Kim, Ji-H.;Kim, Ki-Y.;Kwon, Kyoung-J.;Go, Seo-Y.;Min, Kyung-N.;Lee, Woo-S.;Park, Sue-N.;Sheen, Yhun-Y.
Biomolecules & Therapeutics
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제14권4호
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pp.240-245
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2006
The primary use for glycidol is as a stabilizer in the manufacture of vinylpolymers, however, it is also used as an intermediate in the production of pharmaceuticals, as an additives for oil and synthetic hydraulic fluids, and as a diluting agent is same epoxy resins. In this study, we have carried out in vitro genetic toxicity test of glycidol and microarray analysis of differentially expressed genes in response to glycidol. The result of Ames test showed mutations with glycidol treatment in base substitution strain TA1535 both with and without exogenous metabolic activation. Likewise, glycidol showed mutations in frame shift TA98 both with and without exogenous metabolic activation. The result of COMET assay in L5178Y cells with glycidol treatment showed DNA damage both with and without exogenous metabolic activation. Glycidol increased micronuclei in CHO cells both with and without exogenous metabolic activation. 150 Genes were selected as differentially expressed genes in response to glycidol by microarray analysis and these genes would be candidate biomarkers of genetic toxic action of glycidol.
본 연구에서는 고정화 UK를 이용한 융합단백질의 절단방응에 대해 UK의 고정화, 고정화 UK의 특성과 절단방응, 절단반응 후의 분리정제 그리고 고정화 UK으 재생에 대해 실험하였다. 고정화 수율은 99% 이상이였고 고정화 후의 효소활성은 80%를 유지하였다. 융합단백질 전단반응에서 액상 UK와 고정화 UK를 이용한 회분식 반응 모두 약 70%의 절단반응을 얻었고, 특히 고정화 UK의 사용시 부반응이 매우 낮은 이점이 있었다. 컬럼식 절단반응에서는 기절의 주입속도에 따라 절단수율은 크게 변화하였다. 최적의 유속은 50%의 절단수율을 얻은 1 bed volume/h로 설정하였다. 고정화 효소반응의 이점인 안정성과 반복사용 측면에서는 액상 UK 대비 고정화 UK가 높은 열안정성을 보였고 낮은 pH에서는 10% 이상 높은 활성을 유지하였다. 반복사용을 위해 6M GuHCl을 사용하여 인위적으로 풀림, 재접힘을 한 경우 98%의 활성을 얻음으로 타당성이 있음을 제시하였다. 또한 목적 단백질의 분리를 위하여 산침전 후 expanded bed adsorption 크로마토그래피를 이용함으로써 연속화된 고수율의 정제공정을 가능하게 하였다. 이러한 고정화 UK를 이용한 절단방응 및 정제시스템을 구축함으로써 융합단백지의 생산공정에 매우 유용하게 사용될 것으로 생각되어진다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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