Use of a solid superacid (Nafion) in hydrolysis of rice straw was investigated focusing on the fermentability of the hydrolyzates by Pichia stipitis CBS 5776. Comparisons were made with the hydrolyzates produced by a conventional method of sulfuric acid treatment. The Nafion-catalyzed hydrolyzates of rice straw exhibited low level of inhibition for both cell growth and fermentation in comparison to the hydrolyzates produced by sulfuric acid. Pichia stipitis cells were able to produce ethanol by fermentation of Nafion-catalyzed hydrolyzates when the inoculum level exceeded 3.2 g dry cells/l.
The hydrolyzates of lignocellulosic biomass contain a mixture of glucose, xylose and cellobiose. The yeast which can produce ethanol efficiently from xylose and cellobiose was selected and its growth and ethanol formation behavior on each sugar and their mixture were investigated. Ethanol yields during batch culture of Pichia stipitis CBS 5776 were 0.4. 0.36 and 0.23 g/g substrate on glucose, xylose and cellobiose, respectively. Mixed sugar fermentation data indicate that glucose causes catabolite regulation on xylose and cellobiose utilization. However, xylose and cellobiose were utilized simultaneously. Ethanol yields on mixtures of sugars were generally additive for each of the substrates.
A study was conducted to investigate the characteristics of segregation and alcohol fermentation of intergeneric fusants. The protoplast fusion of both Pichia stipitis CBS 5776 and Saccharomycess cerevisiae STV 89 was carried out. The fusion frequency was $5\times10^{-8}$ and among fusants selected, a fusant F5 showed the best results in ethanol production by sucrose and xylose fermentations. The performance of xylose fermentation by this fusant was better than that of P. stipitis CBS 5776 and fusant F5 exhibited sucrose fermentation patterns intermediate to the two parent strains. The fusant F5 was segregated into a pair of parental strains during the several culture passages. In the average, 91$%$ of colonies had a similar characteristics of P. stipitis while 7$%$ of colonies resembled S. cerevisiae. Only 2$%$ of colonies had the characteristics of the original fusants. At the sixth passage, all segregants resembled P. stipitis. From these results it is suggested that intergeneric protoplast fusion led to an integration of S. cerevisiae genes, rather than whole chromosomes, within the entire genome of P. stipitis.
This study was carried out to optimize the fermentation conditions for direct alcohol fermentation of xylose by Pichia stipitis CBS 5776. The best cell growth and the ethanol production were obtained under 0.05 VVM aeration and 300rpm agitation at $30^{\circ}C$ using 100 g/l xylose medium of the initial pH 5.0. In the above condition, the maximum specific growth rate and maximum cell concentration were 0.14hr-1 and $1.3 \times109$ cells/ml, respectively. Pichia stipitis CBS 5776 also produced 40.2g/l ethanol utilizing about 96% of 100g/l xylose after 72hr fermentation. At this point, the overall volumetric ethanol productivity was 0.56g/1-hr and the ethanol yield was 0.42 g-ethanol/g-xylose consumed, which corresponds to 82% of the theoretical yield.
Production of biofuels and value-added materials from cellulosic biomass requires the development of a microbial strain capable of efficiently fermenting mixed sugars. In this study, the natural xylose fermenting yeast, Pichia stipitis, was evolved to simultaneously ferment cellobiose and xylose. Serial subcultures of wild-type P. stipitis in 20 g/l cellobiose were performed to increase the rate of cellobiose consumption. A total of ten rounds of the serial subculture led to the isolation of an evolved strain fermenting cellobiose significantly faster than the parental strain. The evolved strain displayed enhanced ethanol yield from 0 to 0.4 g ethanol/g cellobiose. The evolved P. stipitis simultaneously fermented cellobiose and xylose in batch fermentation. The genetic information of our evolved P. stipitis would be valuable in the development of a microbial host for the production of biofuels and biomaterials from cellulosic biomass.
The feasibility of separating Pichia stipitis from a fermentation broth using a hollow fiber membrane was evaluated. The permeate flux was affected by such parameters as cell concentration, pH, content of antifoam agents, suction pressure, and recirculation rate. A minor effect of temperature on the flux loss was also observed. A microcomputer-aided backflush was proven effective in alleviating membrane fouling and allowing long term separation of P. stipitis from a fermentation broth.
We investigated the feasibility of bioethanol production from hydrolysate of brown seaweed Sargassum sagamianum. Prior to bioethanol production using yeasts, six yeast strains were compared and the best ones in terms of the ethanol production levels were selected. Pichia stipitis ATCC 7126, Pichia stipitis ATCC 58784, and Pichia stipitis ATCC 58376 were superior to others in terms of ethanol production. These yeast strains were used for producing bioethanol by the shaking bottle culture and the fermentor culture. Out of approximately 30 g/L reducing sugar, about 3~6 g/L and 4~7 g/L bioethanol were produced in the bottle culture and the fermentor one, respectively. Furthermore, it was observed that around 12~28 g-bioethanol was produced from 1 kilogram of Sargassum sagamianum. Compared with those previously published, these data were almost three to eight times higher in value.
To increase the production of ethanol by using sugar from lignocellulosic biomass, pentose and hexose have to be fermented simultaneously by yeast. The effects of mixed sugar and nitrogen on ethanol production by immobilized Pichia stipitis KCCM 12009 were investigated. When optimal mixed sugar and nitrogen concentration were 5% (Glucose/Xylose = 3:1) and 1%, respectively, ethanol concentration produced by immobilized P. stipitis was 19-20 g/L. In repeated fed-batch by immobilized P. stipitis, all glucose was consumed very quickly at 1-3% mixed sugar concentration. But, xylose consumption was decreased as the mixed sugar concentration increased. Also, ethanol (5.6 g/L) was stably produced and ethanol production rate was 0.13 g/$L{\cdot}h$ in immobilized cell reactor (ICR) with 1% mixed sugar (Glucose/Xylose = 3:1) as feeding media.
The efficiency of acid, enzyme and microbial pretreatment of rice bran was compared based on the content of cellulose, hemicellulose, reducing sugars and xylose in the substrate. An isolate of Aspergillus niger or a strain of Trichoderma viride(MTCC 800) was employed for microbial pretreatment of rice bran in solid state. Acid pretreatment resulted in the highest amount of reducing sugars followed by enzyme and microbial pretreatment. A. niger showed a higher rate of hydrolysis than T. viride. The rice bran hydrolysate obtained from the different methods was subsequently fermented to ethanol either by Zymomonas mobilis(NCIM 806) or by Pichia stipitis(NCIM 3497). P. stipitis fermentation resulted in higher ethanol(37% higher) and biomass production($76{\sim}83%$ higher) than those of Z. mobilis. Maximum ethanol production resulted at 12h in Zymomonas fermentation, while in Pichia fermentation, it was observed at 60h. Microbial pretreatment of rice bran by A. niger followed by fermentation employing P. stipitis was more efficient but slower than the other microbial pretreatment and fermentation.
Glucose and xylose are the most abundant materials in nature which can be used to produce ethanol by yeast fermentation. Three combinations of cultivation with glucose and xylose were carried out; separated, co-culture, and sequential fermentation with Saccharomyces cerevisiae and Pichia stipitis. In the separated fermentation, S. cerevisiae fermented glucose to produce 14.5 g/l ethanol from 29.4 g/l glucose but hardly used xylose. However, P. stipitis utilized not only glucose but also xylose to produce ethanol 11.9 g/l and 11.6 g/l from 29.4 g/l glucose and 29.0 g/l xylose, respectively. In the mixture of glucose and xylose, P. stipitis fermented both sugars, producing 21.1 g/l ethanol while S. cerevisiae fermented only glucose, producing 13.4 g/l ethanol. In the co-culture and sequential fermentation, the co-culture showed more efficient ethanol productivity with 18.6 g/l ethanol than the sequential fermentation with 12.4 g/l ethanol. To investigate the effect of nutrients in the growth of microorganisms and ethanol production, yeast nitrogen base (YNB) was used in the sequential fermentation with S. cerevisiae and P. stipitis. YNB supplemented some nutrients which S. cerevisiae used up in the broth and the culture showed increased growth rate, increased consumption of xylose, and increased ethanol productivity producing 22.5 g/l ethanol from 54.6 g/l sugar with a yield of 0.41 g/g.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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