취는 우리나라보다 적게는 2배, 많게는 6~7배 더 섭취하고 90년도 우리나라의 지질섭취량은 일본의 1/3수준에 불과하다. 8. 콜레스테롤은 인체를 비롯한 모든 동물체에 필수적으로 분포하고 있는 것으로 체내 존재하고 있는 총량은 90~150g, 이중 혈청콜레스테롤은 4%(6g)를 차지하고 있음에도 불구하고 이 아주 적은 콜레스테롤에 일희일비(一喜一悲) 논쟁은 60~70년 끄러오고 있다. 9. 콜레스테롤의 생체내 기능으로서는 (1) 세포벽의 지지물질 (2) 신경세포 보호막물질 (3) 담즙산의 합성 (4) 비타민 D의 합성 (5) 임신시에 반듯이 필요한 분자 (6) 기타 여러 가지 기능을 수행하는 것으로 필수적인 물질이다. 10. 우리가 식이를 통해서 섭취 콜레스테롤을 550mg정도를 섭취한다고 하더라도 이 정도의 양은 배설 소모되는 양과 거의 맞먹는 양이다. 피부와 땀샘에서 소실되는 양만도 100~300mg에 달하기 때문에 미국농무성에서 섭취량을 300mg로 제한하는 것은 무의미하다. 11. 콜레스테롤 운반체로서의 지단백질은 그 밀도가 낮은 것으로부터 킬로미크론(chylomicron), 초저밀도 지단백질(VLDL), 저밀도 지단백질(LDL) 및 고밀도 지단백질(HDL)으로 나누는데 LDL은 혈청콜레스테롤 중 약 70%, HDL은 약20%를 함유한다. 12. 혈중 콜레스테롤 수준에 영향을 미치는 요인을 열거하여 보면 다음과 같다. 1) 음식을 통해서 섭취되는 콜레스테롤 중 단지 10~40%정도가 흡수되고, 체내에서 합성되는 콜레스테롤이 증가할수록 식이콜레스테롤은 실제 혈청콜레스테롤 수준에 거의 영향을 미치지 않으므로 식이중함량에 대하여 공포를 느끼고 기피할 필요가 없다. 2) 고도불포화지방산, 단가불포화지방산, 포화지방산의 비 즉 P/M/S의 비가 균형되도록 권장한다. 3) 동맥경화를 비롯한 성인병의 원인이 되는 혈전증에는 EPA의 양을 높여줌으로서 성인병을 예방할 수 있다. 4) 오메가6지방산 아라키도닉산과 오메가3지방산인 EPA로 유도되는 에이코사에노이드 또는 프로스타노이드는 오메가6와 3지방산을 전구체로 하여 생합성되는 중요한 생리활성 물질이다. 5) 사람은 일반적으로 20세에서 60세까지 나이를 먹어감에 따라 혈중 콜레스테롤 수준이 증가하고 60세 이후부터는 일정한 수준을 유지하며 심장보호성 HDL-콜레스테롤은 감소하는 반면에 죽상경화성 LDL콜레스테롤은 증가한다. 6) 높은 HDL콜레스테롤 수준이 심장병 발생 위험요인을 감소시키는 기능을 갖고 있기 때문에 좋은 HDL이라 부르고, LDL은 나쁜 콜레스테롤이라 부르기도 하는데, 이것은 유전적 요인보다도 환경적 요인이 보다 큰 영향을 미친다. 7) 이것은 생활 형태와 영양섭취상태를 포함해서 개인적 생활패턴에 영향을 받는다. 8) 많은 실험에서 혈중 콜레스테롤 상승은 노년의 가령(加齡)에 적응하기 위한 자연적 또는 생리적인 세포의 생화학적이고 대사적인 기능을 위해 필수적일 수 있다는 것을 간과해서는 안될 것이다. 이 점으로 미루어 노년의 여성들을 위한 콜레스테롤 농도를 200mg/dl이 가장 알맞은 양이 아닌 듯하다. 9) 스트레스는 두가지 모양으로 유발되는데 해로은 스트레스(negative), 이로운 스트레스(positive)로서 긴장완화는 혈중 콜레스테롤 농도를 10% 떨어진다. 10) 자주 운동을 하는 사람들은 혈중 HDL콜레스테롤치가 운동을 하지 않는 사람보다 높다. 육체적인 운동의 정도와 혈중 HDL콜레스테롤 농도와는 정비례한다. 11) 흡연은 지방을 흡착시키므로 혈전증의 원이이 되며 혈관속의 HDL농도를 감소시킨다. 12) 에너지의 과잉섭취에 의한 체중 증가느 일반적으로 지단백질대사에 영향을 미치고, 간에서는 콜레스테롤 과잉 생산과 더불어 VLDL콜레스테롤의 LDL콜레스테롤 혈증을 나타냄으로 운동과 더불어 비만이 되지 않도록 하여야 한다. 13. 콜레스테롤 함량에 대한 조절기술 1) 식품의 우열을 평가할 때 단순히 동물성 또는 식물성 식품으로 분류해서 총괄적으로 논한다는 것은 지양되어야 한다. 이것은 그 식품에 함유하고 있는 지방산의 종류에 따라서 다르기 때문이다. 2) 인체의 원할한 기능 유지를 위해서는 P /M /S비율 뿐만 아니라 섭취 지방질의 오메가6 /오메가3계 지방산의 비율이 모두 적절한 범위에 있어야 하며 한두가지 지방산만이 과량일 때는 또 다른 불균형을 일으킬 수 있다는 점을 알아야 한다. 3) 닭고기는 오메가6지방산 함량을 높이기 위하여 사료중에 등푸른 생선이나 어분이나 어유를 첨가하여 닭고기는 첨가수준에 따라 증가됨을 알 수 있다. 4) 오늘날 계란내의 지방산 조성을 변화시켜 난황내의 오메가 3계열 지방산 함량을 증가시킨 계란의 개발이 활발해졌다. 14. 계란 콜레스테롤에 대한 소비자들의 부정적 인식을 불식시키고자 계란의 클레스테롤 함량을 낮추는 과제가 등장하면서 그 기술개발이 여러모로 시도되고 있으나 아직 실용 단계에 이르지 못했다. 15. 계란의 콜레스테롤 문제에 대한 대책으로서 난황의 크기를 감소시키는 방법에 대한 연구도 필요하다. 16. 계란 중 콜레스테롤 함량 분석치는 표현 방식에 따라서 소비자들을 혼란시킬 가능성이 있다. 또한 과거에는 비색법으로 분석했으나 오늘날은 효소법으로 분석하면 분석치에 상당한 차이가 있다. 17. 소비자의 요구를 만족시키고 버터 소비를 촉진시키기 위해 콜레스테롤을 감소시키는 물리적${\cdot}$생물학적 방식이 제안되어 있으나 현장적용이 가능한 것은 아직 없다. 18. 우리나라에서 이미 시판되고 있는 DHA우유가 선보였고 무콜레스테롤 버터의 경우 트란스(trans)형 지방산에 관해서는 논란의 여지가 많을 것이다. 끝으로 국가 목표의 하나는 복지사회 건설에 있고 복지국가 실현에는 국민 기본 욕망의 하나인 식생활 합리화가 선행되어야 한다. 소득이 늘고 국가가 발전해감에 따라 영양식${\cdot}$건강식 및 기호식을 추구하게 됨을 매우 당연한 추세라 하겠다. 우리의 식생활이 날로 향상되어 지난날의 당질 위주에서 점차 축산물쪽으로 질적 개선이 이루어진다는 것은 고무적임에 틀림없다. 이 축산물을 통한 풍요로운 식의 문화를 창출하면서 건강과 장수 그리고 후손에 이르기까지 번영하고 국가 경쟁력 강화에 심혈을 기우려야 할 때이다.

• Childhood Kidney Diseases
• /
• v.5 no.2
• /
• pp.164-175
• /
• 2001

Purpose : Alport syndrome is a hereditary nephrotic disease characterized by progressive nephrotic symptom, sensorineural hearing loss, ophthalmic abnormality, typical microscopic findings, and familial occurrence. In this study, we tried to find the risk factors related with its prognosis by taking a close observation on clinical symptoms of children with Alport syndrome reviewing retrospectively. Materials & methods : We chose children diagnosed as Alport syndrome in renal biopsy during 20 years(from 1980, Jan. until 1999, Dec.) who could receive follow up studies in tile department of pediatrics. They were divided into two groups by comparing renal function at the time of diagnosis and at current status. We compared several clinical aspects in them, and applied nonparametric test for statistical analysis. Results : The sex ratio(male:female) of 24 children was 3:1. The most common clinical symptom presented at their first visit was gross hematuria. Among those 24 children, 11 cases($46\%$) of progressing into chronic renal failure(Group II) were observed. Hypertension, proteinuria and edema were seen much frequently in group II. The level of serum protein, albumin, and creatinine clearance were decreased while BUN, creatinine were relatively increased. All the results were statistically significant. Conclusion Clinically significant risk factors related to prognosis in Alport syndrome were the presence of hypertension, edema, and proteinuria at the time of diagnosis. Also, the level of serum protein, albumin, BUN, creatinine, and glomerular filtration rate were proved to be important factors in predicting prognosis. We believe that studies on these possible risk factors would be of great help in treating and predicting prognosis of children suffering with Alport syndrome. (J Korean Soc Pediatr Nephrol 2001;5 : 164-75)

• Korean Journal of Microbiology
• /
• v.40 no.4
• /
• pp.342-347
• /
• 2004

A bacterial strain YC4963 with antifungal activity against Colletotrichum orbiculare, a causal organism of cucumber anthracnose was isolated from the rhizosphere soil of Siegesbeckia pubescens Makino in Korea. Based on physiological and biochemical characteristics and 16S ribosomal DNA sequence analysis, the bac­terial strain was identified as Pseudomonas aurantiaca. The bacteria also inhibited mycelial growth of several plant fungal pathogens such as Botrytis cinerea, Fusarium oxysporum and Rhizoctonia solani on PDA and 0.1 TSA media. The antifungal activity was found from the culture filtrate of this isolate and the active compound was quantitatively bound to XAD adsorption resin. The antibiotic compound was purified and identified as phenazine-l-carboxylic acid on the basis of combined spectral and chemical analyses data. This is the first report on the production of phenazine-l-carboxylic acid by Pseudomonas aurantiaca.

• KOREAN JOURNAL OF CROP SCIENCE
• /
• v.65 no.4
• /
• pp.406-415
• /
• 2020

Maize (Zea mays L.) is one of the most valuable agricultural crops and is grown under a wide spectrum of environmental conditions. However, maize is moderately sensitive to salt stress, and soil salinity is a serious threat to its production worldwide. In this study, we used ethyl methane sulfonate (EMS) to generate salt-tolerant silage maize mutants. We screened salt-tolerant lines from 203 M₃ mutant populations by evaluating the morphological phenotype after salt stress treatment and selected the 140ES91 line. The 140ES91 mutant showed improved plant growth as well as higher proline content and leaf photosynthetic capacity compared with those of wild-type plants under salt stress conditions. Using whole-genome re-sequencing analysis, 1,103 single nucleotide polymorphisms and 71 insertions or deletions were identified as common variants between KS140 and 140ES91 in comparison with the reference genome B73. Furthermore, the expression patterns of three genes, which are involved in salt stress responses, were increased in the 140ES91 mutant under salt stress. Taken together, the mutant line identified in our study could be used as an improved breeding material for transferring salt tolerance traits in maize varieties.

• Journal of Mushroom
• /
• v.14 no.4
• /
• pp.142-154
• /
• 2016

Worldwide production of mushrooms has been increasing by 10-20% every year. Recently, Pleurotus eryngii and P. nebrodensis have become popular mushroom species for cultivation. In particular, China exceeded 8.7 million tons in 2002, which accounted for 71.5% of total world output. A similar trend was also observed in Korea. Two kinds of mushrooms-Gumji (金芝; Ganoderma) and Seoji-are described in the ancient book 'Samguksagi' (History of the three kingdoms; B.C 57~A.D 668; written by Bu Sik Kim in 1145) during the Korea-dynasty. Many kinds of mushrooms are also described in more than 17 ancient books during the Chosun-dynasty (1392~1910) in Korea. Approximately 200 commercial strains of 38 species of mushrooms were developed and distributed to cultivators. The somatic hybrid variety of oyster mushroom, 'Wonhyeong-neutari,' was developed by protoplast fusion, and distributed to growers in 1989. Further, the production of mushrooms as food was 199,829 metric tons, valued at 850 billion Korean Won (one trillion won if mushroom factory products are included) in 2015. In Korea, the major cultivated species are P. ostreatus, P. eryngii, Flammulina velutipes, Lentinula edodes, Agaricus bisporus, and Ganoderma lucidum, which account for 90% of the total production. Since mushroom export was initiated in 1960, the export and import of mushrooms have increased in Korea. Technology was developed for liquid spawn production, and automatic cultivation systems led to the reduction of production cost, resulting in the increase in mushroom export. However, some species were imported owing to high production costs for effective cultivation methods. In academia, RDA scientists have conducted mushroom genome projects since 1997. One of the main outcomes is the whole genome sequencing of Flammulina velutipes for molecular breeding. With regard to medicinal mushrooms, we have been conducting genome research on Cordyceps and its related species for developing functional foods. There are various kinds of beneficial substances in mushrooms; mushroom products, including pharmaceuticals, tonics, healthy beverages, functional biotransformants, and processed foods have also became available on the market. In addition, compost and feed can likewise be made from mushroom substrates after harvest.

• Clinical and Experimental Pediatrics
• /
• v.52 no.2
• /
• pp.199-204
• /
• 2009

Purpose : Seizure associated with fever may indicate the presence of underlying inherited metabolic diseases. The present study was performed to investigate the presence of underlying metabolic diseases in patients with complex febrile seizures, using analyses of urine organic acids. Method : We retrospectively analyzed and compared the results of urine organic acid analysis with routine laboratory findings in 278 patients referred for complex febrile seizure. Results : Of 278 patients, 132 had no abnormal laboratory findings, and 146 patients had at least one of the following abnormal laboratory findings: acidosis (n=58), hyperammonemia (n=55), hypoglycemia (n=21), ketosis (n=12). Twenty-six (19.7 %) of the 132 patients with no abnormal findings and 104 (71.2%) of the 146 patients with statistically significant abnormalities showed abnormalities on the organic acid analysis (P<0.05). Mitochondrial respiratory chain disorders (n=23) were the most common diseases found in the normal routine laboratory group, followed by PDH deficiency (n=2) and ketolytic defect (n=1). In the abnormal routine laboratory group, mitochondrial respiratory chain disorder (n=29) was the most common disease, followed by ketolytic defects (n=27), PDH deficiency (n=9), glutaric aciduria type II (n=9), 3-methylglutaconic aciduria type III (n=6), biotinidase deficiency (n=5), propionic acidemia (n=4), methylmalonic acidemia (n=2), 3-hydroxyisobutyric aciduria (n=2), orotic aciduria (n=2), fatty acid oxidation disorders (n=2), 2-methylbranched chain acyl CoA dehydrogenase deficiency (n=2), 3-methylglutaconic aciduria type I (n=1), maple syrup urine disease (n=1), isovaleric acidemia (n=1), HMG-CoA lyase deficiency (n=1), L-2-hydroxyglutaric aciduria (n=1), and pyruvate carboxylase deficiency (n=1). Conclusion : These findings suggest that urine organic acid analysis should be performed in all patients with complex febrile seizure and other risk factors for early detection of inherited metabolic diseases.

• Journal of Institute of Control, Robotics and Systems
• /
• v.7 no.9
• /
• pp.717-722
• /
• 2001

This paper presents a methodology on the backward path tracking control of a trailer type robot which consists of two parts: a tractor and a trailer. It is difficult to control the motion of a trailer vehicle since its dynamics is non-holonomic. Therefore, in this paper, the modeling and parameter estimation of the system using a real-coded genetic algorithm(RCGA) is proposed and a backward path tracking control algorithm is then obtained based on the linearized model. Experimental results verify the effectiveness of the proposed method.