Protoplasts of Pisum sativum L. were isolated and cultured from leaf mesophyll tissue. The successful yield of protoplast was obtained in an enzyme solution of 2% 'Onozuka R-10' and 2 % 'Macerozyme R-10' contained 6mM $CaCl_2{\cdot}2H_2O$ within 4 hours. They were divided in B5 culture medium supplemented with 2mg/l kinetin, 1mg/l 2, 4-D and 0.2% Difcobacto agar. Divisions of the protoplasts were continued and led to colony formation for 1 months. The colony from protoplasts of pea mesophyll tissue was formed to callus after subculture in a medium contained macronutrients and amino acids of BII medium and micronutrients and vitamins of B5 medium, and also supplemented with 2mg/l kinetin 2mg/l NAA.
Fumonisins are specific inhibitors of ceramide synthase in sphingolipid metabolism. An alteration in sphingolipid metabolism as a result of fumonisin exposure is related to cell death (Yoo et al., 1992). The objective of this study was to investigate whether elevated free sphinganine levels are related to the sensitivity of cultured cells to fumonisin exposure. Fumonisin $B_1$ elevated the intracellular free sphinganine concentraions in both LLC-$PK_1$ and Chinese hamster ovary (CHO) cells. However, CHO cells are resistant to fumonisin cytotoxicity at 50${u}m$, while LLC-$PK_1$ cells are sensitive at concentrations greater than 357M. The intracellular concentration of free sphinganine in LLC-$PK_1$ cells treated at 50${u}m$ fumonisin $B_1$ for 72 h was approximately 1450 pmol/mg protein relative to the 37 pmol observed in the control culture. Under the same conditions, the population of apoptotic cells in the 50${u}m$ fumonisin $B_1$-treated culture was approximately 37% of the total compared to 12% in the control. The caspase III-like activity after 72 h in the 50${\mu}$M fumonisin $B_1$-exposed culture Increased to approximately 50 $pmol/mg$ protein/hr compared to 6 $pmol/mg$ protein/hr in the control. L-cycloserine, a serine palmitoyltransferase inhibitory reduced the fumonisin $B_1$-stimulated caspase III-like activity down to the control level. Under the same culture conditions, the intracellular concentration of free sphinganine after-cycloserine plus fumonisin $B_1$ treatment was 140 pmol/mg protein compared to 1450 $pmol/mg$ protein in fumonisin $B_1$ alone. The intracellular concentration of free sphinganine in CHO cells treated with 50${u}m$ fumonisin $B_1$ for 72 h was al)proximately 460 pmol/mg protein, indicating that the mass amount of elevated free sphinganine in the CHO cells was about 32% of that in LLC-$PK_1$ cells. Adding exogenous sphinganine to the CHO cells along with 50${u}m$ fumonisin $B_1$ treatment for 72 h caused both necrosis and apoptosis. In conclusion, the elevated endogenous sphinganine acts as a contributing factor to the fumonisin-induced cell death.
Journal of the Korea Academia-Industrial cooperation Society
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v.20
no.10
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pp.62-67
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2019
We studied the effect of several sex-related steroid hormones (serotonin, progesterone and ${\beta}$-estradiol) for 6 days on the induction of sexual reproduction for the mass production of resting eggs in the marine rotifer Brachionus rotundiformis. The highest mix rate of 20.6% appeared with the ${\beta}$-estradiol ($E_2$) treatment on the third day. The number of resting eggs was highest with $E_2$ treatment, followed by that of the serotonin treatment group. In addition, we investigated the effect of the hormones on the expression pattern of the genes related to sexual reproduction in the rotifer. NrbP, SRY, Cyclin and MrpmB genes were up-regulated with all the hormone treatments. As a result, ${\beta}$-estradiol was more effective than the other hormone treatments to produce resting eggs in B. rotundiformis. We suggest that the sexual reproduction-related genes in the rotifer are the NrbP, SRY, Cyclin and MrpmB genes. Further study is required to determine the optimum concentration of $E_2$ for the effective production of resting eggs in the rotifer.
Ji-Hye Hong;Eun-Seo Jang;Myung-Chul Gil;Gye Won Lee;Young Ho Cho
Journal of Life Science
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v.33
no.6
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pp.471-480
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2023
This study was designed to evaluate the anti-inflammatory effects of Rumohra adiantiformis extracts fermented with Bovista plumbea mycelium (B-RAE) in LPS-stimulated RAW 264.7 cells. The total polyphenol and total flavonoid content of B-RAE were 379.26±7.77 mg/g and 50.85±3.08 mg/g, respectively. The results of measuring the antioxidant activity of B-RAE showed that it scavenges 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), 2, 2'-azino-bis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid (ABTS), and superoxide anion radical in a dose-dependent manner. B-RAE inhibited nitric oxide (NO) production in a dose-dependent manner without affecting cell viability. The gene expression of pro-inflammatory cytokines such as tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin-lβ (IL-1β), and IL-6 was measured using real time quantitative reverse transcription PCR (qRT-PCR). We found that, compared to the LPS-treated group, B-RAE significantly reduced the mRNA levels of the pro-inflammatory cytokines in a concentration-dependent manner. The expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and cyclooxygenase-2 (COX-2), the phosphorylation of transcription factors such as nuclear factor-κB (NF-κB), and the mitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling pathway proteins were assessed using Western blot analysis. We found that B-RAE significantly suppressed the expression of iNOS and COX-2, but their expression was increased by LPS treatment. In addition, the phosphorylation of NF-κB and IκB, which was increased by LPS treatment, was reduced with B-RAE treatment. The effect of B-RAE on the phosphorylation of the MAPK signaling pathway proteins was measured, and the phosphorylation of extracellular signal-regulated kinase (ERK) and the p38 MAPK proteins decreased in a dose-dependent manner, while the phosphorylation of c-Jun N-terminal kinase (JNK) increased. These anti-inflammatory effects of B-RAE may thus have been achieved through the high antioxidant activity, the inhibition of NO production through the suppression of iNOS and COX-2 expression, the inhibition of the NF-κB pathway, and the suppression of pro-inflammatory cytokine expression.
BACKGROUND/OBJECTIVES: Obesity is associated with chronic inflammation. The spleen is the largest organ of the lymphatic system and has an important role in immunity. Obesity-induced inflammatory responses are triggered by Toll-like receptor (TLR)-myeloid differentiation primary response 88 (MyD88) pathway signaling. Phenethyl isothiocyanate (PEITC) and 3,3'-diindolylmethane (DIM), major dietary glucosinolates present in cruciferous vegetables, have been reported to produce anti-inflammatory effects on various diseases. However, the effects of PEITC and DIM on the obesity-induced inflammatory response in the spleen are unclear. The purpose of this study was to examine the anti-inflammatory effects of PEITC and DIM on the spleen and their mechanism in high fat/cholesterol diet (HFCD)-fed C57BL/6 mice. MATERIALS/METHODS: We established an animal model of HFCD-induced obesity using C57BL/6 mice. The mice were divided into six groups: normal diet with AIN-93G diet (CON), high fat diet (60% calories from fat) with 1% cholesterol (HFCD), HFCD with PEITC 30 mg/kg/day or 75 mg/kg/day (HFCD+P30, HFCD+P75), and HFCD with DIM 1.5 mg/kg/day or 7.5 mg/kg/day (HFCD+D1.5, HFCD+D7.5). Enzyme-linked immunosorbent assay was used to evaluate pro-inflammatory cytokine secretion. Western blot and quantitative polymerase chain reaction were used to analyze protein and mRNA levels of nuclear factor kappa B (NF-κB) p65, interleukin 6 (IL-6), cyclooxygenase 2 (COX-2), TLR2, TLR4, and MyD88 in spleen tissue. RESULTS: Serum IL-6 levels were significantly higher in the HFCD group than in groups fed a HFCD with PEITC or DIM. Levels of NF-κB p65 protein and TLR2/4, MyD88, NF-κB p65, IL-6, and COX-2 mRNA were significantly higher in the HFCD group than in the CON group and were reduced by the PEITC and DIM supplements. CONCLUSIONS: PEITC- and DIM-supplemented diets improved splenic inflammation by modulating the TLR2/4-MyD88 pathway in HFCD-fed mice. We suggest that dietary glucosinolates may at least partially improve obesity-induced inflammation of the spleen.
To develop an effective utilization method of skipjack tuna viscera, fish meal by an improved fermentation method(FFMA) was prepared by fermentation of the solid materials separated from autoclaved viscera with Aspergillus oryzae for 72 hours and by adding the concentrated soluble extracts separated from autoclaved viscera to the fermenting solid materials during fermentation, and FFMA fish meal was compared with the fish meals prepared by Kato mathod(FFMN) and conventional nonfermenting method(NFM). FFMN fish meal was prepared by fermenting the solid materials separated from autoclaved viscera with Aspergillus oryzae for 17 hours without adding the soluble extract. The extracts from FFMA fish meal(FFMA-E) and raw viscera(RM-E) were also prepared respectively after digestion with proteases obtained from Bacillus subtilis and Aspergillus oryzae and compared with each other on the contents of free amino acids. The peroxide values decreased greatly in contents of $Vitamin\;B_{1},\;B_{2}\;and\;C$ significantly increased in FFMA fish meal compared with those of other fish meals. The total free amino acid content of FFMA-E was significantly higher then that of RM-E. The total free essential amino acid content also greatly increased in FFMA-E in which threonine, methionine and lysine showed remarkable increments. Almost all individual nonessential amino acids were higher in FFMA-E then in RM-E. The content of taurine, a nonprotein amino acid, greatly increased compared with other nonprotein amino acids in both extracts.
Journal of the Korea Academia-Industrial cooperation Society
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v.8
no.3
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pp.627-631
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2007
The factors affecting on sludge sedimentation are reported as F/M ratio, ingredient, composition of influent substrate, dissolved oxygen concentration, temperature, pH, filamentous bacteria and SRT. Aeration tank applying Bacillus sp. has an important role for maintaining the dominant microorganism species to make steady progress for spore growth affecting sedimentation. This research aims to investigate the affecting factor for the sedimentation in B3 system and RABC system with aeration tank applying tapered aeration. Extracellular polymeric substances(EPS), protein and carbohydrate can be produced for the extreme condition, that is down to 0.2 mg/L of dissolved oxygen in the aeration tank. This research found out the relation between the sedimentation and the EPS production, especially the ratio of protein/carbohydrate. The spore of Bacillus sp. was formed at the low DO then microorganisms produced EPS. The results showed that the production of EPS was 109.95 mgEPS/gSS at 1.6 mg/L of DO, however it was 131.77 mgEPS/gSS at 0.5 mg/L of DO. The sedimentation was affected by protein content in EPS and the ratio of protein and carbohydrate. The settleability of sludge was not affected by the ratio of protein/carbohydrate in B3 process, meanwhile settleability was affected by the ratio of it in RABC process, respectively.
This study was carried out to compare the dietary behaviors and the nutrient intake of a middle school and a high school girls in Iksan. The subjects consisted of 132 middle school girls and 122 high school girls in Iksan. The proportion of subjects eating meals irregularly was higher in the high school girls (98.6%) than in the middle school girls(78.7%). The proportion of subjects skipping a meal also was higher in the high school girls(61.5%) than in the middle school girls(53.8%) and most of them (65.8%) skipped breakfast though they thought breakfast was the most important meal of a day (87.4%). The subjects tended to overeat at lunch (38.6%), and at dinner (55.9%). The main reasons of skipping a meal were 1. They had no time (49.3%), and 2. They had poor appetite (24.7%) Mean daily energy intake was 2198.5Kcal in the middle school girls and 2150.5Kcal in the high school girls and mean daily intake of protein, iron, vitamin $B_1$, vitamin $B_2$ and niacin was significantly higher (p<0.05, p<0.01) in the middle school girls than in the high school girls. Mean daily calcium, iron, vitamin $B_1$, vitamin A and C intake of middle school girls were lower than those of RDA and all nutrients intake of high school girls except for phosphorus was lower than those of RDA. The index of nutritional quality (INQ) was under 1.0 for calcium, iron, vitamin A, $B_1$ and C. Mean blood level of cholesterol, triglyceride, Hb, Hct, GOT, GPT were 170.9mg/dl, 78.9mg/dl, 13.1g/dl, 39.5%, 18.8mg/d and 15.7mg/dl, respectively.
Effects of repeated administration of diminazene aceturate (Hoechst Veterin r GmbH. Ger- many) that has been introduced as effective compound against Babesiosis and trppanosomiasis were investigated in dogs experimentally infacted with Babesia gibsoni. Adull mongrel dogs of both sexes were inoculated will nonpreserved infected blood and then maintained chronic anemia. A single dose of diminazene aceturate of 7mg/kg b.w. was administrated intramnuscularIy on day 7.1 arid ,7. Clin- ical and hcmatological findings following inoculation and medication were observed and 7enlm bio chemical analysis also was monitored. Parasitemia was detected between 3 and 6 days after inoculation. The rate of parasitized erythrocytes,1 in peripheral blood reached the peak on the 13th day and was maintained the percentage of 0.1 to 1.0 until the medication of diminazene aceturate. RBC was significantly (p<0.01) decreased on the 3rd day and then kept on decreasing. The lowest value was observed on the 16th day. WBC remained generally within normal ranges. PCV revea1ed the sig-nificant (p<0.01) decrease within the range of 24-27% and platelet was significantly (p<0.05) decreased during the period. Senum chemical values (ALT, AST. total bilirubin. LDH BUN, area- tinine, total protein. albumin and glucose) were within normal ranges during the experimental period. Serum CPK values were significantly (p<0.01) increased on the 3rd day. There was no clinically, sig-nificant difference in a single dose of diminazene aceturate of 7 mg/kg b.w. But the administration of diminazene aceturate of 14 mg/kg b.w. revealed vomiting and anorexia and one dog died in 30 hours after administration. The administration of 14mg/kg b.w. resulted in vomiting, salivation, actor- exia, tremor of head and involuntary movement and one dog died in 27 hours after administration. WBC, RBC, PCV and Platelet values were no significant difference and hematological findings revealed persistent anemia and thrombocytopenia during chronic anemia after inoculation. AST activity its was significantly (p<0.01) increased 11\\`from 3 days after medication and AST activity was on the same trend. Serum CPK activity revealed significant (p<0.01) increase within 6 hors)\\`s after every administration and decreased in 48 howl·s after administration.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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