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Physiological Regulation of an Alkaline-Resistant Laccase Produced by Perenniporia tephropora and Efficiency in Biotreatment of Pulp Mill Effluent

  • Teerapatsakul, Churapa;Chitradon, Lerluck
    • Mycobiology
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    • 제44권4호
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    • pp.260-268
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    • 2016
  • Regulation of alkaline-resistant laccase from Perenniporia tephropora KU-Alk4 was proved to be controlled by several factors. One important factor was the initial pH, which drove the fungus to produce different kinds of ligninolytic enzymes. P. tephropora KU-Alk4 could grow at pH 4.5, 7.0, and 8.0. The fungus produced laccase and MnP at pH 7.0, but only laccase at pH 8.0. The specific activity of laccase in the pH 8.0 culture was higher than that in the pH 7.0 culture. At pH 8.0, glucose was the best carbon source for laccase production but growth was better with lactose. Low concentrations of glucose at 0.1% to 1.0% enhanced laccase production, while concentrations over 1% gave contradictory results. Veratryl alcohol induced the production of laccase. A trace concentration of copper ions was required for laccase production. Biomass increased with an increasing rate of aeration of shaking flasks from 100 to 140 rpm; however, shaking at over 120 rpm decreased laccase quantity. Highest amount of laccase produced by KU-Alk4, 360 U/mL, was at pH 8.0 with 1% glucose and 0.2 mM copper sulfate, unshaken for the first 3 days, followed by addition of 0.85 mM veratryl alcohol and shaking at 120 rpm. The crude enzyme was significantly stable in alkaline pH 8.0~10.0 for 24 hr. After treating the pulp mill effluent with the KU-Alk4 system for 3 days, pH decreased from 9.6 to 6.8, with reduction of color and chemical oxygen demand at 83.2% and 81%, respectively. Laccase was detectable during the biotreatment process.

한천분해세균 Simiduia sp. SH-2 균주의 분리 및 β-agarase의 특성조사 (Isolation of Simiduia sp. SH-2 and Characterization of Its β-Agarase)

  • 이동근;김근대;이상현
    • 생명과학회지
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    • 제32권10호
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    • pp.778-783
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    • 2022
  • 본 연구에서는 해양 한천분해세균인 Simiduia sp. SH-2을 분리하여 생장과 agarase의 특성을 조사하였다. 경상남도 남해군 미조면 연안에서 채취한 해수를 Marine agar 2216 배지에 도말하여 한천분해활성을 보이는 SH-2 균주를 분리하였다. 선택된 SH-2 균주는 16S rDNA 염기서열분석을 통해 Simiduia sp. SH-2로 명명하였다. Simiduia sp. SH-2 균주의 배양액으로부터 한천분해효소를 획득하여 한천분해활성을 측정하였다. Simiduia sp. SH-2 유래 한천분해효소의 최고활성은 625 U/l로 나타났다. 한천분해활성은 40℃에서 최고치를 나타내었으며, 40℃에서의 활성을 100%로 하였을 때 20℃에서 31%, 30℃에서 71%의 상대활성을 나타내었다. 최적 pH는 pH 7.0으로 pH 7.0의 활성을 100%로 하였을 때 pH 6.0과 pH 8.0에서 각각 94%와 89%의 상대활성을 나타내었다. 한천분해효소는 20, 30℃에서 2시간 동안 열처리한 후에도 96%의 잔존활성을 나타내었고, 40℃에서 2시간 동안 열처리한 후에도 49%의 잔존활성을 나타내었다. Simiduia sp. SH-2는 neoagarotetraose 및 neoagarohexaose 등의 neoagarooligosaccharides를 생성하여 β-agarase를 생산하는 균주로 확인되었다. 따라서 Simiduia sp. SH-2 균주와 이 균주의 β-agarase는 식품, 화장품, 의약품 산업에서 기능성 소재의 생산자로서 유용하게 활용될 수 있을 것으로 기대된다.

고온성이며 호알칼리성인 Bacillus cereus B-13으로부터 내열성, 호알카리성 Cyclodextrin Glucanotransferase의 생산과 특성 (Production and Characterization of Thermo-alkalotolerant Cyclodextrin Glucanotransferase from Thermo-alkalophilic Bacillus cereus B-13)

  • 서승보;김재호;이대형;이종수
    • 자연과학논문집
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    • 제16권1호
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    • pp.15-29
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    • 2005
  • 내열성의 cyclomaltodextrin glucanotransferase (CGTase)를 이용하여 열에 안정한 싸이클린 텍스트린 (CD)을 생산하기 위하여 매우 높은 CGTase 활성을 보이는 고열성이며 호알카리성인 B-13세균을 분리하여 형태적, 생리학적 특성과 16S 리보솜 RNA 서열분석 등을 통하여 Bacillus cereus B-13으로 동정하였다. Bacillus cereus B-13 2% 가용성 전분, 1% 효모 추출물, 1% $Na_2CO_3$ 등을 함유하는 SYC 배지 (pH 8.5)에 접종하여 $50^{\circ}C$에서 24시간 배양하였을 때 최고의 CGTase 활성(130 U/ml)을 보였다. 또한 부분 정제된 CGTase의 작용 최적 온도와 pH는 각각 $60^{\circ}C$, pH 8.5-9.0 이었고 $80^{\circ}C$이하와 pH5.0-10.0에서 안정하였다. 1% 가용성 전분을 부분 정제한 CGTase와 작용시켰을 때 49%의 CD 수율을 보였다.

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EFFECTS OF AMMONIATED RICE STRAW FEEDING ON MICROBES AND THEIR FERMENTATION END-PRODUCTS IN THE RUMEN AND CAECUM OF SHEEP

  • Cann, I.K.O.;Kobayashi, Y.;Wakita, M.;Hoshino, S.
    • Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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    • 제6권1호
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    • pp.67-72
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    • 1993
  • Three sheep fitted with cannulas in the rumen and the caecum were used in a $3{\times}3$ Latin square design to study the changes in ruminal and caecal microbial populations and their metabolite composition with ammoniated rice straw feeding. The 3 diets contained either 80% untreated rice straw (UTS) or ammoniated rice straw (ATS) and 20% formula feed. These were a control diet (C), a urea supplemented diet (U) containing urea at 1.1% and an ammoniated rice straw diet (AT). Data were analyzed by analysis of variance and means separated by the Student Neumann Kuel's multiple comparison. AT feeding increased ruminal bacterial counts, in particular cellulolytic bacterial counts (p < 0.05) which were 1.8, 2.4 and 7.0 (${\times}10^6/ml$ ruminal fluid) for C, U and AT, respectively. There was an increasing tendency (p < 0.10) in ruminal fungal population with U; values were 2.0, 5.2, 3.1 (${\times}10^3/ml$ ruminal fluid) for C, U and AT, respectively. Ruminal protozoa counts were not significantly (p > 0.05) altered with diets. Caecal total viable bacterial count with AT was about thrice the value with C. Total VFA concentration in the rumen was significantly increased (p < 0.025) (7.7 mmol/dl for C and 8.2 mmol/dl for AT) and correspondingly, pH lowered when AT was fed. Sheep on AT tended to produce less acetate and more butyrate in the rumen without significance (p > 0.05). Similar to the rumen, total VFA concentrations of 4.4, 3.8 and 5.2 mmol/dl were detected, respectively, for C, U and AT. Caecal ammonia-nitrogen concentrations were about six-fold of that in the rumen, though there were no differences (p > 0.05) among treatments.

Iminodiacetic Acid 에 의한 희토류원소 용리현상에 관한 연구 (Study on the Elution Behaviors of Rare Earth Elements by Iminodiacetic acid)

  • 차기원;이종해
    • 대한화학회지
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    • 제29권2호
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    • pp.183-190
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    • 1985
  • 이온교환수지로 희토류원소들을 분리 하기 위해 용리액으로 iminodiacetic acid(IMDA)를 사용하였다. 용리액의 pH변화에 따른 음이온교환수지와 양이온교환수지에서 희토류원소들의 IMDA 화학종변화와 이들의 분리조건을 밝히고저 하였다. 희토류원소들의 가장 좋은 분리조건은 양이온교환수지에서 0.0301M IMDA의 pH를 8.00에서 9.00까지 단계적으로 변화시키면서 용리시켰을 때였고 용출순서는 원자번호순서와 일치하였다. 용리액의 pH변화에 따른 희토류원소와 IMDA간의 화학종 변화를 용리곡선과 자외선 흡수 스펙트럼으로 부터 추정하였다.

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심층 지하에서의 육가 크롬 환원 (Equilibria and Kinetics of Cr(VI) Reduction)

  • 현재혁
    • 지질공학
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    • 제3권2호
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    • pp.191-201
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    • 1993
  • 환원은 심층 지하처분되는 Cr(VI)의 양을 줄이는데 중요한 수단의 하나이다. 이 반응은 pH와 온도에 따라 민감하게 작용하며, 지하심층 처분장의 낮은 pH와 높은 온도는 토양 유기질, 높은 염소이온 농도와 더불어 Cr(VI)의 환원에 좋은 환경을 제공한다. 본 연구에서는 다양한 환경 조건에 따른 토양 유기질과 염소이온에 의한 Cr(VI)의 환원이 조사 되었다. aquifer와 aquitard 샘플은 각각 미국 루이지애나주 세인트 촬스군의 심층 처분장에서 채취되었다. 본 연구에서는 심층처분장을 대표하는 pH(-0.81~2.0), 온도($50^{\circ}C와{\;}70^{\circ}C$), 염소이온 농도(0, 0.26, 0.52 몰)를 이용하였다.

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A Highly Active Alpha Amylase from Bacillus licheniformis: Directed Evolution, Enzyme Characterization and Structural Analysis

  • Liu, Yihan;Fan, Shuai;Liu, Xiaoguang;Zhang, Zhimeng;Wang, Jianling;Wang, Zhengxiang;Lu, Fuping
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제24권7호
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    • pp.898-904
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    • 2014
  • The stability of Bacillus licheniformis alpha-amylase (BLA) under acid condition was enhanced through direct evolution using the error-prone polymerase chain reaction. One beneficial mutation site, H281I, was obtained in BLA. The specific activity of H281I was 161/352 U/mg, which was 62.6/27.5% higher than that of the wild-type (WT) (99/276 U/mg) at pH 4.5/6.5 and $95^{\circ}C$. The pH optimum for H281I was decreased about 1 unit, whereas no significant changes of optimum temperature and thermostability were observed compared with the wild type (WT). The $k_{cat}/K_m$ value of H281I was 1.7-/1.4-fold higher at pH 4.5/6.5, respectively, than that of WT. The structure model analysis indicated that the H281I mutation altered the predicted interaction between the amino acid residues at 281 and 273, thus creating a conducive local environment for substrate binding, as reflected by its decreased $K_m$, and consequently increased the specific activity.

유근피로부터 분리한 hederagenin 3-O-b-D-glucopyranosyl(1→3)-a-L-rhamnopyranosyl(1→2)-a-L-arabinopyranoside (HDL)의 항산화 효과 (Antioxidant Effect of Hederagenin 3-O-b-D-Glucopyranosyl(1→3)-a-L-Rhamnopyranosyl(1→2)-a-L-Arabinopyranoside (HDL) Isolated from Root Bark of Ulmus davidiana)

  • 봉진구;박윤엽
    • 생명과학회지
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    • 제20권2호
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    • pp.281-291
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    • 2010
  • 본 연구는 유근피(root bark of Ulmus davidiana)에서 분리한 화합물인 hederagenin 3-O-b-D-glucopyranosyl($1{\rightarrow}3$)-a-L-rhamnopyranosyl($1{\rightarrow}2$)-a-L-arabinopyranoside (HDL)을 이용하여 $CoCl_2$에 의해 생성된 ROS에 대한 항산화 기전을 밝히기 위하여, ROS 생성과 관련된 산화 효소 및 항산화 효소에 대한 저해효과를 조사하였다. 또한 HDL이 $CoCl_2$에 의해 생성된 ROS의 조절을 통해 산화적 스트레스와 관련된 단백질 발현 및 세포주기에 미치는 영향을 조사하였다. 그 결과 HDL은 $CoCl_2$에 의해 유발된 xanthine oxidase와 $H_2O_2$ 생성 증가를 억제하였고, 산화와 관련된 SOD, CAT의 활성을 증가시켜 $H_2O_2$의 가수분해를 촉진하였다. 그리고 HDL은 $CoCl_2$에 의해 유발된 ferritin의 손상과 ferritin iron의 방출을 억제하 였으며, 지질과산화의 증가를 억제하였다. 뿐만 아니라 HDL은 $CoCl_2$에 의해 증가된 G1 phase의 세포를 감소시켰으며, 세포주기와 관련된 p53 및 $p21^{CIP1/WAF1}$의 발현을 감소시켰다. 이러한 연구결과들은 HDL이 천연물로부터 유래한 독성이 없는 항산화제로서의 가능성을 제시한다.

Fomitopsis palustris의 균체 외 효소에 의한 볏짚 당화에 관한 연구 (Enzymatic Hydrolysis of Rice Straw, a Lignocellulosic Biomass, by Extracellular Enzymes from Fomitopsis palustris)

  • 김윤희;조문정;신금;김태종;김남훈;김영숙
    • Journal of the Korean Wood Science and Technology
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    • 제38권3호
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    • pp.262-273
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    • 2010
  • 갈색부후균인 Fomitopsis palustris에서 균체 외 cellulase 생산 특성과 이 효소를 이용하여 목재와 볏짚의 당화특성, mediator 첨가 효과, 목질기질의 미세 표면구조나 결정화도가 효소 당화에 미치는 영향 등에 대해 연구하였다. F. palustris의 균체 외 효소의 생산에 혼합목분을 탄소원으로 이용 시 endo-${\beta}$-1,4-gulcanase (EG)는 12.0 U/$m{\ell}$, ${\beta}$-glucosidase (BGL)는 116.68 U/$m{\ell}$, cellobiohydrolase (CBH)는 18.82 U/$m{\ell}$, 그리고 ${\beta}$- xylosidase (BXL)는 13.33 U/$m{\ell}$의 활성을 보였다. 이러한 활성은 BGL, CBH, 그리고 BXL이 볏짚을 이용한 경우보다 약 2~4배 정도 높았다. 볏짚을 탄소원으로 이용하여 생산한 cellulase-RS의 효소 최적반응 온도 및 pH는 $45^{\circ}C$와 pH 5.0이었으며, 혼합 목분을 탄소원으로 이용하여 생산한 cellulase-SW의 경우에는 $50^{\circ}C$와 pH 5.0이었다. Cellulase-SW는 볏짚을 기질로 사용할 때 $40.6{\pm}0.6%$로 가장 높은 당화율을 보였다. 또한 당화촉매제인 Tween 20의 첨가로 당화율이 44%로 상승하여 상용화 효소인 Celluclast 1.5L의 53.7%의 당화율 대비 약 82% 수준으로 상승되었다. 이는 본 실험에서 사용한 효소가 조효소 형태임을 고려하면 상용화 효소에 매우 근접한 당화율을 얻은 것으로 판단된다. 또한 볏짚의 낮은 조직 결정화도와 주사전자현미경을 이용한 볏짚 표면의 섬유화를 통한 표면적 증대 효과는 목재에 비해 높은 볏짚의 당화율에 대한 원인을 제시하였다.

완충 수용액 중 Aloesin의 전처방화 연구 (Preformulation Study of Aloesin in Buffered Aqueous Solutions)

  • 이윤진;곽혜선;전인구
    • 약학회지
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    • 제46권3호
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    • pp.168-173
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    • 2002
  • The physicochemical properties of aloesin, which has been recently found to reduce renal toxicity induced by cis-platin, were studied including solubility, partition coefficient ( $P_{c}$ ), osmolality, and stability. The solubility of aloesin was about 500 mg/mι, and the $P_{c}$ value for n-octanol/water was 1.01 $\pm$ 0.03. The degradation of aloesin followed the pseudo-first-order kinetics and was dependent on temperature, pH and ionic strength. From the pH-rate profile, the optimal pH was found to be 2.0~3.0. Some metal ions increased the degradation rate in the rank order of M $n^{2+}$ > F $e^{3+}$ > C $u^{2+}$ > F $e^{2+}$. On the other hand, other metal ions such as B $i^{3+}$, $Ba^{2+}$, Z $n^{2+}$, N $i^{2+}$, $Co^{2+}$ and $Mg^{2+}$ did not show the unfavorable effects. After autoclaving, aloesin contents remaining were 81.8~98.8% of initial concentrations depending on pH. The most stable pH was 3.98 in the autoclaving. Osmolality increased linearly as concentration increased.sed.creased.sed.