It has been demonstrated that vanadate causes nephrotoxicity. Vanadate inhibits renal sodium potassium adenosine triphosphatase (Na, K-ATPase) activity and this is more pronounced in injured renal tissues. Cardiac cyclic adenosine monophosphate (cAMP) is enhanced by vanadate, while increased cAMP suppresses Na, K-ATPase action in renal tubular cells. There are no in vivo data collectively demonstrating the effect of vanadate on renal cAMP levels; on the abundance of the alpha 1 isoform (${\alpha}_1$) of the Na, K-ATPase protein or its cellular localization; or on renal tissue injury. In this study, rats received a normal saline solution or vanadate (5 mg/kg BW) by intraperitoneal injection for 10 days. Levels of vanadium, cAMP, and malondialdehyde (MDA), a marker of lipid peroxidation were measured in renal tissues. Protein abundance and the localization of renal ${\alpha}_1-Na$, K-ATPase was determined by Western blot and immunohistochemistry, respectively. Renal tissue injury was examined by histological evaluation and renal function was assessed by blood biochemical parameters. Rats treated with vanadate had markedly increased vanadium levels in their plasma, urine, and renal tissues. Vanadate significantly induced renal cAMP and MDA accumulation, whereas the protein level of ${\alpha}_1-Na$, K-ATPase was suppressed. Vanadate caused renal damage, azotemia, hypokalemia, and hypophosphatemia. Fractional excretions of all studied electrolytes were increased with vanadate administration. These in vivo findings demonstrate that vanadate might suppress renal ${\alpha}_1-Na$, K-ATPase protein functionally by enhancing cAMP and structurally by augmenting lipid peroxidation.
1. 느타리버섯 중의 미토콘드리아는 설탕농도 44% 층에서 분리 정제되었다. 2. 파장 변화에 따른 미토콘드리아성 ATPase의 활성도는 580nm의 빛이 조사될 때 가장 크게 증가되었다. 3. 최적 파장 580nm의 빛 조사시간 변화에 따른 활성도는 10초 동안 조사하였을 때 가장 크게 증가하였다. 4. 최적 빛 조사 조건에서 이 효소의 최적 pH는 7.4, 최적 온도는 $60^{\circ}C$였다. 5. 최적 광 조건에서 얻은 이 효소는 $Fe^{3+}$, $Fe^{2+}$, $Ca^{2+}$, $Mg^{2+}$ 및 $K^{+}$ 이온에 의하여 활성화 되었으나 $Na^{+}$ 이온에 의해서는 억제되었다.
우라늄 피폭으로 발생하는 다뇨증과 급성 신부전증의 원인을 밝히기 위하여, 질산 우라늄을 정맥주사한 후 소변으로 배설되는 $Na^{+},\;K^{+}$의 전해질 양과 $Na^{+}-K^{+}$ adenosine triphosphatase($Na^{+}-K^{+}$ATPase) 활성도 변화를 측정하였다. 질산 우라늄 투여 24시간 이내에 $Na^{+},\;K^{+}$의 배설량이 크게 증가 하였고, 투여 3일 후에는 대조군과 비교하여 유의하게 감소하였다. 이때 $Na^{+},\;K^{+}$의 소변내 농도도 정상 대조군 범위 이하였다. 한편 $Na^{+}-K^{+}$ATPase활성은 투여 3일후에 고농도 질산 우라늄 투여 (30mg/kg BW) 시에만 감소 하였고, 저농도 투여군(5mg/kg BW, 15mg/kg BW) 에서는 활성 변화가 없었다.
본 실험에서는 HRF의 조절단백질을 알아보기 위해 HRF를 bait로 한 yeast two hybrid assay를 실행한 결과 해당과정에 관여하는 TPI(triosephosphate isomerase)라는 효소를 발견하였으며, 가장 많이 중복되어 있었다. In vitro에서 HRF는 TPI의 C말단 잔기 부근(아미노산 156-249)이 상호작용에 주로 관여하는 부위임을 알 수 있었다. 또한, HeLa 세포에서 immunoprecipitation을 이용하여 HRF와 TPI의 상호작용이 실제 in vivo에서도 일어나는 현상이라는 것을 밝혔다. 결과적으로 HRF와 TPI 상호작용은 세포내 일정량이 존재하며 여러가지 신호전달에 의해 동시에 Na,K-ATPase와도 상호작용하는 것으로 생각된다.
It is well-known that onion and garlic of Allium family have been cultivated for major food since ancient times. Especially garlic is known for containing protective materials against cardiovascular disease, neoplasm and cancer, and decreasing cholesterol value. Hemolytic anemia was first reported by Goldsmith in onion-fed cattle in 1909. Subsequently, similar effects have been reported in cattle, horses, sheep, dogs and cats. This toxic effect has been attributed to npropyl disulfide which causes oxidant damage to erythrocyte cell membrane. There are few reports on overconsumption of garlic. Kim et al. reported in 1999 that 45% of Jindo dogs in korea have erythrocytes characterized by high Na-K-ATPase activity with high K and low Na concentrations (HK) which easily results in hemolytic anemia. The purpose of present report is to determine whether garlic-induced hemolytic anemia occurs in normal erythrocytes characterized by complete lack of Na-K-ATPase activity with low K and high Na concentrations (LK) when LK dogs are fed large amounts of garlics. We found in this experiment that Erythrocyte count, PCV and Hemoglobin concentration decreased significantly, and GSH and Met-hemoglobin concentrations increased. Consequently, we determined that overconsumption of garlic induces hemolytic anemia in LK dogs.
It is well-known that onion and garlic of Allium family have been cultivated for major food since ancient times. Especially garlic is known for containing protective materials against cardiovascular disease, neoplasm and cancer, and decreasing cholesterol value. Hemolytic anemia was first reported by Goldsmith in onion-fed cattle in 1909. Subsequently, similar effects have been reported in cattle, horses, sheep, dogs and cats. This toxic effect has been attributed to n-propyl disulfide which causes oxidant damage to erythrocyte cell membrane. There are few reports on overconsumption of garlic. Kim et al. reported in 1999 that 45% of Jindo dogs in korea have erythrocytes characterized by high Na-K-ATPase activity with high K and low Na concentrations (HK) which easily results in hemolytic anemia. The purpose of present report is to determine whether garlic-induced hemolytic anemia occurs in normal erythrocytes characterized by complete lack of Na-K-ATPase activity with low K and high Na concentrations (LK) dogs are fed large amounts of garlics. We found in this experiment that Erythrocyte count, PCV and Hemoglobin concentration decreased significantly, and GSH and Met-hemoglobin concentrations increased. Consequently we determined that overconsumption of garlic induces hemolytic anemia in LK dogs.
Calcium-stimulated ATPase ($Ca^{2+}$-ATPase) which has optimal pH value at 7.0 was found in the membrane fraction of human milk, and its enzymatic properties were studied. The purified $Ca^{2+}$-ATPase required 0.45 mM Ca ion for maximal activity. Among the nucleosides, $Ca^{2+}$-ATPase showed a higher substrate specificity to ATP and UTP than to CTP and GTP. $Ca^{2+}$-ATPase had apparent Km value of 0.065, and V max of 7.63 mol ATP hydrolyzed/mg pro-tein per min, respectively. $Ca^{2+}$-ATPase was potently inhibited by lanthanide, vanadate, and p-chloromercuribenzoate, and inactivated by EDTA, and CDTA and EGTA, but were unaffected by N-ethylmaleimide, $NaN_3$, ouabain, or oligomycin, and was completely inactivated by heating at $60^{\circ}C$ for 10 min. This enzyme activity was concentrated in the membrane fraction of the cream and skim milk membrane, but not founded in bovine milk.
적출된 개구리 피부에서 $Na^+$이동, 산소소모량 및 Na-K-ATPase활성도에 대한 SITS(4-acetamido-4'-isothiocyano-2, 2'-disulfonic stilbene)의 영향을 연구하였다. 피부를 통한 능동적$Na^+$이동을 추정하기 위하여 short-circuit current(SCC)를 측정하였으며, 산소소모량은 피부조직 및 분리된 표피조직에서 측정하였으며, Na-K-ATPase활성도는 표피조직의 $24,000{\times}g$분획에서 측정하였다. 피부를 통한 SCC는 10 mM SITS가 피부외측용액에 첨가될 때 급격히 하강하였으며, 내측용액에 첨가될 때는 20분정도 지난후 하강하기 시작하였으나 그 하강정도는 전자에 비해 약했다. SITS에 의한 SCC억제현상은 용액내에 $Cl^-$이 없을때도 나타났다. SITS에 의하여 피부 및 표피조직의 산소소모량은 억제되지 않았으나 표피조직분획내 Na-K-ATPase활성도는 심하게 억제되었다. 이상과 같은 성적은 SITS가 개구리 피부에서 능동적 $Na^+$이동을 강력히 억제함을 나타내는데, 이러한 억제작용은 이 약물이 주로 상피세포의 외측막에 작용하여 나타나는 것으로 사료되지만 $Na^+$펌프를 억제할 가능성을 전연 배제할 수는 없다.
This study was undertaken to determine whether Scutellaria baicalensis Georgi (SbG) extract exerts the protective effect against $HgCl_2$-induced alterations in membrane transport function in rabbit renal cortical slices. The slices were treated with 0.1 mM $HgCl_2$ for 60 min at $37^{\circ}C$. $HgCl_2$ caused an inhibition in PAH uptake by renal cortical slices. Such an effect was accompanied by depressed $Na^+-K^+$-ATPase activity and ATP depletion. SbG prevented $HgCl_2$-induced inhibition of PAH uptake in a dose-dependent manner at the concentration ranges of 0.01-0.1%. $HgCl_2$-induced inhibition of $Na^+-K^+$-ATPase activity and ATP depletion were significantly prevented by 0.05% SbG. These results suggest that SbG prevents $HgCl_2$-induced alterations in membrane transport function in rabbit renal cortical slices. Such protective effects of SbG may be attributed to inhibition of peroxidation of membrane lipid.
$(Na^++K^+)-ATPase$은 ${\alpha}$ 와 ${\beta}$의 두 subunits로 구성되어 있으며, 분자량이 약 300,000 daltons 정도되는 것으로 보아 ${\alpha}_2{\beta}_2$의 형태로 존재할 것으로 알려져 왔다 한편, 사람 적혈구막에 있는 $Na^+,\;K^+\;Pump$는 glycolytic enzymes과 complex를 이루고 있으리라는 보고도 있다. 우리는 이 실험에서 in situ상태의 사람 적혈구막$(Na^++K^+)-ATPase$의 분자량을 측정하기 위하여, 소위 말하는 ‘Target theory’를 radiation에 의한 ouabain sensitive한 $\Na^+$이동과, intact한 cells과 ghosts에서의 ATP가수분해능력의 inactivation data에 적용하였다. Intact한 cells은 cryoprotective agent의 존재하에서, ghosts는 직접적으로 액화질소의 용기속에 담고 온도를 $-45^{\circ}C$에서 $-50^{\circ}C$로 유지시키면서 1.5 MeV의 electron beam으로 조사한 후에 Pump의 기능내지 효소의 활성도를 측정하여 radiation에 따르는 inactivation의 정도를 측정하였다. 이득 활성도는 radiation의 양에 따라 simple exponential function으로 inactivation되었으며, 이로부터 radiation sensitive volume(target size)를 계산하였다. Target size는 intact한 cells을 사용하였을 경 우$(Na^++K^+)-ATPase$나 $Na^+,\;K^+\;Pump$ 모두 600,000 daltons으로 계산되었으며, 이 값은 만약 cells을 strophanthidin으로 먼저 처치하고 측정하면 약 325,000 daltons으로 감소하였다. Ghosts를 사용했을 경우에도$(Na^++K^+)-ATPase$의 target size는 역시 약 325,000 daltons이었다. 이상의 결과로 미루어 보아 intact한 cells에서는 $(Na^++K^+)-ATPase/Na^+,\;K^+\;Pump$가 $(\alpha\beta)_2$의 dimer 상태로 존재하거나 혹은 $(\alpha\beta)_2$의 monomer에 glycolytic enzymes과 같은 다른 enzymes이 붙어 functional한 구조를 이루고 있는 것이 아닌가 사료된다. 또한 실헐성적은 이러한 dimeric association 혹은 heterocomplex association은 ghost를 만드는 과정에서나 strophanthidin의 처치로 부서질 수 있음을 암시하고 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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