In the present study, we investigated the anti-inflammatory effects by Alopecurus aequalis Sobol on the lipopolysaccharide (LPS)-induced nitric oxide (NO) production by RAW 264.7 cell line. Consistent with these observations, DS reduced the LPS-induced expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and cyclooxygenase-2 (COX-2) at the protein levels in a concentration-dependent manner. In addition, the release of tumor necrosis factor-${\alpha}$ (TNF-${\alpha}$) and interleukin-6 (IL-6) were also reduced by DS. Moreover, LPS increased expression phosphorylation of $I{\kappa}B{\alpha}$, but DS showed inhibitory effect by reducing LPS-inducible p-$I{\kappa}B{\alpha}$ expression level. These results suggest that the down regulation of iNOS, COX-2, TNF-${\alpha}$, and IL-6 expression by DS are achieved by the downregulation of NF-${\kappa}B$ activity, a transcription factor necessary for pro-inflammatory mediators, and that is also responsible for its anti-inflammatory effects.
본 연구는 우리나라 야산에서 손쉽게 구할 수 있는 구황식물인 어성초를 이용하여, 시험관 내 실험 및 생체 내 실험을 실시하여 어성초의 면역증강제로서 가능성을 살펴보았다. 시험관 내 실험에서는 건조시켜 분쇄한 어성초를 메탄올로 추출한 후 극성에 따라 핵산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올, 물 순으로 계통추출하여 비장세포 증식능과 복강대식세포에 의한 사이토카인 분비능을 측정하였다. 그 결과, 비교적 극성이 높은 부탄을 분획물과 물 분획 물 첨가시에 비장세포 증식능이 250 $\mu\textrm{g}$/mL의 농도군에서까지 향상됨을 볼 수 있었다. IL-1$\beta$와 TNF- $\alpha$는 클로로포름과 물 추출물을 첨가했을 때 대조군에 비해 유의적으로 많은 양이 분비되었고, IL-6 는 에틸아세테이트, 부탄올, 물 층에서 대조군에 비해 유의적으로 향상되었다. 이들 세가지 사이토카인의 분비 수준은 모두 B 림프구를 자극하는 미토젠인 LPS보다는 높았으므로, B 림프구 자극 효과가 우수함을 확인할 수 있었다. 시험관 내 실험의 결과를 토대로 하여 2주간 격일로 어성초 열수 추출물을 마우스에게 직접 경구 투여하고 비장세포 증식능과 활성화된 복강 대식세포에 의한 염증성 사이토카인(IL-l$\beta$, IL-6, TNF- $\alpha$)의 분비량을 측정하였다. 그 결과 비장세포 증식능은 ConA와 LPS로 처리시 어서초 추출물을 500 mg/kg bw 농도로 투여 한 군에서 각각 최대의 비장세포 증식을 보였다. 활성화된 복강 대식 세포에 의한 사이토카인 분비량을 측정한 결과 500 mg/kg bw와 1000 mghg bw의 농도로 투여시 대조군에 비해 유의적으로 많은 양의 IL-6를 분비하였고, 500 mg/kg bw 투여군에서 대조군에 비해 많은 양의 TNF-$\alpha$를 분비하였다. 그러나, IL-1$\beta$의 분비량은 대조군에 비해 오히려 급격히 감소하는 것으로 나타나 어성초의 투여가 IL-$\beta$ 분비를 자극하지는 못하는 것으로 나타났다. 따라서 어성초 열수 추출물을 생체내에 적용시켰을 때 비장세포의 증식을 유도하고 복강 대식세포를 활성화시켜 IL-6와 TNF- $\alpha$의 분비를 촉진시키는 효과가 있는 것으로 나타났으며 , 적정 양은 500 mg/kg bw 정도인 것으로 사료된다. 비장세포 증식능과 복강 대식 세포 활성화를 통한 연구 결과에 의하면 어성초는 비교적 극성이 높은 용매에 용해되는 부분에 면역증강효과가 있는 물질이 함유되어 있는 것으로 판단된다. 따라서, 앞으로는 그 성분에 대한 순수 분리 및 이를 동정하는 연구가 계속적으로 이루어져야 할 것으로 보이고, 이는 식품소재개발에 있어서 중요한 기초 자료가 될 것으로 보인다.
CopA3를 이용하여 피부 염증에 대하여 연구를 하였다. 산화질소와 cytokine의 생산은 면역세포의 대표적인 염증인자이다. 세포는 LPS 처리 후 한 시간 뒤에 CopA3를 처리하였다. 세포 독성이 나타나지 않는 농도인 5, 25, 50, 100 ${\mu}g/ml$를 사용하였다. CopA3는 NO, TNF-${\alpha}$, IL-$1{\beta}$, IL-6, iNOS, COX-2의 생성을 저해 시켰다. iNOS와 COX-2 역시 100 ${\mu}g/ml$의 농도에서 각각 54%, 65%가 저해가 되었다. 게다가 CopA3는 염증성 사이토 카인인 TNF-${\alpha}$, IL-$1{\beta}$, IL-6의 생성을 감소 시켰다. 이러한 결과로 CopA3는 염증 예방과 치료에 효과적임을 확인 할 수 있었다.
사람 기관지 상피세포에 알러지 환경을 유발 하고자 사이토카인을 처리하여 TARC의 분비를 유도하고, 이 케모카인 분비에 반하(半夏) 약쇄액(藥鎖液)이 미치는 효과를 실험한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 사람의 기관지 상피 세포주에 각각 IL-4, TNF-${\alpha}$, IFN-${\gamma}$ 및 IL-$1{\beta}$를 처리하는 경우와 IL-4와 TNF-${\alpha}$, INF-${\alpha}$와 IFN-${\gamma}$, IFN-${\gamma}$와 IL-$1{\beta}$를 병용 처리할 경우 TARC의 분비량를 측정한 결과 IL-4와 TNF-${\alpha}$와 TNF-${\alpha}$와 IFN-${\gamma}$를 병용 처리하였을 경우 TARC의 분비량이 유의하게 증가하였다. 2. 반하(半夏) 약쇄액(藥鎖液) 처리군의 24시간 및 48시간에서 통계적으로 유의한 감소를 관찰할 수 있었다. 3. 반하(半夏) 약쇄액(藥鎖液)에 의한 TARC 분비억제를 관찰 한 결과 농도의존적인 분비 감소 효과를 관찰 할 수 있었다. 4. MTT assay법을 이용한 세포 독성 측정에선 대조군과 반하(半夏) 약침액(藥鍼液) 처리군간에 유의성이 없었으므로 50, 100 및 200${\mu}g/m{\ell}$의 농도에선 세포독성이 없었음을 관찰할 수 있었다. 이에 반하(半夏) 약광액(藥鑛液)은 TARC 케모카인 억제를 통해 천식에 대한 치료효과를 나타낼 수 있을 것으로 사려된다.
This study were designed to evaluate the anti-inflammatory effects of $genistein-4'-O-{\alpha}-L-rhamnopyranosyl-(1-2)-{\beta}-D-glucopyranoside$ (GRG) isolated from Sophora japonica (Leguminosae) on the lipopolysaccharide (LPS)-induced nitric oxide (NO) and prostaglandin ($PGE_2$) production by RAW 264.7 cell line. GRG significantly inhibited the LPS-induced NO and $PGE_2$ production. Consistent with these observations, GRG reduced the LPS-induced expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and cyclooxygenase-2 (COX-2) at the protein and mRNA levels in a concentration-dependent manner. In addition, the release and the mRNA expression levels of tumor necrosis $factor-{\alpha}\;(TNF-{\alpha})$ and interleukin-6 (IL-6) were also reduced by GRG. Moreover, GRG attenuated the LPS-induced activation of nuclear factor-kappa B ($NF-{\kappa}B$), a transcription factor necessary for pro-inflammatory mediators, iNOS, COX-2, $TNF-{\alpha}$ and IL-6 expression. These results suggest that the down regulation of iNOS, COX-2, $TNF-{\alpha}$, and IL-6 expression by GRG are achieved by the downregulation of $NF-{\kappa}B$ activity, and that is also responsible for its anti-inflammatory effects.
연구배경 : 급성폐손상의 병태생리학적 기전에는 염증세포들이 분비하는 다양한 염증성 매개물질들이 매우 중요한 역할을 한다. 이중 특히 tumor necrosis factor-$\alpha$ (TNF-$\alpha$) 는 다른 염증세포들의 화학주성 및 각종 염증성 매개물질 분비에 영향을 미치는 proin-flammatory cytokine으로 작용하는 한편, 직접적으로 세포손상을 야기시키는 세포독성 cytokine으로도 작용하는데, 급성폐손상에서 TNF-$\alpha$와 폐조직 손상과의 직접적인 관련성에 대해서는 아직 구체적으로 확인된 바가 많지 않다. 또한, 최근에 생체내 방어기전으로 스트레스 단백질에 대한 관심이 높아지면서, 단핵구에 내독소를 처치하거나, 동물에 내독소를 투여하기 전에 미리 스트레스 단백질을 합성시킨 경우, 내독소에 의한 손상을 감소시켜 준다는 연구가 보고되었지만, 내독소 자극 자체만으로 스트레스 단백질 합성이 유도되는지는 아직 분명하지 않다. 이에 저자들은 내독소 유도성 급성 폐손상에서 TNF-$\alpha$ 분비와 폐조직 손상을 포함한 일련의 염증반응과의 관계를 분석하고, 생체내 내독소 자극에 대하여 폐포대식세포에서 스트레스 단백질을 포함한 새로운 단백질 합성이 유도되는지 여부를 분석하고자 하였다. 연구방법 : 흰쥐의 기관내로 내독소를 투여한 후 시간별로 기관지폐포세척액내 TNF-$\alpha$농도, 염증세포 백분율 변화, 병리조직학적 소견을 관찰하고, 또한 각 시간대의 폐포대식세포에서 sodium dodesyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis와 inducible heat stress protein72에 대한 면역화학염색을 시행하여 단백질 합성양상을 분석하는 한편, 폐포대식세포에 다양한 농도의 내독소 자극과 열처리를 가한 후, 배양상층액에서 tumor necrosis factor-a 농도를 측정하고, 폐포대식세포의 단백질 합성양상을 분석하였다. 연구결과 : 내독소 투여 후 tumor necrosis factor-$\alpha$는 첫 1시간째부터 현저하게 증가하여 (p< 0.0001) 3시간째 최고치에 이르렀고 6시간째는 감소하기 시작하여 12시간째는 정상 대조군 수준으로 감소하였다. 내독소 투여 후 염증세포 백분율의 변화는 2시간째부터 시작하여 6시간째 최고에 이르러 12시간째까지 지속하였으며, 장시간째에 정상 대조군 수준으로 회복하였다. 병리조직학적 소견상 폐손상 지표 점수는 내독소 투여후 6시간째 최고치에 이르러 24 시간째까지 지속하였다. 내독소 투여 후 분리한 폐포대식세포에서 첫 1시간째부터 장시간째까지 정상 대조군에서는 관찰할 수 없던 35kDa의 새로운 단백질 띠가 관찰되었으며, 면역화학염색상 inducible heat stress protein72는 관찰되지 않았다. 내독소 자극을 가하지 않은 정상 대조세포군에 비해 내독소 자극을 가한 세포군의 배양상층액에서 tumor necrosis factor-$\alpha$ 농도가 유의하게 높았으며 (p<0.001), 내독소 자극만 가한 세포군에 비해 열충격 전처치후 내독소 자극을 가한 세포군의 배양상층액에서 tumor necrosis factor-$\alpha$ 농도가 10 ${\mu}g/ml$ 내독소 자극군만 제외하고 모두 유의하게 감소하였다 (p<0.05). 내독소 자극만 가한 세포군은 10 ${\mu}g/ml$의 고농도에서만 35 kDa 의 단백질 띠가 합성되었고 inducible heat stress protein72는 관찰되지 않았다. 열충격 전처치후 내독소 자극을 가한 세포군은 모두 inducible heat stress protein72가 관찰되었다. 결 론 : 기관내 내독소 투여에 의한 급성 폐손상에서 tumor necrosis factor-$\alpha$는 폐손상 정도와 밀접한 관련이 있다. 또한 내독소 자극에 의해서는 폐포대식세포에서 inducible heat stress protein72 합성이 유도되지 않으며, 35 kDa의 새로운 단백질 합성이 유도되었는데, tumor necrosis factor-$\alpha$ 농도 및 병리조직소견과의 관계를 볼 때, 급성 폐손상에 있어 35 kDa 단백질이 방어적인 역할을 담당하지는 않을 것으로 보이며, 이에 대해서는 향후 더 연구가 필요할 것으로 생각된다.
This study investegated the effect of Liriope platyphylla (LP) on allergic reactions and its mechanism of action. We investigated the effect of LP on Evans Blue (EB) extravasation induced by anti-dinitrophenyl (DNP)-IgE in rats. We tested whether the ethanol extract of LP reduced ear skin thickness and historical changes induced by topical application of 2,4-dinitrofluorobenzene (DNFB) to ears of mice. We evaluated compound 48/80-induced release of histamine in rats peritoneal mast cell (RPMCs). We also investigated the regulatory effect of LP on the level of inflammatory mediators in PMACI-induced human mast cell (HMC-1); cytokine IL-6, IL-8, TNF-${\alpha}$ in HMC-1, MAPKs (ERK, JNK and p38) in HMC-1. The ethanol extract of LP (81.3 mg/100 g body weight) significantly inhibited the PCA reaction compared with the control (P < 0.05). However, LP did not prevent topical applications of DNFB-induced ear skin thickening and histological changes. In RPMCs, histamine release induced by compound 48/80 was significantly attenuated by LP at $100{\mu}g/ml$ (P < 0.05). LP extract ($100{\mu}g/ml$) significantly reduced the PMACI-induced IL-6, IL-8, and TNF-${\alpha}$ secretion via inhibition of ERK phosphorylation in HMC-1. In conclusion, the ethanol extract of LP inhibited mast cell-derived, immediate-type allergic reactions, and the result suggest the potential of LP for preventing allergic inflammatory disorders.
방사선에 대한 방호와 면역기능 조절을 목적으로 새로운 생약복합조성물인 HemoHIM을 개발하였다. 식품 원료로 사용 가능한 생약재 3종 당귀, 천궁, 백작약의 에탄올 분획을 열수추출물에 첨가하여 HemoHIM을 제조하였다. HemoHIM의 항알레르기 효과를 검증하기 위하여 사람 비만세포주 HMC-1을 사용해 compound 48/80으로 유도되는 히스타민 분비량과 PMA/A23187로 유도되는 염증성 사이토카인의 분비량을 측정하였다. 히스타민의 양은 형광분석법으로, 염증성 사이토카인 IL-6, IL-8, TNF-$\alpha$, GM-CSF의 양은 효소결합 면역측정법으로 측정하였다. 저농도의 HemoHIM에 의해 히스타민 분비량이 억제되었고, 모든 농도에서 IL-6, TNF-$\alpha$, GM-CSF의 분비량은 억제되었지만 IL-8은 고농도에서만 억제되었다. 사이토카인의 mRNA 발현량은 HemoHIM의 농도 의존적으로 억제되었다. 그리고 c-kit와 Fc$\varepsilon$RI의 mRNA 발현량도 모든 농도에서 억제되었지만, tryptase의 mRNA 발현량은 저 농도에서만 억제되었다. 이상의 결과로 HemoHIM이 비만세포의 활성을 억제하는 효과가 있다는 것을 알 수 있었으며, 상대적으로 독성이 적은 항알레르기 제재로 개발할 가능성을 제시한 것으로 생각된다.
Background and Objectives : Allergic Contact Dermatitis is the disease affected by industrialization. The more industrialization advanced, the more materials that could induce the allergic contact dermatitis have been increased. Therefore in oriental medicine, various studies have been performed. The objective of this study is to investigate the effects of Naetakchunkeum-san on the Allergic Contact Dermatitis induced by 2,4-dinitro-chlorobezene(DNCB). Meterial and Methods : Twenty eight mice were divided into four groups ; normal, control, experimental group A and B. Control and experimental group were induced allergic contact dermatitis by DNCB. Experimental group A was orally administered the Naetakchunkeum-san and experimental group B was orally administered the prednisolone. In this study, ear thickness measurement, observation auricle microphotograph, Myeloperoxidase(MPO) activity measurement, Reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR) analysis of the mRNA level of $TNF-\alpha$, $IL-1\beta$, $INF-\gamma$ were performed on these four groups. In addition, the effect of Naetakchunkeum-san on cell viability and the effect of Naetakchunkeum-san on the compound 48/80-induced histamine release from HMC and RPMC were measured, Results : 1. In contact hypersensitivity assay, experimental group A and B showed decreased ear thickness compared with control group, 2. In experimental group A, pathological lesion of dermatitis were alleviated. In addition, the numbers of infiltrated cells were reduced, and cleft was not shown compared with control group, In experimental group B, similar results were shown. 3. There was a significant increase in MPO activity in control group compared with normal group, Experimental group A and B significantly inhibited the increase in MPO activity compared with control group. 4, The level of expression of $TNF-\alpha$, $IL-1\beta$, $INF-\gamma$ in experimental group A and B were significantly lower than those in control group. As the internal control, cyclophilin mRNA was also reverse-transcribed and amplified. 5, In MTT assay, there were no statistically significant differences in 100 ${\mu}g/ml$, 200 ${\mu}g/ml$, 500 ${\mu}g/ml$, 1000 ${\mu}g/ml$ Naetakchunkeum-san treated group from 0 ${\mu}g/ml$ Naetakchunkeum-san treated group as determined by the Tukey test. 6. Naetakchunkeum-san dose-dependently inhibited the compound 48/80-induced histamine release from both HMC and RPMC. Conclusions : According to above experiments, Naetakchunkeum-san may be applied to allergic contact dermatitis.
Lactobacillus casei 3260 (L. casei 3260) was evaluated in relation to the inflammatory response mediated by lipopolysaccharide (LPS)-induced nuclear factor-${\kappa}B$ (NF-${\kappa}B$) and cyclooxygenase-2 (COX-2) expression in Raw264.7 macrophage cells. The treatment of Raw264.7 cells with L. casei 3260 significantly inhibited the secretion of tumor necrosis factor-$\alpha$ (TNF-$\alpha$) and prostaglandins $E_{2}\;(PGE_{2})$, followed by suppression of COX-2. To clarify the molecular mechanism, the inhibitory effect of L. casei 3260 on the NF-${\kappa}B$ signaling pathway was examined based on the luciferase reporter activity. Although the treatment of Raw264.7 cells with L. casei 3260 did not affect the transcriptional activity of NF-${\kappa}B$, it did inhibit NF-${\kappa}B$ activation, as determined by the cytosolic p65 release and degradation of I-${\kappa}B{\alpha}$. Therefore, these findings suggest that the suppression of COX-2 through inhibiting the NF-${\kappa}B$ activation by LPS may be associated with the antiinflammatory effects of L. casei 3260 on Raw264.7 cells.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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