To examine effects on complement and reticuloendothelial system, alkali extract was isolated from cultured mycelium of Ganoderma lucidum IY107. It was shown to strongly activate both classical and alternative pathways of complement as compared with krestin. Activated complement C3, 3rd peak, was observed by crossed immunoelectrophoresis. It was also shown to activate reticuloendotherial system of ICR mice in the carbon clearance test and to increase hemolytic plaque forming cells of the spleen. Carbohydrate and protein contents of the alkali extract were 10% and 49%, respectively. The carbohydrate consisted of four monosaccharides and the protein contained 16 amino acids.
Rice hull was used as an additive in order to determine the its effect on increse of mushroom growth and yield in Chungnam Provincial techinical institution. In the treatment of 80% rice hull in small Neutaribeosut, mycelial growth duration was shown to be shorter about 11 days and yield increased about 7oie than those of conventional culture. In the case of Chongpung Neutaribeosut bottle culture, mycelial growth duration was shorter about 2 to 3 days in additive of 30 to 80% rice hull compared to conventional, but yield was similar to that of conventional. In the treatment of 30% rice hull in Agrocybe aegerita bottle culture, mycelial growth and yield increased 6 days and 6% than those of convrntional, respectively. In the treatment of 30% to 40% rice hull in Ganoderma lucidum bottle culture, mycelial grow durations were similar 45 days and 38 g/bottle.
Induction of laccase isozymes under acidic stresses were determined in Trametes versicolor, Pleurotus ostreatus and Ganoderma lucidum isolated in Korea, and in Lentinus squarrosulrs isolated in Thai. When cultures of these fungi were transferred to acidic liquid media (pH 3.0-4.0), the activities of secreted extralcellular laccases were increased 60% and 400% in T. versicolor and G. lucidum respectively. However, there was no such induction in L. squarrosulus or P. ostreatus. In L. squarrosulus, different laccase isozymes in the electrophoretic mobilities were induced under acidic conditions.
The objective of the experiment was to determine the optimum cultural [moisture levels (55, 60 and 70%), days of fermentation (7, 14 and 21), temperature (25 and $35^{\circ}C$) of incubation)] and nutritional parameters (urea addition (0 and 2%) and variable levels of single super phosphate (0.25 and 0.50% SSP)) for bio-processing of the mustard (Brassica campestris) straw (MS) under solid-state fermentation (SSF) system. The performance of SSF was assessed in terms of favorable changes in cell wall constituents, protein content and in vitro DM digestibility of the MS. Sorghum based inoculum (seed culture) of Ganoderma lucidum to treat the MS was prepared. The 50 g DM of MS taken in autoclavable polypropylene bags was mixed with a pre-calculated amount of water and the particular nutrient in the straw to attained the desired levels of water and nutrient concentration in the substrate. A significant progressive increase in biodegradation of DM (p<0.001), NDF (p<0.01) and ADF (p<0.05) was observed with increasing levels of moisture. Among the cell wall constituents the loss of ADF fraction was greatest compared to that of NDF. The loss of DM increased progressively as the fermentation proceeded and maximum DM losses occurred at 28 days after incubation. The protein content of the treated MS samples increased linearly up to the day $21^{th}$ of the incubation and thereafter declined at day $28^{th}$, whereas the improvement in in vitro DM digestibility were apparent only up to the day $14^{th}$ of the incubation under SSF and there after it declined. The acid detergent lignin (ADL) degradation was slower during the first 7 days of SSF and thereafter increased progressively and maximum ADL losses were observed at the day $28^{th}$ of the SSF. The biodegradation of DM and ADL was not affected by the variation in incubation temperature. Addition of urea was found to have inhibitory effect on fungal growth. The effect of both the levels (0.25 and 0.50) of SSP addition in the substrate, on DM, NDF, ADF, cellulose and ADL biodegradation was similar. Similarly, the protein content and the in vitro DM digestibility remain unaffected affected due to variable levels of the SSP inclusion in the substrate. From the results it may be concluded that the incubation of MS with 60 percent moisture for 21 days at $35^{\circ}C$ with 0.25 percent SSP was most suitable for MS treatment with Ganoderma lucidum. Maximum delignification, enrichment in the protein content and improvement in in vitro DM digestibility were achieved by adopting this protocol of bioprocessing of MS.
ABSTRACT: In order to find physiologically active components from higher fungi, hot-water soluble components were extracted from the basidiocarps of Ganoderma lucidum. The extract was purified and separated by DEAE cellulose ion exchange chromatography and Sepharose CL-4B gel filtration method. The separated fractions were designated CR, IN, IA, GL and GH. Fraction GL showed the highest antitumor activity among the fractions and its molecular weight was found to be 47 KD. The tumor inhibition ratio of Fr. GL was 81 % at the dose of peritoneal administration of 20 mg/kg/day for 10 days in mice. Chemical analysis of this fraction showed 82% polysaccharide, 8% protein and 0.9% hexosamine. The polysaccharide moiety consisted of 63% glucose, 27% galactose, 7% mannose and 3% fucose. Fraction IN was found to increase the amount of superoxide anion in activated macrophages to 1.6-fold and the number of plaques in hemolytic plaque assay to 6-fold, respectively. These results indicate that the antitumor activity was exerted through immunopotentiation, but not through direct cytotoxicity against the tumor.
The production of hepatoprotective exo-polysaccharide by using synthetic and industrial grade media of the submerged mycelial culture of Ganoderma lucidum WK-003 was compared. The optimum concentrations of molasses and corn steep liquor (industrial grade) for the production of exo-polysaccharide were 5% and 2.5%, respectively. The productions of the exo-polysaccharide by using a 5l jar fermenter with industrial grade medium and synthetic medium were 11.2 g D.W./l and 7.2g D.W./l, respectively. Glutamic pyruvic transaminase (GPT) activities in the serum of intoxicated Sprague-Dawley rats by oral administration of the exo-polysaccharide produced from the industrial grade and synthetic media for 4 consecutive days were decreased from 704 IU/L to 356IU/L and 704IU/L to 349IU/L, respectively.
Exo-polysaccharide obtained from the submerged cultivation of Ganoderma lucidum mycelium was fractionated. The structural analysis of the acidic exo-polysaccharide fraction (BWS-DA-GI), showing high antitumor activity, was carried out and compared to the mycelial acidic fraction (MWS-DA-GI). The major sugar constituents of the fraction of BWS-DA-GI were glucose, galactose and mannose in the molar ratio of 2.5 : 2.1 : 2.5. The minor components in this fraction were xylose and fucose. While the major sugar constituents of the mycelial acidic fraction of MWS-DA-GI were galactose, fucose, mannose and glucose. The trace components in this fraction was xylose. From the results of periodate oxidation, Smith degradation, affinity chromatography and methylation analysis, the chemical structures of the two fractions, BWS-DA-GI and MWS-DA-GI were both determined as ${\beta}-1,3$ glucans. It was also estimated that BWS-DA-GI had a $1{\rightarrow}6$ glucosidic linkage and MWS DA-GI had $1{\rightarrow}4$ and $1{\rightarrow}6$ glucosidic linkages. The molecular weights of these fractions, MWS-DA-GI and MWSDA-GI were estimated as $1.2{\times}10^6\;and\;1.0{\times}10^6$ dalton, respectively.
Objectives: The mushroom Ganoderma lucidum has been widely used as a traditional herbal medicine for many years. Although several studies have focused on the anti-oxidative activity of this mushroom, the molecular mechanisms underlying its activity have not yet been clearly established. The present study investigated the cytoprotective effect of ethanol extract of Ganoderma lucidum (EGL) against oxidative stress (hydrogen peroxide, $H_2O_2$) and elucidated the underlying mechanisms in a C2C12 myoblast cell line. Methods: Oxidative stress markers were determined by using the comet assay to measure reactive oxygen species (ROS) generation and deoxyribonucleic acid (DNA) damage. Cell viability and Western blotting analyses were employed to evaluate the cellular response to EGL and $H_2O_2$ in C2C12 cells. Transfection with nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2)-specific small interfering ribonucleic acid (siRNA) was conducted to understand the relationship between Nrf2 expression and $H_2O_2$-induced growth inhibition. Results: The results showed that EGL effectively inhibited $H_2O_2$-induced growth and the generation of ROS. EGL markedly suppressed $H_2O_2$-induced comet-like DNA formation and phosphorylation of histone H2AX at serine 139 ($p-{\gamma}H2AX$), a widely used marker of DNA damage, suggesting that EGL prevented $H_2O_2$-induced DNA damage. Furthermore, the EGL treatment effectively induced the expression of Nrf2, as well as heme oxygenase-1 (HO-1), with parallel phosphorylation and nuclear translocation of Nrf2 in the C2C12 myoblasts. However, zinc protoporphyrin IX, a HO-1 inhibitor, significantly abolished the protective effects of EGL against $H_2O_2$-induced accumulation of ROS and reduced cell growth. Notably, transient transfection with Nrf2-specific siRNA attenuated the cytoprotective effects and HO-1 induction by EGL, indicating that EGL induced the expression of HO-1 in an Nrf2-dependent manner. Conclusion: Collectively, these results demonstrate that EGL augments the cellular anti-oxidant defense capacity through activation of Nrf2/HO-1, thereby protecting C2C12 myoblasts from $H_2O_2$-induced oxidative cytotoxicity.
The immune activities of Ganoderma lucidum Mycelium added garlic extracts (GAM), Ganoderma lucidum Mycelium (GM), garlic extracts (GS) and standard $({\beta}-glucan)$ were compared. GAM enhanced the growth of human immune T cell up to $1.25{\sim}1.46$ times, compared to control group. GAM showed relatively lower cytotoxicity in using normal human lung cell, while GAM showed the most potent inhibitory effect on the human lung carcinoma, compared to GM and GS. The selectivity of GAM was also higher than that of GM and GS. GAM increased the secretion of cytokines, IL-6 and TNF- from human B cell as well as the growth of human immune cells. It can imply that GAM has higher immune activity than GM or GS.
Mushroom-derived ${\beta}$-glucan, a polysaccharide (GLP) isolated from the mycelium of Ganoderma lucidum, was previously shown to have inhibitory effects against tumor-bearing mice in vivo. We investigated the apoptotic effect of mushroom-derived ${\beta}$-glucan in a sarcoma-180 tumor cell- bearing mice model using an ELISA to determine the levels of tumor necrosis factor-${\alpha}$ (TNF-${\alpha}$) in the mice. The morphology of the tumor cells was assessed with transmission electron microscopy (TEM). GLP was injected into the tumor-bearing mice at a dose (i.p.) of 20 mg/kg for 10 days. After 30 days, the tumor mass from the inguinal region was collected, weighed, and assayed using TEM and a TNF-${\alpha}$ ELISA kit. The tumors that developed in the mice treated with GLP were 71.4% smaller than those in the control group, showing the ability of GLP to inhibit tumor growth. The levels of TNF-${\alpha}$ in the serum of the sarcoma-180 bearing mice were 12 times greater than in the serum of the nonbearing tumor mice. An ultrastructural study demonstrated that the GLP-treated sarcoma-180 tumor cells were condensed, with rearranged chromatin. In addition, the marginated chromatin in nucleus induced the nuclear compartment, and there were many vacuolization in the cell. GLP could be an effective apoptosis-inducing compound in sarcoma-type cancers.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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