Calmodulin of Olive Flounder Paralichthys olivaceus : Cloning and Expression Analysis

Calmodulin은 $Ca^{2+}$ 결합단백질로서 생체 내에서 $Ca^{2+}$ 의존적 기작을 통하여 다양한 생물학적 기능에 관여한다. 본 연구에서는 넙치 Paralichthys olivaceus의 cDNA library로부터 Calmodulin cDNA를 분리 동정하였다. 염기 서열 및 아미노산 서열을 분석한 결과, 넙치 Calmodulin cDNA는 782개의 nucleotides로 구성되어 있고, 4개의 잘 보존된 $Ca^{2+}$결합 motifs (EF-I, EF-II, EF-III, EF-IV)를 가지는 149개의 아미노산 잔기를 전사할 수 있는 open reading frame을 포함한다. 또한 번역된 아미노산 서열은 인간, 쥐, zebrafish, 개구리의 Calmodulin 아미노산 서열과 100% 동일성을 보이며 보라성게, 침팬지의 Calmodulin 아미노산 서열과 각각 97, 99%의 동일성을 보인다. 넙치 Calmodulin 전사체는 뇌와 장 조직에서 많은 양이 발현되었고, 신장, 아가미, 눈, 근육, 피부, 지느러미에서도 발현이 관찰되었다. 또한 넙치 Calmodulin 전사체는 수정 후 7일째의 발생 초기 단계 시료에서도 발현되어 수정 후 34일째까지 그 발현이 서서히 증가하였다. 이상의 결과들로부터 넙치 Calmodulin은 넙치의 발생 초기 단계에서 필요한 단백질로 생각되며 아마 항상성 유지에 중요한 역할을 할 것으로 예상된다.

Calmodulin (CaM) is a $Ca^{2+}$-binding protein essential for biological functions mediated through $Ca^{2+}$-dependent mechanism. A cDNA clone for CaM was isolated from a cDNA library of olive flounder Paralichthys olivaceus. The CaM cDNA concists of 782 bp and encodes a polypeptide of 149 amino acids with four $Ca^{2+}$-binding motifs EF-hands (EF-I, EF-II, EF-III, and EF-IV). The deduced amino acid sequence of CaM shows 97-100% amino acid sequence identity to other CaM sequences. Semi-quantitative PCR analysis revealed that the CaM transcription was began during early development and the CaM mRNA is expressed highly in brain and intestine, and moderately in kidney, gill, and eye of healthy olive flounder. Taken together, CaM may be necessary for early olive flounder development and that it may have a part in homeostasis.