Ethylene oxide is a genotoxic carcinogen with widespread uses as industrial chemical intermediate and gaseous sterilant. 2-hydroxyethylated N-terminal valine in Hb is a good biomarker for biological monitoring of ethylene oxide exposure, because of its stability. For measuring the hemoglobin adduct formed by exposure of ethylene oxide, we studied the determination of (N-2-hydroxy-ethyl)valine(HEV) in hemoglobin adduct by using GC/MS. Firstly we synthesized HEV with 2-amino-ethanol and bromoisovaleric acid(BIVA) and confirmed it with GC/MS-FID. Its fragmentations were m/z 116(base ion, M+-45) and m/z 130(M+-31). For measuring HEV with higher sensitivity, we use derivatives which were PFPITH(pentafluorophenylisothiocianate) and TBDMS (tributyldimethylsilylation) by using Edman procedure. Its fragmentation were m/z 425(M+-57), m/z 383(M+-99) and m/z 172(M+-310) by using GC/MS. We did biological monitoring for mice inhalation exposure with 400 ppm ethylene oxide. The concentrations of hemoglobin adduct were $168{\pm}3.8\;and\;512{\pm}04$(nmol g-1 globin) at 0.5 hr/day 400 ppm ethylene oxide inhalation exposure group, and $631{\pm}17\;and\;2265{\pm}9.4$(nmol g-1 globin) at 1.0 hr/day 400 ppm ethylene oxide inhalation exposure for 1 and 4 weeks, respectively. We confirmed that (N-2-hydroxy-ethyl)valine(HEV) of hemoglobin was a good biomarker for biomonitoring of ethylene oxide exposure, and can measured with derivatives such as PFPITH(pentafluorophenylisothiocianate) and TBDMS(tributyldimethylsilylation) by using GC/MS.
Journal of The Korean Society of Grassland and Forage Science
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v.24
no.1
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pp.29-36
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2004
In an effort to optimize tissue culture responses of zoysiagrass(Zoysia japonica Steud.) for genetic transformation, factors affecting callus induction and plant regeneration were investigated. MS medium containing 3 mg/L 2,4-D was optimal for embryogenic callus induction from mature seed. The plant regeneration frequency of 73.3% was observed when embryogenic calli induced in this medium were transferred to N6 medium supplemented with 0.1 mg/L 2,4-D and 5 mg/L BA. Among several basic media, MS and N6 medium were optimal for callus induction and plant regeneration, respectively. Regenerated plants were grown normally when shoots transplanted to the soil. A rapid and efficient plant regeneration system established in this study will be useful for molecular breeding of turfgrass through genetic transformation.
Park, Kwon Jae;Woo, Jong Soo;Park, Jong Yoon;Jung, Jae Hwa
Journal of Chest Surgery
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v.49
no.5
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pp.350-355
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2016
Background: Mitral stenosis (MS) remains one of the important heart diseases. There are many factors that influence the clinical outcomes, and little is known about how left ventricular (LV) dysfunction clinically affects the prognosis of the patient with MS after mitral valve replacement (MVR). We reviewed our clinical experiences of MVR in patients with MS who had LV dysfunction. Methods: Between January 1991 and January 2013, 110 patients with MS who underwent MVR were analyzed and divided into two groups according to ejection fraction (EF). Group 1 ($EF{\leq}45%$) included 13 patients and group 2 (EF>45%) included 97 patients. Results: Thromboembolism occurred in 8 patients after MVR (group 1: n=3, 23.1%; group 2: n=5, 5.2%) and its incidence was significantly higher in group 1 than in group 2 (p=0.014). There were 3 deaths each in groups 1 and 2 during follow-up. The overall rate of cardiac-related death in group 1 was significantly higher than in group 2 (group 1: n=3, 23.1%; group 2: n=3, 3.1%; p=0.007). The cumulative survival rate at 1 and 15 years was 83.9% and 69.9% in group 1 and 97.9% and 96.3% in group 2 (p=0.004). The Cox regression analysis revealed that survival was significantly associated with postoperative stroke (p=0.011, odds ratio=10.304). Conclusion: This study identified postoperative stroke as an adverse prognostic factor in patients with MS after MVR, and a s more prevalent in patients with LV dysfunction. Postoperative stroke should be reduced to improve clinical outcomes for patients. Preventive care should be made in multiple ways, such as management of LV dysfunction, atrial fibrillation, and anticoagulation.
PARK, MI-KYUNG;KWANG-HYEON LIU;YOONGHO LIM;YOUN-HYUNG LEE;HOR-GIL HUR;JEONG-HAN KIM
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.13
no.1
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pp.43-49
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2003
Metabolism of a new fungicide ethaboxam by soil fungi was studied. Among the fungi tested, Cunninghamelia elegans produced metabolites from ethaboxam, which were not found in the control experiments. M5, a major metabolite from ethaboxam was firmly identified as N-deethylated ethaboxam by LC/MS/MS and NMR. N-Deethylated ethaboxam has been found as a single metabolite in in vitro metabolism with rat liver microsomes. Ml was proved to be 4-ethyl-2-(ethylamino)-1,3-thiazole-5-carboxamide (ETC) by comparing with the authentic compound. In addition, M2, M3, and M4, and M6 were tentatively Identified by LC/MS/MS as hydroxylated and methoxylated ethaboxams, respectively. Production of the major metabolite, N-deethylated ethaboxam, by the fungus suggested that C. elegans would be an efficient eukaryotic microbial candidate for evaluating xenobiotic-driven mammalian risk assessment.
Acetaminophen (N-acetyl-p-aminophenol) is one of the most popular analgesic and antipyretic drugs. An isotope dilution mass spectrometric method based on LC/MS was developed as a candidate reference method for the accurate determination of acetaminophen in pharmaceutical product. After spiking an isotope labeled acetaminophen (acetyl-$^{13}C_2$, $^{15}N$-acetaminophen) as an internal standard, tablet extracts were analyzed by LC/MS in a selected reaction monitoring (SRM) mode to detect ions at m/z $152{\rightarrow}110$ and m/z $155{\rightarrow}111$ for acetaminophen and acetyl-$^{13}C_2$, $^{15}N$-acetaminophen, respectively. The repeatability and reproducibility of the developed ID/LC-MS method were tested for the validation and assessment of metrological quality of the method.
Zidovudine is an antiretroviral agent prescribed for the prevention and treatment of human immunodeficiency virus/acquired immune deficiency syndrome (HIV/AIDS). It is typically recommended to be used in combination with other antiretroviral drugs. Zidovudine has the potential to generate N-nitrosodimethylamine (NDMA) in the presence of dimethylamine and nitrite salt under acidic reaction conditions during the drug manufacturing process. NDMA is a potent human carcinogen that may be detected in drug substances or drug products. An analytical method was developed to determine NDMA in pharmaceuticals including zidovudine using high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS). The analysis involved reversed-phase chromatography on a Kinetex F5 column with a mobile phase comprising water-acetonitrile mixtures. The detection of positively charged ions was conducted using atmospheric pressure chemical ionization (APCI). The calibration curve demonstrated excellent linearity (r = 0.9997) across the range of 1-50 ng/mL with a highly sensitive limit of detection (LOD) at 0.3 ng/mL. The developed method underwent thorough validation for specificity, linearity, accuracy, precision, robustness, and system suitability. This sensitive and specific analytical method was applied for detecting NDMA in zidovudine drug substance and its formulation currently available in the market, indicating its suitability for drug quality management purposes.
Objectives : This study was performed to investigate characteristic indice of heart rate variability (HRV) according to presence of metabolic syndrome (MS), pattern identification. Methods : We analyzed 167 subjects who participated in a stroke check-up. We classified the subjects into two groups as MS (n=48) and non-MS (n=119) based on NCEP ATP III. First, we investigated pattern identification of all subjects based on Korean Standard Pattern Identifications for Stroke-III. Second, we surveyed significance of HRV indices between MS and non-MS groups. Third, we investigated significance of HRV indices between classified DP of MS and classified DP of non-MS. Fourth, we investigated significance of HRV indices between classified DP of MS and non-MS. Fifth, we investigated significance between components of MS and HRV indices. Results : 1. SDNN, RMS-SD, HF, Ln(HF), and HF (NORM) were significantly lower in the MS than non-MS group. LN (TP), LF/HF were significantly higher in the MS than non-MS. 2. Ln (HF), Ln (TP), and LF/HF were statistically significant in the classified DP of MS group. 3. RMS-SD, and Ln (HF) were significantly lower in the abdominal obesity group than in the non-abdominal obesity group. SDNN, RMS-SD, TP, Ln (TP), VLF, Ln (VLF), and Ln (LF) were significantly lower in the hypertension group than in the non-hypertension group. RMS-SD was significantly lower in the diabetes group than in the non-diabetes group. Mean HRT,LF/HF were significantly higher in the hypertriglyceridemia than non-hypertriglyceridemia group, but Ln (HF), RMS-SD, and HF (NORM) were significantly lower in the hypertriglyceridemia than non-hypertriglyceridemia group. Conclusions : We found a few significant relationships between classified DP of MS and HRV indices. The resluts demonstrate that MS has potentially negative effects on the cardiovascular system, and these effects could be detected by HRV.
Certain members of the cytochromes P450 superfamily metabolize polyunsaturated long-chain fatty acids to several classes of oxygenated metabolites. An approach based on in silico analysis predicted that Streptomyces peucetius CYP107N3 might be a fatty acid-metabolizing enzyme, showing high homology with epoxidase enzymes. Homology modeling and docking studies of CYP107N3 showed that oleic acid can fit directly into the active site pocket of the double bond of oleic acid within optimum distance of $4.6{\AA}$ from the Fe. In order to confirm the epoxidation activity proposed by in silico analysis, a gene coding CYP107N3 was expressed in Escherichia coli. The purified CYP107N3 was shown to catalyze $C_9-C_{10}$ epoxidation of oleic acid in vitro to 9,10-epoxy stearic acid confirmed by ESI-MS, HPLC-MS and GC-MS spectral analysis.
An extracellular protease was identified from Bacillus subtilis KCCM 10257 by N-terminal sequencing and mass spectral analysis. The molecular mass of the extracellular protease was estimated to be 28 kDa by SDS-PAGE. Sequencing of the N-terminal of the protease revealed the sequence of A(G,S,R)QXVPYG(A)V(P,L)SQ. The N-terminal sequence exhibited close similarity to the sequence of other proteases from Bacillus sp. A mass list of the monoisotopic peaks in the MALDI-TOF spectrum was searched after peptide fragmentation of the protease. Six peptide sequences exhibiting monoisotopic masses of 1,276.61, 1,513.67, 1,652.81, 1,661.83, 1,252.61, and 1,033.46 were observed from the fragmented protease. These monisotopic masses corresponded to the lytic enzyme L27 from Bacillus subtilis 168, and the Mowse score was found to be 75. A doubly charged Top product (MS) at a m/z of 517.3 exhibiting a molecular mass of 1034.6 was further analyzed by de novo sequencing using a PE Sciex QSTAR Hybrid Quadropole-TOF (MS/MS) mass spectrometer. MS/MS spectra of the Top product (MS) at a m/z of 517.3 obtained from the fragmented peptide mixture of protease with Q-star contained the b-ion series of 114.2, 171.2, 286.2, 357.2, 504.2, 667.4, 830.1, and 887.1 and y-ion series of 147.5, 204.2, 367.2, 530.3, 677.4, 748.4, 863.4, and 920.5. The sequence of analyzed peptide ion was identified as LGDAFYYG from the b- and y-ion series by de novo sequencing and corresponded to the results from the MALDI-TOF spectrum. From these results the extracellular protease from Bacillus subtilis KCCM 10257 was successfully identified with the lytic enzyme L27 from Bacillus subtilis 168.
Kim, Inyoung;Shin, Dongwon;Paek, Jihyun;Kim, Jeongkwon
Mass Spectrometry Letters
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v.8
no.1
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pp.14-17
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2017
The effect of cationization agent concentration on glycan detection via matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) was investigated using $Na^+$ ions in the form of NaCl as the cationization agent. NaCl solution concentrations ranging from 1 mM to 1 M were investigated. Glycans from ovalbumin were mixed with the cationization agent solution and the 2,5-dihydroxybenzoic acid (2,5-DHB) matrix solution in a volume ratio of 1:1:1. The resulting mixture was loaded onto the MALDI plate. Two MALDI-TOF MS instruments (Voyager DE-STR MALDI-TOF MS and Tinkerbell RT MALDI-TOF MS) were used for detection of glycans. The best detection, in terms of the number of identified glycans, the peak intensity, and the signal-to-noise (S/N) ratio, was obtained with NaCl concentrations of 0.01-0.1 M for both MALDI-TOF MS instruments.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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