본 연구에서는 다양한 생리활성이 보고된 폴리페놀 화합물인 EGCG의 화학안정성, H2O2 생성능 및 세포독성에 대하여 다양한 항산화제와의 조합에 의한 변화를 분석하였다. EGCG는 생리적 조건에서 갈색화합물로 산화되면서 불안정화되는데, catalase를 제외한 각종 항산화제제 SOD, ascorbic acid, NAC 및 GSH는 EGCG 갈색산화물의 생성을 유의적으로 저해하였다. EGCG에 의해 생성되는 $H_2O_2$는 catalase에 의해 거의 완벽하게 제거되었으며, SOD와 NAC에 의해서도 유의적으로 감소하였다. 하지만 GSH 및 고농도의 ascorbic acid의 존재 시 오히려 $H_2O_2$ 수준이 증가하는 현상을 나타내었다. EGCG의 HeLa 및 HT-29 세포에 대한 독성은 catalase, SOD 및 NAC 등과 같은 항산화제 존재 하에 유의적으로 감소하였고 NAC에 의한 EGCG 세포독성의 감소는 첨가된 NAC의 농도 증가에 따라 더욱 두드러졌다. 그러나 GSH 존재하에 EGCG의 독성은 GSH와 EGCG농도에 따라 다른 조절 양상을 나타내었으며, ascorbic acid에 의해서 EGCG의 세포독성이 약간 증가하는 현상을 나타내었다. 본 결과는 EGCG와 함께 처리된 다양한 항산화제들이 ROS의 소거 뿐만 아니라 EGCG 화학안정성 등 다른 요인에 영향을 미칠 수 있으며, 항산화제의 존재 하에 변형된 EGCG활성에 대해 ROS관련 기작 외에 다양한 요인들에 대한 고려가 함께 이루어져야 함을 시사한다.
The inhibitory effects of (-)-epigallocatechin gallate (EGCG), a major compound of green tea, on the development of locomotor sensitization, conditioned place preference (CPP) and dopamine receptor supersensitivity induced by the repeated administration of morphine were investigated in mice. A single administration of morphine produces hyperlocomotion. The repeated administration of morphine develops sensitization, a progressive enhancement of locomotion, which is used as a model for studying the craving and drug-seeking behaviors characterizing addiction, and CPP, which is used as a model for studying drug reinforcement, respectively. EGCG inhibited morphine-induced hyperlocomotion, sensitization and CPP. In addition, EGCG inhibited the development of postsynaptic dopamine receptors supersensitivity, which may be an underlying common mechanism that mediates the morphine-induced dopaminergic behaviors such as sensitization and CPP. Apomorphine (a dopamine agonist)-induced climbing behaviors also were inhibited by a single direct administration of EGCG These results provide evidence that EGCG has anti-dopaminergic activity, as inhibiting the development of dopamine receptor supersensitivity and apomorphine-induced climbing behaviors. Therefore, it is suggested that green tea may be useful for the prevention and therapy of these adverse actions of morphine.
배경: 혈관내막과다증식은 혈관평활근세포가 내막에서 과다증식하여 나타나며, epigallocatechin-3-gallate(EGCG)는 혈관평활근세포의 증식을 억제하는 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 따라서 EGCG는 혈관내막과다증식을 억제할 수 있을 것으로 생각된다. 대상 및 방법: 다른 농도의 EGCG를 포함한 배양 배지에서 인간제대정 맥내피세포(HUVEC)와 쥐대동맥평활근세포(RASMC)를 배양하고, 세포증식과 이동속도를 측정하였다. 20마리의 개의 양측 경동맥에 자가경정맥을 이식하였으며, 실험군(n=10)에 대해서는 정맥도관을 이식 전 30분간 EGCG용액에 보관하였으며, 이식 후 300mM의 EGCG를 혈관주위에 도포하였다. 6주 후에 경정맥이식편의 내막과 중간막의 두께를 측정하였다. 결과: 내피세포와 혈관평활근세포의 증식은 EGCG에 의해 억제되었다. 혈관평활근세포의 이동성은 EGCG에 의해 억제되었으나, 내피세포의 이동성은 영향을 받지 않았다. 동물실험 결과 대조군에 비해 EGCG군에서 내막의 두께가 얇았으며(p<0.05), 중간막의 두께는 두 군간에 차이가 얼었고, 내막/중간막의 두께비는 EGCG군에서 낮게 관찰되었다(p<0.05). 결론: EGCG는 혈관수술 후 혈관내막과다증식을 억제하는 효과가 있으며, 이는 혈관평활근세포의 증식 및 이동을 억제하여 효과를 나타낸다고 생각된다. 따라서 EGCG는 혈관내막과다증식을 예방하는 치료에 효과적으로 사용될 수 있을 것으로 생각된다.
A facile and convenient method was developed for the mass production of epigallocatechin gallate (EGCG) rich green tea extract (Er-GTE). The Er-GTE was successfully obtained from the crude water extract of green tea by the combination of two step purification, i.e., a simple adsorption process on the cation exchange resins (Trilite SCR-B) followed by the chromatography with Diaion HP-20 resins. The green tea extract produced by water extraction under $45^{\circ}C$ was subjected to adsorb on the strongly acidic cation exchange resin, Trilite SCR-B. The eluate passed through the resin was reabsorbed on Diaion HP-20 resin, which was subjected to elute with a mixture of water and alcohol by conventional chromatographical manner. The EGCG content in Er-GTE was estimated above 97% by HP-LC analysis and the newly developed method was regarded as the most suitable and appropriate process for the mass production of epigallocatechin gallate rich green tea extract (Er-GTE).
The aim of this study was to evaluate the preventive role of epigallocatechin-3 gallate (EGCG, a derivative of green tea) in ischemia/reperfusion (I/R) injury of isolated rat hearts. It has been suggested that EGCG has beneficial health effects, including prevention of cancer and heart disease, and it is also a potent antioxidant. Rat hearts were subjected to 20 min of normoxia, 20 min of zero-flow ischemia and then 50 min of reperfusion. EGCG was perfused 10 min before ischemia and during the whole reperfusion period. EGCG significantly increased left ventricular developed pressure (LVDP) and increased maximum positive and negative dP/dt (+/-dP/dtmax). EGCG also significantly increased the coronary flow (CF) at baseline before ischemia and at the onset of the reperfusion period. Moreover, EGCG decreased left ventricular end diastolic pressure (LVEDP). This study showed that lipid peroxydation was inhibited and Mn-SOD and catalase expressions were increased in the presence of EGCG. In addition, EGCG increased levels of Bcl-2, Mn-superoxide dismutase (SOD), and catalase expression and decreased levels of Bax and increased the ratio of Bcl-2/Bax in isolated rat hearts. Cleaved caspase-3 was decreased after EGCG treatment. EGCG markedly decreased the infarct size while attenuating the increase in lactate dehydrogenase (LDH) levels in the effluent. In summary, we suggest that EGCG has a protective effect on I/R-associated hemodynamic alteration and injury by acting as an antioxidant and anti-apoptotic agent in one.
The most abundant tea catechin, epigallocatechin-3-gallate (EGCG), has been reported to inhibit cell proliferation and induce apoptosis in many types of cancer cells. In the present study, effects of EGCG on the growth of oral epithelial cells including CAL-27 oral squamous carcinoma cells and dysplastic oral keratinocytes (DOK) were investigated. EGCG inhibited growth of CAL-27 cells and DOK with $IC_{50}$ of 14.4-21.0 and 5.8-14.2 ${\mu}M$ after 24 and 48 hr incubation, respectively. EGCG was significantly less effective in inhibiting DOK growth. The effects of EGCG, however, were dramatically less pronounced in the presence of superoxide dismutase (SOD) and catalase. Inhibitory effects of EGCG on CAL-27 cell growth were also much less pronounced in the presence of fetal bovine serum (FBS). EGCG induced caspase-3 activation in both CAL-27 and DOK cells in a serum free condition without SOD/catalase; in the presence of 10% FBS and SOD/catalase, EGCG, even at 100 ${\mu}M$, did not affect cell growth. The present results indicate that EGCG inhibited oral cell growth with higher potency to more malignant CAL-27 cells than DOK, and the effects were markedly altered by SOD/catalase and serum content in media.
Lee, Dong-Ha;Kim, Yun-Jung;Kim, Hyun-Hong;Cho, Hyun-Jeong;Ryu, Jin-Hyeob;Rhee, Man Hee;Park, Hwa-Jin
Biomolecules & Therapeutics
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제21권1호
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pp.54-59
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2013
In this study, we investigated the effect of (-)-epigallocatechin-3-gallate (EGCG), a major component of green tea catechins from green tea leaves, on activities of cyclooxygenase (COX)-1 and thromboxane synthase (TXAS), thromboxane $A_2$ ($TXA_2$) production associated microsomal enzymes. EGCG inhibited COX-1 activity to 96.9%, and TXAS activity to 20% in platelet microsomal fraction having cytochrome c reductase (an endoplasmic reticulum marker enzyme) activity and expressing COX-1 (70 kDa) and TXAS (58 kDa) proteins. The inhibitory ratio of COX-1 to TXAS by EGCG was 4.8. These results mean that EGCG has a stronger selectivity in COX-1 inhibition than TXAS inhibition. In special, a nonsteroid anti-inflammatory drug aspirin, a COX-1 inhibitor, inhibited COX-1 activity by 11.3% at the same concentration ($50{\mu}M$) as EGCG that inhibited COX-1 activity to 96.9% as compared with that of control. This suggests that EGCG has a stronger effect than that of aspirin on inhibition of COX-1 activity. Accordingly, we demonstrate that EGCG might be used as a crucial tool for a strong negative regulator of COX-1/$TXA_2$ signaling pathway to inhibit thrombotic disease-associated platelet aggregation.
Matrix metalloproteinases (MMPs) can degrade a wide range of extracellular matrix components. It has been reported that MMP-9 are activated after focal ischemia in experimental animals. (-)-Epigallocatechin-3-gallate (EGCG), a major constituent of green tea polyphenols, is a potent free radical scavenger and reduces the neuronal damage caused by oxygen free radicals. And it has been known that EGCG could reduce the infarction volume in focal brain ischemia and inhibit MMP-9 activity. To delineate the relationship between the anti-ischemic action and the MMP-9-inhibiting action of EGCG, we investigated the effect of EGCG on brain infarction and the activity of matrix metalloproteinase-9 induced by permanent middle cerebral artery occlusion (pMCAO) in ICR mice. EGCG (40 mg/kg, i.p. $15{\sim}30min$ prior to MCAO) significantly decreased infarction volume at 24 hr after MCAO. GM 6001 (50 mg/kg, i.p. $15{\sim}30min$ prior to MCAO), a MMP inhibitor, also significantly reduced infarction volume. In zymogram, MMP-9 activities began to increase at ipsilateral cortex at 2 hr after MCAO, and the increments of MMP-9 activities were attenuated by EGCG treatment. Western blot for MMP-9 also showed patterns similar to that of zymogram. These findings demonstrate that the anti-ischemic action of EGCG ire mouse focal cerebral ischemia involves its inhibitory effect on MMP-9.
녹차의 주성분인 에피갈로 갈레이트 (EGCG)는 건강에 이로운 효과로 나타내고 있는것으로 알려져 있어 많은 주목을 받고 있는 실정이다 본 연구에서는 처음으로 EGCG가, U87사람의 교세포에서 포스포리파제 D의 효소활성을 증가시킨다는 사실을 규명하였다. EGCG에 의한 포스포리파제 D의 활성화는 포스포리파제 C효소의 특이적인 억제제와 지질분해효소 활성이 억제제 포스포리파제 \gama1$의 변이체를 이용하여 실험한 결과 세포내 칼슘에 의존적인 양상을 보였주었다. 이러한 포스포리파제 D의 활성화는 아마도 칼슘 의존성 단백질 키나아제 II (CaM kinase II)를 통하여 일어나는것으로 여겨진다. 흥미롭게도, EGCG는 포스포리파제 \gama1$를 세포질에서 세포막으로의 이동을 유도하였으며, 포스포리파제 \gama1$와 PLD1의 결합을 유도하였음을 관찰하였다. 이상의 결과들을 종합하여 볼 때, EGCG가 사람의 교세포에서 포스포리파제 \gama1$-칼슘-CaM kinase II의 신호전달 경로를 통하여 포스포리파제 D의 활성을 유도하는 것으로 사료된다.
Eom, Dae-Woon;Lee, Ji Hwan;Kim, Young-Joo;Hwang, Gwi Seo;Kim, Su-Nam;Kwak, Jin Ho;Cheon, Gab Jin;Kim, Ki Hyun;Jang, Hyuk-Jai;Ham, Jungyeob;Kang, Ki Sung;Yamabe, Noriko
BMB Reports
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제48권8호
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pp.461-466
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2015
Epigallocatechin gallate (EGCG) and curcumin are well known to naturally-occurring anticancer agents. The aim of this study was to verify the combined beneficial anticancer effects of curcumin and EGCG on PC3 prostate cancer cells, which are resistant to chemotherapy drugs and apoptosis inducers. EGCG showed weaker inhibitory effect on PC3 cell proliferation than two other prostate cancer cell lines, LNCaP and DU145. Co-treatment of curcumin improved antiproliferative effect of EGCG on PC3 cells. The protein expressions of p21 were significantly increased by the co-treatment of EGCG and curcumin, whereas it was not changed by the treatment with each individual compound. Moreover, treatments of EGCG and curcumin arrested both S and G2/M phases of PC3 cells. These results suggest that the enhanced inhibitory effect of EGCG on PC3 cell proliferation by curcumin was mediated by the synergic up-regulation of p21-induced growth arrest and followed cell growth arrest. [BMB Reports 2015; 48(8): 461-466]
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[게시일 2004년 10월 1일]
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