본 연구는 유산균에 의한 gamma aminobutyric acid(GABA)의 생산 및 쌀겨 추출물을 이용한 최적 배지의 제조를 목표로 하고 electrostatic spray는 곡물에 GABA 함량을 증진시키기 위해 사용하였다. 분리한 Lactobacillus brevis CFM11을 MRS 배지를 이용하여 최적 조건($37^{\circ}C$, 24시간, pH 6.5)에서 배양시킨 결과, $600.12{\mu}g/mL$의 GABA 생성량을 나타냈고 0.8% MSG를 함유한 MRS 배지에서 배양시켰을 때 $2,002.93{\mu}g/mL$의 GABA 생성량을 나타냈다. 미강 추출물 배지에 MSG 0.4%, sucrose 2%, skim milk 1%, magnesium sulfate 0.2%를 첨가했을 때 GABA 생산량은 $585.80{\mu}g/mL$로 나타났다. 최적화 배지에 L. brevis CFM11을 배양시켜 얻은 GABA를 쌀 표면에 electrostatic spray 처리 후 GABA량은 $228.10{\mu}g/g$으로 나타난 반면, 아무것도 처리하지 않은 곡류에서의 GABA량은 $32.23{\mu}g/g$이었다. 이러한 결과로 보아 미강 추출물은 GABA 생산을 위한 MRS 배지의 대체물로서 산업적인 가치를 증가시킬 수 있을 것으로 판단된다.
본 연구는 동맥혈압의 조절에 결정적 역할을 하는 상부연수 복외측부에 존재하는 심맥관계 활동과 관련 있는 신경세포들에 대해 iontophoresis 법으로 투여한 신경흥분전달물질의 작용기전을 규명하고자 하였다. 이를 위해서 $\alpha$-chloralose로 마취한 고양이를 실험동물로 하여 연수의 복외측부에 multibarrel 전극을 삽입하여 심맥관계 활동과 관련 있는 신경세포의 활동을 세포외기록법으로 확인한 후 세포에 iontophoresis법으로 투여한 glutamate, GABA(\ulcorner-aminobutyric acid) 및 bicuculline의 효과를 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1) 자발적으로 활동전압을 보이지 않는 세포에서 glutamate를 10초 주기로 5초간 iontophoresis할 때 주기적인 세포활동을 기록할 수 있었고 이 활동은 동시에 가한 GABA에 의하여 억제되었다. 2) 자발적으로 활동하고 있는 세포들에 대하여 glutamate를 투여하였을 때 활동전압의 빈도가 증가하였고 GABA에 의해서 억제되었다. 3) GABA억제제인 bicuculline을 단독으로 투여시 활동전압 빈도의 증가는 뚜렷하지 않았으나 GABA와 동시 투여시에는 GABA의 억제작용을 차단하였다. 4) GABA의 작용은 RVLM(rostral ventrolateral medulla) 세포의 주기적 활동과 basal discharge 모두를 감소시켰으나 주기적 양상이 없어진 세포는 드물었다. 5) 말초에 가한 유해자극에 의하여 유발된 신경세포 활동이 GABA에 의하여 억제되었다. 이상의 결과로부터 $\alpha$-chloralose로 마취한 고양이에서 GABA는 RVLM에 존재하는 심맥관계 신경세포들에 대하여 억제적으로 작용하나 bicuculline의 투여후에도 이들 세포들의 주기적 활동이 유지되는 점으로 보아 RVLM세포의 자발적 흥분에 대하여 감압반사의 흥분이 기여하는 바가 크지는 않을 것으로 사료된다.
Benzodiazepine계 약물들은 진정 최면제의 대표적인 약물로서, 중추신경계에서의 그 작용은 gamma amino butyric acid(GABA) 수용체와 짝지워져 있는 benzodiazepine 수용체를 통해서 나타나며 또한 뇌에 있는 synaptosome에서 전위 의존성 calcium channel을 통한 calcium의 섭취를 억제함으로써 진정작용 및 최면 작용이 나타난다. 이와 아울러 말초 장기에서도 benzodiazepine 수용체와 GABA 수용체가 발견 되었는데 이들의 기능과 상호관계는 잘 알려져 있지 않다. 이에 본 실험에서는 benzodiazepine계통의 대표적인 약물이며 중추신경과 말초 장기에 동시에 작용하는 diazepam이 흰쥐 적출자궁의 자발 수축 및 oxytocin 유발 수축에 미치는 영향을 검색하고, 이러한 diazepam의 효과와 GABA 수용체 및 calcium과의 상호관계를 검색함으로써 그 작용기전을 추구해 보기 위하여 다음과 같은 실험을 하였다. 난소를 제거한 후 estrogen(17 beta-estradiol : $500{\mu}g/kg/day$)을 4일 동안 전 처치한 흰쥐의 자궁을 적출하여 등척성 장력을 측정함으로써 그 수축력의 변화를 관찰하였다. Diazepam과 GABA 수용체 효현제 및 그 봉쇄제들이 자궁절편의 자발 수축과 oxytocin 유발 수축에 미치는 영향을 검색하였고, 또 이들 약물의 작용에 관련된 calcium 동원기전에 대하여 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. Diazepam은 흰쥐 적출자궁의 자발수축 및 oxytocin 유발수축을 농도 의존적으로 억제하였다. GABA, GABA A 수용체 효현제인 muscimol, GAGA A 수용체의 상경적 봉쇄제인 bicuculline, GABA A 수용체의 비상경적 봉쇄제인 picrotoxin, GABA B 수용체 효현제인 boclofen, 그리고 GABA B 수용체 봉쇄제인 delta-aminovaleric acid는 흰쥐 적출 자궁의 자발 수축 및 oxytocin 유발수축에 아무런 영향을 미치지 않았다. 자발 수축 및 oxytocin 유발수축에 대한 diazepam의 억제 작용은 GABA 수용체 효현제 및 봉쇄제의 영향을 받지 않았다. 그러나 bicuculline은 diazepam의 억제 작용에 상가적으로 작용하였는데, bicuculline의 이러한 작용은 muscimol에 의해서 길항되지 않았다. 정상 PSS 내에서 diazepam에 의해 억제되었던 자발수욱 및 oxytocin유발수촉은 calcium의 첨가 및 calcium inophore인 A23187의 첨가로 일부 회복되었다. Calcium 배제 용액내에서는 diazepam이 calcium 첨가로 인한 수축력 회복을 방해하였으며 calcium inophore인 A23187에 의한 수축력 증가는 막지 못하였다. 또 세포외액에 calcium이 결핍된 상태에서는 oxytocin 자체에 의한 수축을 방해하지 못하였으나 이어 첨가된 calcium에 의한 oxytocin 유발 수축의 증가는 일부 억제하였다. 이상의 실험결과로 미루어 볼 때 diazepam은 자궁의 자발수측 및 oxytocin 유발 수축을 억제할 수 있으며, 이러한 작용은 GABA 수용체 의존성이 아닌 세포외액의 calcium의 유입을 억제함으로써 나타나는 것으로 사료된다.
본 연구에서는 물리적 처리로 GABA 함량을 증가시킨 미강 및 이의 열수 추출물을 밀가루 중량의 20%까지 첨가하여 식빵을 제조하고, 물리적 특성, 저장 중 텍스처의 변화 및 잔유 GABA 함량를 분석하였다. 부피와 비용적율은 대조구에 비해 GABA 미강 첨가구는 감소한 반면, 미강추출물 첨가구는 약간 증가하거나 유지되었으며, 무게는 대조구와 첨가구에 차이가 없었다. 색도는 대조구 대비 GABA 미강과 미강추출물의 첨가량의 증가에 따라 L값은 감소하고, a와 b값은 증가하여 색이 진해지는 현상을 나타냈었다. 저장 중 빵 시료는 밀폐된 용기에 보관되어 수분함량의 변화는 2%이하로 아주 미미하였으나, GABA 미강 및 미강추출물 첨가로 수분감소를 다소 줄일 수 있었다. 경도(hardness) 및 씹힘성(chewiness) 등의 텍스처는 시간이 경과함에 따라 모든 시료에서 증가 되었으나, 경도는 대조구에 비해 첨가구의 증가 폭이 낮게 나타났으며, 특히 미강추출물 첨가구에서는 대조구에 비해 2배 이상의 낮은 경도를 보였다. 탄력성(springiness)은 대조구와 첨가구에서 거의 차이가 없으며, 저장 기간이 경과 후에도 차이가 거의 없었다. 빵의 GABA 함량은 GABA 미강 및 미강추출물 첨가로 대조구 대비 40배 가량의 증가 효과를 나타내어, GABA 일부가 열에 의해 손실되었으나 상당량 잔유함을 나타냈다. 이와 같은 결과를 종합하여 볼 때 GABA 미강을 직접 첨가하는 것보다 미강추출물을 첨가하여 제빵하는 것이 적절하며, 미강추출물을 5-20% 첨가하여 빵의 저장성이 향상될 수 있으며, GABA 첨가 효과로 건강기능성이 우수한 빵을 제조할 수 있을 것으로 생각된다.
GABA는 식물, 동물 및 미생물 등 자연계에 다양하게 존재하고 있으며, 항고혈압, 이뇨, 진정, 수면유도 및 항스트레스 등 다양한 효과가 있는 것으로 알려져 있어서 식품, 의약품 소재로 활용되고 있다. 본 연구에서는 김치로 부터 분리한 GABA 형성 유산균을 옥수수 수염 추출물에 적용하여 발효 특성과 발효물의 항산화 효과에 대해 분석하였다. 신규 L. plantarum LAB459의 분리와 동정은 생화학적 특성, 당자화성 및 16s rRNA 염기 서열 분석을 통해 확인되었다. 그리고 TLC와 HPLC 분석을 통해 분리된 L. plantarum LAB459가 GABA 생성능이 있는 것으로 나타났다. 그리고 탈지유가 포함된 옥수수 수염 열수 추출물에 대해 발효를 수행한 결과, 동결 건조된 발효물에 약 1 ㎍/mg 수준의 GABA가 형성된 것을 확인하였다. 또한 발효물에 대한 플라보노이드와 항산화 분석은 옥수수 수염 열수 추출물에 비해 더 높은 것으로 나타났다. 따라서 본 연구에서 분리된 L. plantarum LAB459는 다양한 식품 발효의 스타터 또는 식품 소재와 의약품 소재로 적용이 가능할 것으로 판단된다.
Adenosine and GABA are known to be major inhitory neurotransmitters in the central nervous system and its receptors mediate various neurophamacological effects including cardiovascular modulatory effects. Inhibitory cardiovascular effects induced by intrathecal (i.t.) administration of adenosine $A_1$ receptor agonist and its modulation by cyclic AMP was suggested by our previous report. In this experiment, we examined the modulation of cardiovascular effects of adenosine $A_1$ receptor and adenosine $A_2$ receptor by $GABA_B$ receptors antagonist in the spinal cord. I.t. administration of 10 nmol of $N^6$-cyclohexyladenosine (CHA, an adenosine $A_1$ receptor agonist), I.t. administration of 2 nmol of 5'-(N-cyclopropyl)-carboxamidoadenosine (CPCA, an adenosine $A_2$ receptor agonist), pretreatment with 5-aminovaleric acid (a $GABA_B$ receptor antagonist, 50 nmol, i.t.) prior to administration of CHA and pretreatment with 5-aminovaleric acid (a $GABA_B$ receptor antagonist, 50 nmol, i.t.) prior to administration of CPCA were performed in anesthetized, artificially ventilated Sprague-Dawley rats. I.t. administration of 50 nmol of 5-aminovaleric acid significantly attenuated the inhibitory cardiovascular effects of CHA but did not attenuated the inhibitory cardiovascular effects of CPCA. It is suggested that cardiovascular responses of adenosine $A_1$ receptor is modulated by $GABA_B$ receptor and adenosine $A_2$ receptor is not modulated by $GABA_B$ receptor in the spinal cord.
Choi, Se Mi;Kim, Jeong A;Kim, Geun Su;Kwon, Do Young;Kim, Sang Gu;Lee, Sang yun;Lee, Kang Wook
한국식품위생안전성학회지
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제37권1호
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pp.21-28
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2022
본 연구에서는 국내산 돌미나리에서 GABA생성능이 있는 신규 유산균을 분리, 동정한 결과, Enteroccoccus casseliflavus로 확인되었다. 최근까지 Lactobacillus속과 같은 GABA 생성 유산균에 대한 보고는 많이 되고 있고, 일부 Enterococcs속 유산균도 보고되고 있으나 E. casseliflavus종에 대한 보고는 없었다. 따라서 본 연구에서는 E. casseliflavus PL05 균주에 대한 GABA 생성 최적 조건을 찾기 위하여 배지의 유형, 생육 온도, 초기 pH 조건, 배양 시간, MGS 농도 및 탄소원을 포함한 다양한 조건을 테스트하였다. PL05 균주는 MRS 혹은 TSB 배지보다 BHI 배지에서 생육이 잘 되었으며, 배지의 초기 pH는 7-9 조건에서 가장 생육이 왕성하였고, GABA 생성 조건 역시 유사한 결과로 확인되었다. GABA의 기질에 해당하는 MSG의 농도별 GABA 생성량을 조사한 결과, 7%에서 가장 높은 생성량을 나타내었으나 5%에서도 유사한 수준으로 확인되어 효율적인 측면에서 5%가 적합할 것으로 판단된다. 탄소원에 따른 생육 및 GABA 생성량은 말토오스를 사용하였을 때 가장 높은 것으로 확인되었고, 이러한 최적의 조건들로 최종 테스트를 진행한 결과, 24시간째 140.06±0.71 mM의 GABA가 생성되었고, 전환율은 78.95%로 확인되었다. 또한 반코마이신을 포함한 10개의 항생제에 대한 감수성을 조사한 결과 내성이 없는 것을 확인하였다.
In the 40 years since the first benzodiazepine was brought into clinical use there has been a substantial growth in understanding the molecular basis of action of these drugs and the role of their receptors in anxiety disorders. Benzodiazepine receptors are present throughout the brain with the highest concentration in cortex, and it potentiate and prolong the synaptic action of the inhibitory neurotransmitter GABA. Central benzodiazepine receptors and $GABA_A$ receptors are part of the same macromolecular complex. Abnormalities of these $GABA_A$-benzodiazepine receptors as a result of drug challenge tests and neuroimaging studies may underlie some anxiety disorders. The role of $GABA_A$-benzodiazepine receptors in the action of benzodiazepine and as a factor in anxiety disorder, in both animal and humans including knock-out and knock in technique, may lead to new anxiolytics that have potentially significant therapeutic gains without unwanted side effects.
Vertebrate retinal neurons, like brain tracts farm complex synaptic relations in the enter and inner plexiform layers which ape equivalent to the central nervous system nuclei. The effects of $\gamma-aminobutyric$ acid(GABA) and glycine on retinal neurons were explored to discern the mechanisms of action of neurotransmitters. Experiments were performed in the superfused retina-eyecup preparation of the channel catfish, Ictalurus punctatus, using intracellular electrophysiological techniques. The roles of GABA and glycine as inhibitory neurotransmitters are well established in the vertebrate retina. But, we found that the depolarizing action of GABA and glycine on third-order neurons in the catfish retina. GABA and glycine appeared to act on retinal ueurons based on the observations that (1) effects on photoreceptors were not observed, (2) horizontal cells were either hyperpolarized $({\sim}33%)$ or depolarized $({\sim}67%)$, (3) bipolar cells were all hyperpolarized (4) amacrine and ganglion cells were either hyperpolarized $({\sim}37%)$ or depolarized $({\sim}63%)$, (5) GABA and glycine may be working to suppress presynaptic inhibition. The results suggest that depolarization of third-order neurons by GABA and glycine is due to at least two mechanisms; a direct postsynaptic effect and an indirect effect. Therefore, in the catfish retina, a mechanism of presynaptic inhibition or disinhibition including the direct postsynaptic effect may exist in the third-order neurons.
Park, Yong-Deuk;Park, Hyung-Seo;Cui, Zheng-Yun;Park, Hyoung-Jin
The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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제7권3호
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pp.169-174
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2003
${\gamma}$-Aminobutyric acid (GABA) has been reported to enhance exocrine secretion evoked not only by secretagogues but also by intrinsic neuronal excitation in the pancreas. The pancreas contains cholinergic neurons abundantly that exert a stimulatory role in exocrine secretion. This study was undertaken to examine effects of GABA on an action of cholinergic neurons in exocrine secretion of the pancreas. Intrinsic neurons were excited by electrical field stimulation (EFS; 15 V, 2 msec, 8 Hz, 45 min) in the isolated, perfused rat pancreas. Tetrodotoxin or atropine was used to block neuronal or cholinergic action. Acetylcholine was infused to mimic cholinergic excitation. GABA $(30{\mu}M)$ and muscimol $(10{\mu}M)$, given intra-arterially, did not change spontaneous secretion but enhanced cholecystokinin (CCK; 10 pM)-induced secretions of fluid and amylase. GABA (3, 10, $30{\mu}M$) further elevated EFS-evoked secretions of fluid and amylase dose-dependently. GABA (10, 30, $100{\mu}M$) also further increased acetylcholine $(5{\mu}M)$-induced secretions of fluid and amylase in a dose-dependent manner. Bicuculline $(10{\mu}M)$ effectively blocked the enhancing effects of GABA $(30{\mu}M)$ on the pancreatic secretions evoked by either EFS or CCK. Both atropine $(2{\mu}M)$ and tetrodotoxin $(1{\mu}M)$ markedly reduced the GABA $(10{\mu}M)$-enhanced EFS- or CCK-induced pancreatic secretions. The results indicate that GABA enhances intrinsic cholinergic neuronal action on exocrine secretion via the $GABA_A$ receptors in the rat pancreas.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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