Objectives : The purpose of this study was to investigate the mechanism of protective effect of Jinmu-tang (JMT, Zhenwu-tang) extract on $H_2O_2$-induced cell death in C6 glial cells. Methods : Cultured C6 glial cells of white mice were pretreated with JMT extract and exposed to $H_2O_2$ for inducing cell death. We measure the cell viability by 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay and investigate the cell morphology using a light microscope after crystal violet (CV) staining. Reactive oxygen species (ROS) formation was analyzed using a flow cytometer and a fluorescent microscope after staining with 2'7'-dichlorofluorescein diacetate (DCF-DA). DNA fragmentation was analyzed using a flow cytometer after propidium iodide (PI) staining and nuclei morphology was investigated using a fluorescent microscope after 2-[4-amidinophenyl]-6-indo-lecarbamidine dihydrochloride (DAPI) staining. We analyzed expression of Bax, processing of procaspase-3 and poly (ADP-ribose) polymerase (PARP), and activation of nuclear factor-${\kappa}B$ (NF-${\kappa}B$) by western blot method. Tumor necrosis factor-${\alpha}$ (TNF-${\alpha}$) secretion was analyzed using Quantikine kit. Results : We determined the elevated cell viability by JMT extract on $H_2O_2$-induced C6 glial cell death. ROS formation, DNA fragmentation, $I{\kappa}B{\alpha}$ phosphorylation, NF-${\kappa}B$ activation, and secretion of TNF-${\alpha}$ induced by $H_2O_2$ are inhibited by JMT extract pre-treatment. JMT extract inhibits Bax expression, processing of caspase-3 and PARP that are critical biochemical markers of apoptotic cell death. Conclusions : These results suggest that JMT extract has a protective effect on $H_2O_2$-induced C6 glial cell death in various pathways.
The ring-opening isomerization polymerization behavior of 2,5,6,7-tetrahydro-3H-imidazo[2,1-b] [1,3] oxazine(TII) has been studied under various conditions. The present study aimed at improving the low polymerizability of the above monomer (six-membered ring) up to a level comparable to that of 2,5,6-tetrahydroimidazo[2,1-b] [l,3] oxazole(TIO) (five-membered ring). The optimum result could be observed when methyl trifluoromethanesulfonate(MeOTf) and nitrobenzene were used as an initiator and a solvent in the polymerization at $60^{\circ}C$ for 24 h. Polymers were confirmed by$^1H$ NMR과$^{13}C$ NMR, and m measurements. The molecular weight obtained by gel permeation chromatography (GPC) corresponded to the molecular weight theoretically calculated from the feed ratio. The melting temperature ($T_m$) of TII was conspicuously different from that of TIO, because of the difference in the alkyl group.
2-Ethoxy-6-methoxy-5-cyano-3,4-dihydro-2H-pyran (1_a$), 2-n-butoxy-6-methoxy-5-cyano-3,4-dihydro-2H-pyr an (1b), 2-isobutoxy-6-methoxy-5-cyano-3,4-dihydro-2H-py ran ($1_c$), and 2-ethoxy-6-methoxy-3-methyl-5-cyano-3,4-dihydro -2H-pyran ($1_d$) were prepared by (4 + 2) cycloaddition reaction of methyl $\alpha$-cyanoacrylate with the corresponding alkyl vinyl ethers. Compounds $1_{a-d}$ were ring-open polymerized by cationic catalyst to obtain alternating head-to-head (H-H) copolymers. For comparison, head-to-tail (H-T) copolymer $3_a$ was also prepared by free radical copolymerization of the corresponding monomers. The H-H copolymer exhibited minor differences in its $1_H% NMR and IR spectra, but in the $^{13}C$ NMR spectra significant differences were observed between the H-H and H-T copolymers. Glass transition temperature ($T_g$) of H-H copolymer was higher than that of the H-T copolymer, but thermal decomposition temperature of the H-H copolymer was lower than that of the H-T copolymer. Compounds $1_a$, $a_b$, and $1_c$, copolymerized well with styrene by cationic catalyst, but compound 1d failed to copolymerize with styrene. All of the H-H and H-T copolymers were soluble in common solvents and the inherent viscosities were in the range 0.2-0.4 dl/g.
To elucidate the physiological and biochemical differences between chondrichthyes and osteichthyes, the properties of the specific digestive enzymes in cat-shark, Cephaloscyllium umbratile, and mackerel, Scomber japonicus, were studied. Homogenous trypsin proved through the disc-electrophoresis, SDS-PAG electrophoresis and gel filtration was obtained from the pancreas of cat-shark by $50-70\%$ saturated ammonium sulphate fractionation, DEAE-Sephadex A-50 column chromatography, benzamidine-Sepharose 6B affinity chromatography and Sephadex G-75-120 gel filtration. Two types of trypsins were also obtained from the pyloric caeca of mackerel by $30-70\%$ saturated ammonium sulphate fractionation and the slightly modified procedure from the method adopted in the purification of cat-shark trypsin. The two trypsins, designated trypsin A and B, were proved their homogeneity by disc- and SDS-PAG electrophoresis and gel filtration. The molecular weights of the trypsins were estimated to be 31,700 for cat-shark trypsin, 30,000 for mackerel trypsin A and 29,000 for mackerel trypsin B by SDS-PAG electrophoresis, but those were estimated to be 21,500 for cat-shark trypsin, 23,700 for mackerel trypsin A and 21,500 for mackerel trypsin B by gel filtration. The trypsins exhibited their optimum conditions at pH 9.0 and on temperature ranged from $45^{\circ}C\;to\;50^{\circ}C$ for cat-shark, and at pH 8.0 and a temperature of $50^{\circ}C$ for mackerel trypsin A and B, respectively. The cat-shark trypsin was stable at pH 10.0 and the temperature below $10^{\circ}C$, whereas the mackerel trypsin A and B, were stable in the range over pH 7.0 to pH 9.0 below $10^{\circ}C$ and at pH 8.0 below $35^{\circ}C$, respectively. The mackerel trypsins were severely inhibited by some heavy metal ions such as $Ag^{2+},\;Cu^{2+}\;and\;Hg^{2+}$ compared to cat-shark trypsin. All of the enzymes were also inhibited by antipain, leupeptin, TLCK(tosyllysine chloromethyl ketone) and SBTI(soybean trypsin inhibitor) remarkably. The inhibitory effects of PMSF(phenylmethane sulphonylfluoride), DFP(diisopropyl fluorophosphate) and benzamidine were indicated that these enzymes belong to serine-proteases.
When ginsenoside $R_{*}$b1/ and $R_{b2}$ were anaerobically incubated with human fecal microflora, these ginsenosides were metabolized to compound K (IH-901). When ginsenoside $R_{g3}$ was anaerobically incubated with human fecal microflora, the ginsenoside $R_{g3}$ was metabolized it to ginsenoside $R_{h2}$. Among ginsenosides, IH-901 and 20(S)-ginsenoside $R_{h2}$ exhibited the most potent cyotoxicity against tumor cells: 50% cytotoxic concentrations of IH-901 in the media with and without fetal bovine serum (FBS) were 27.1-31.6 $\mu$M and 0.1-0.61 $\mu$M, and those of 20(S)-ginsenoside $R_{h2}$ were 37.5->50 and 0.7-7.1 $\mu$M, respectively. The cytotoxic potency of ginsenosides was IH-901>20(S)-ginsenoside R $h_{h2}$》20(S)-ginsenoside $R_{g3}$>ginsenoside $R_{b1}$(equation omitted) $R_{b2}$.EX>$R_{b2}$./.
An extracellular xylanase of Bacillus stearothemophilus was purified to a single protein through a sequency of operations including ammonium sulfate fractionation, DEAE Sepharose CL-6B ion exchange chromatography, Sephadex G-100 gel filtration and heat treatment. The purified enzyme had a moleular weight of 170, 000. the pH and temperature optima for the enzyme activity were pH 9.0 and $55^{\circ}C$, respectively. The activity was enhanced by $co^{2+} \; and\; Mn^{2+}$, and inhibited by $Hg^{2+}$. Pattern of hydrolysis demonstrated that the xylanase was an endo-splitting enzyme able to break down larchwood xylan at random giving xylobiose and xylotriose as the main end products.
가장 효과적인 H-2b 항원에 대한 시험관내 항체 생산 조건을 찾기 위하여 근교계 생쥐인 C57BL/6BySnj의 비장세포를 UV로 불활성학 시킨 후 항원으로 사용하고, A/wySnJ$\times$Sm/J(ASmJF1, hybrid)의 비장세포를 항원 수용자 계통으로 하여 5-7일동안 배양기에서 항체 생산을 유도하였다. 본 실험에서 T 임파구 대식세포와 임파구 분화 촉진 인자인Concanavalin A Lipopolvsaccharide. Pokeweed mitogen 등을 사용하여 20가지 조건으로 실험을 수행하여, 항체 생성 여부는 보체 의존성 세포 장애 실험과 면역 효소법에 의해 조사하였다 그 결과 모든 조건에서 항체생산이 확인되었으며. 가장 좋은 시험관내 항체 생산 조건으로는 T 임파구와 대식세포를 함께 사용하여 면역시킨 것이 가장 효과적이었다. 이 방법을 이용하여 항체 생산을 유도한 후 5일째 면역된 비장세포를 Sp2/0-Ag 14와 세포 융합시켜 H-2b 마우스의 체포 표면 항원에 대한 단일군항체 생산을 시도하였다. 또한 생체내 면역 방법과 비교하기 위해 6주간 C57BL/6BySnJ의 비장세포를 복강내에 주사하여 같은 조건으로 세포융합을 시도하였다. 그 결과 H-2b 세포의 표면 항원에 대한 항체 생산을 하는 세포군은 시험관내 면역 방법에서 3개 생체내 면역 방법에서 4개부 확인되었다.
Two new barium vanadium borophosphate compounds, $(NH_4)_2(C_2H_{10}N_2)_6[Ba(H_2O)_5]_2[V_2P_2BO_{12}]_6{\cdot}8H_2O$, Ba-
VBPO1 and $(NH_4)_8(C_3H_{12}N_2)_4[Ba(H_2O)_7][V_2P_2BO_{12}]_6{\cdot}17H_2O$, Ba-VBPO2 have been synthesized by
interdiffusion methods in the presence of diprotonated ethylenediamine and 1,3-diaminopropane. Compound
Ba-VBPO1 has an infinite chain anion (${[BaH_2O)_5]_2[V_2P_2BO_{12}]_6}$$^{14-}$, whereas Ba-VBPO2 has a discrete
cluster anion {[$Ba(H_2O)_7][V_2P_2BO_{12}]_6$}$^{16-}$. Crystal Data: $(NH_4)_2(C_2H_{10}N_2)_6[Ba(H_2O)_5]_2[V_2P_2BO_{12}]_6{\cdot}8H_2O$,
triclinic, space group P$\overline{1}$ (no. 2), a = 13.7252(7) $\AA$, b = 15.7548(8) $\AA$, c = 15.8609(8) $\AA$, α = 63.278(1)$^{\circ}$, $\beta$ =
75.707(1)$^{\circ}$, $\gamma$ = 65.881(1)$^{\circ}$, Z = 1; $(NH_4)_8(C_3H_{12}N_2)_4[Ba(H_2O)_7][V_2P_2BO_{12}]_6{\cdot}17H_2O$, monoclinic, space group
C2/c (no. 15), a = 31.347(2) $\AA$, b = 17.1221(9) $\AA$, c = 22.3058(1) $\AA$, $\beta$ = 99.303(1)$^{\circ}$, Z = 4.
Purple membrane from Halobacterium halobium was incorporated into 7.5% polyacrylamide gels. Absorption and circular dichroic spectra of purple membrane incorporated with gels were obtained at various pH. The spectra of these gels measured at pH 7.0 were essentially identical with those obtained in the aqueous suspension of purple membrane. Acid titration of the gels showed the transition to a form absorbing at 605nm $(bR_{605}^{acid}$) at pH 2.6, and to a second form at 565nm $(bR_{565}^{acid})$ at pH 0.8. Dark-adapted gels showed an isosbestic point for each transition whereas light-adapted gels did not. Visible CD spectra of $bR_{570}^{LA},\;bR_{305}^{acid}\;and\;bR_{565}^{acid}$ all showed the typical bilobed pattern. CD spectra measured at UV wavelength region were also independent of the variation of pH in terms of molar ellipticity and spectral shape. The protonated species $bR_{605}^{acid}$ may be one of the intermediates formed during the normal photochemical cycle of purple membrane. Most probably, the species $bR_{605}^{acid}$ is considered to be $O^{640}$ in the cycle.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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