Journal of fish pathology (한국어병학회지)

The Korean Society of Fish Pathology (한국어병학회)
권호 표지

Evaluation of the stability of IgM and specific antibody response of sevenband grouper Epinephelus septemfasciatus for application of antibody-detection ELISA

항체검출 ELISA 적용을 위한 능성어 IgM의 안정성 및 특이 항체 반응 평가

  • Kim, Chun-Seob (Division of Food Science and Aqualife Medicine, Chonnam National University) ;
  • Jang, Min-Seok (Division of Food Science and Aqualife Medicine, Chonnam National University) ;
  • Kim, Wi-Sik (Division of Food Science and Aqualife Medicine, Chonnam National University) ;
  • Kim, Jong-Oh (Division of Food Science and Aqualife Medicine, Chonnam National University) ;
  • Kim, Du-Woon (Division of Food Science and Aqualife Medicine, Chonnam National University) ;
  • Kim, Do-Hyung (Division of Food Science and Aqualife Medicine, Chonnam National University) ;
  • Han, Hyun-Ja (Division of Food Science and Aqualife Medicine, Chonnam National University) ;
  • Jeong, Sung-Ju (Division of Food Science and Aqualife Medicine, Chonnam National University) ;
  • Oh, Myung-Joo (Division of Food Science and Aqualife Medicine, Chonnam National University)
  • 김춘섭 (전남대학교 식품.수산생명의학부) ;
  • 장민석 (전남대학교 식품.수산생명의학부) ;
  • 김위식 (전남대학교 식품.수산생명의학부) ;
  • 김종오 (전남대학교 식품.수산생명의학부) ;
  • 김두운 (전남대학교 식품.수산생명의학부) ;
  • 김도형 (전남대학교 식품.수산생명의학부) ;
  • 한현자 (전남대학교 식품.수산생명의학부) ;
  • 정성주 (전남대학교 식품.수산생명의학부) ;
  • 오명주 (전남대학교 식품.수산생명의학부)
  • Published : 2009.12.01
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Abstract

The stability of immunoglobulin M (IgM) on different serum storage conditions and specific antibody response were tested using the serum collected from sevenband grouper Epinephelus septemfasciatus by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). To test the effect of storage temperature and duration, sevenband grouper antiserum against bovine serum albumin (BSA) was stored at -80, -20 or 4${^{\circ}C}$ for 1, 34, 61 or 119 days. In addition, to test the effect of repeated freeze-thawing condition, the anti-BSA fish serum was frozen at -20 and -80${^{\circ}C}$ and then thawn and frozen for 1, 5 or 10 times repeatedly. Consequently, no significant difference was found in ELISA optical density (O.D.) values of sera for the above mentioned storage conditions: different temperatures (-80, -20 and 4${^{\circ}C}$), durations of storage (1, 34, 61 and 119 days), and repeated thaw-freeze cycles (1, 5, and 10 times), indicating that IgMs of test fish were stable. The specific antibody response of sevenband grouper was observed after BSA-immunization of the test fish reared at 20 ${^{\circ}C}$ or 25${^{\circ}C}$. At the rearing temperature of 20${^{\circ}C}$, the specific antibody against BSA first appeared at 14 days and maximum antibody titer was observed between 21 and 28 days, while at the rearing temperature of 25 ${^{\circ}C}$, specific antibody appeared at 7 days and maximum antibody titer was observed between 14 and 21 days. In conclusion, the rearing temperature at 25${^{\circ}C}$ gave a faster and higher specific antibody response than at 20${^{\circ}C}$ and the specific antibody response maintained for approximately 2 months at 20℃ and 25${^{\circ}C}$.

본 연구에서는 능성어를 대상으로 항체 검출 ELISA법을 적용하기 위한 기초 연구로서 능성어 혈청의 보존 조건에 따른 IgM의 안정성을 검토하였으며, 또한 항체 검출 ELISA법을 통해 능성어의 특이 항체반응을 조사하였다. 항 BSA 능성어 혈청을 사용하여 보존 온도 (-80, -20 및 4${^{\circ}C}$) 및 기간 (1, 34, 61 및 119일)에 따른 ELISA값을 비교한 결과, 모든 시료에 서 뚜렷한 O.D.값의 차이는 확인되지 않았다. -80${^{\circ}C}$ 및 -20${^{\circ}C}$에 보존된 혈청을 사용하여 해동 횟수 (1, 5, 10회)에 따른 ELISA O.D.값을 비교한 결과, 해동을 반복한 혈청 및 미동결 혈청의 O.D.값은 뚜렷한 차이를 보이지 않았다. 이상의 결과로 능성어 혈청은 -80, -20 및 4${^{\circ}C}$에서 119일간 보존하거나 10회 반복 해동하여도 능성어 IgM의 안정함이 확인되었다. 사육수온에 따른 능성어의 특이적 항체 반응을 조사한 결과, 20${^{\circ}C}$에서 사육중인 능성어에서 는 BSA 면역 후 14일째부터 BSA에 대한 특이 항체가 확인되었고, 21일-28일에 가장 높은 항체가를 나타냈으며 그 후 항체가는 서서히 떨어졌으나 면역 70일째에도 BSA에 대한 특이 항체는 관찰되었다. 반면 25${^{\circ}C}$에서 사육중인 능성어에서는 7일째부터 항체가가 확인되었고, 14일-21일 가장 높은 항체가를 나타냈으며 그 후 항체가는 서서히 떨어져 면역 70일째에는 0.4-1.6의 O.D. 값이 관찰되었다. 이상의 결과로 능성어의 특이 항체 반응은 20${^{\circ}C}$보다 25${^{\circ}C}$에서 항체 형성이 빠르고 항체가도 높게 나타나는 것이 확인되었으며, 또한 20${^{\circ}C}$와 25${^{\circ}C}$에서 사육중인 능성어에서 특이 항체반응은 약 2달간 지속됨이 확인되었다.

Keywords

References

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